大鼠胰岛分离条件的优化

目的:优化大鼠胰岛分离纯化的条件,为胰岛移植实验奠定基础。方法:通过胆总管灌注胶原酶P来消化大鼠胰腺,分离胰岛,采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛,观察胶原酶浓度、消化时间以及大鼠体重对胰岛分离结果的影响。双硫腙染色鉴定胰岛,丫啶橙/碘丙啶染色鉴定胰岛细胞活率,糖刺激胰岛素释放试验评价胰岛功能。结果:胶原酶浓度、消化时间以及大鼠体重对胰岛分离结果有重要影响。1mg/ml胶原酶P在37℃静止消化45分钟条件下,胰岛分离效果最佳,效果较其他酶浓度和消化时间条件下好(P＜0．05)。体重350g的大鼠的胰岛收获量778．33±80．21IEQ/胰腺,而体重250g的大鼠的胰岛收获量655．00±56．56 IEQ/胰腺(P＜0．05)。优化条件下分离的胰岛其纯度＞90%,胰岛细胞活率＞90%,低糖(2．8mmol/L)、高糖(16．7mmol/L)刺激胰岛素释放分别为(5．40±1．75)mIU/L/30IEQ,(12．27±2．55)mIU/L/30IEQ(P＜0．05),刺激指数为2．33±0．29。结论:胶原酶浓度、消化时间以及大鼠体重影响胰岛分离结果,优化分离条件可改善大鼠胰岛分离结果。