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目的:研究解决半抗原分子单克隆抗体制备技术路径中遇到的在阳性杂交瘤细胞株筛选时无法排除载体蛋白问交叉反应影响的问题,以半抗原去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)为例。方法:在NE完全抗原免疫小鼠实施细胞融合后,分别包被牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)、BSA-NE、OVA-NE等4种不同抗原的酶标板平行检测细胞培养上清液;挑选BSA、OVA检测结果为阴性,BSA-NE、OVA-NE检测结果为阳性的孔内细胞进行克隆化筛选单克隆细胞。结果:本筛选方法可一次性从8板96孔板中筛选到13个符合要求的阳性孔,经3次克隆化后获得6株特异性强的杂交瘤细胞株。结论:本方法避免了载体蛋白间交叉反应对筛选的影响,改进了传统的单一指标筛选方法,筛选效率更高。 相似文献
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自身抗体检测蛋白芯片制备条件的优化及初步应用 总被引:2,自引:0,他引:2
选择临床上常用的用于自身免疫性疾病抗体检测所对应的12种抗原, 运用NBT/BCIP显色反应策略, 研制一种可同时检测12种常用自身抗体的蛋白芯片检测系统。应用NBT/BCIP终点检测体系对每一种抗原的点样液、点样浓度、血清稀释度进行优化, 制备出可同时检测12种自身抗体的蛋白芯片, 并通过对678例病人血清和120例非病人血清的检测进行敏感度和特异度评价。优化的点样液为0.1%TBST, 血清稀释度为1:4, 12种抗原的最佳点样浓度分别为: ANA 520 mg/mL, Ro-60/SSa 465 mg/mL, La/SSb 530 mg/mL, Jo-1 530 mg/mL, Scl-70 525 mg/mL, Sm 520 mg/mL, Ro-52/SSa 615 mg/mL, RF 340 mg/mL, CCP 465 mg/mL, u1RNP 410 mg/mL, CENP-B 490 mg/mL, dsDNA 580 mg/mL; 通过对678份阳性血清和120份阴性血清的检测, 该蛋白芯片技术对12种自身抗体检测的敏感度在80%~96.3%之间, 特异度在86.7%~100%之间, 与传统的检测技术有较高的符合率。我们研究的自身抗体检测蛋白芯片技术体系具有快速、方便、高通量、廉价等优势, 易于商业化, 适合不同条件的临床需要。 相似文献
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利用N-溴代琥珀酰亚胺化学修饰叶绿体腺三磷酶,测得该该酶含3.5个色氨酸残基,其中2个色氨酸残基与酶活性有关。光氧化腺三磷酶伴随吸氧量增加,酶活性逐渐降低,经NBS修饰或光氧化的腺三磷酶,其免疫抗原减弱。表明腺三磷酶中色氨酸基参与酶的活性和抗原性。 相似文献
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叶绿体类囊体膜蛋白质磷酸酯酶 总被引:3,自引:0,他引:3
概述了植物蛋白质磷酸酯酶的研究现状,重点介绍了叶绿体类囊体膜蛋白质磷酸酯酶的分离、纯化、定位、影响酶活力的因子,以及酸在类囊体膜蛋白质磷酸化调节中表现出的多样性。 相似文献
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研究了蛋白质化学交联剂二氟二硝基苯对叶绿体类囊体膜功能的效应。检测到DFDNB抑制光合磷酸化,降低光照诱导类囊体膜的质子吸收和9-氨基吖啶(9-AA)的荧光猝灭,降低电色效应的快相上升,显抑制膜上腺三磷酶的活性,DFDNB和游离的腺三磷酶进行交联反应,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,交联后的酶出现新的蛋白染色带。 相似文献
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王国强 《分子细胞生物学报》1989,(2)
叶肉组织在光照绿化期间,有关光合能量转换系统的结构形成和功能发生之间的关系早已为人注意。七十年代末,提出叶绿体偶联因子复合物概念后,这种复合物的分离纯化和亚单位结构功能的研究甚为活跃,但在叶肉组织绿化过程中,这种复合物的亚单位和功能发生之间的情况,尚未见有人报告。我们利用控制光照时间培育了绿苗、黄化绿苗和黄化苗,制备出各自的胞质体,从中分离和部分纯化出它们的偶联因子复合物,比较了它们的异同。一、豌豆叶绿体和黄化叶绿体的光合磷酸化和交换反应活性比较豌豆种籽萌芽后经人工光照(每日光照16小时,黑暗8小时)两天后,进行黑暗处理六天,从这种黄化绿苗提出黄化叶绿体,对照则是正常绿苗所制备的叶绿体。两种胞质体的光 相似文献
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醋酸酐处理叶绿体导致与偶联因子有关的部分反应不可逆的失活,这些反应包括偶联的电子传递、光合磷酸化、膜上腺三磷酶活性、~(32)P?ATP交换和质子吸收。低浓度醋酸酐处理叶绿体,只抑制偶联的电子传递而不影响基础电子传递,表明能量转换的偶联机构对醋酸酐的化学作用更为敏感。膜上偶联因子在合成、水解和交换腺三磷的能力上,均因醋酸酐的作用而减弱。偶联因子中具有这些能力的活性部位可能就是醋酸酐的作用靶子。利用在不同pH的反应介质中测最大反应速度而求出参与酶活性中心的氨基酸pK估计值的方法,认为醋酸酐可能修饰了膜上偶联因子活性部位的氨基残基。 相似文献
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目的:观察复方玄驹胶囊联合左卡尼汀口服液治疗不同程度的特发性少弱精症的临床疗效。方法:选择2010年6月.2012年9月就诊于内蒙古医科大学第一附属医院的少弱精症者300例,其中重度少、弱精症者70例(治疗l组),中度少、弱精症者110例(治疗2组),轻度少、弱精症者120例(治疗3组)。另选择同期来我院进行健康体检者100例,将其作为对照纽。治疗组口服左卡尼汀口服溶液及复方玄驹胶囊,持续时间3个月。每一位被研究对象都在治疗前后定期进行血常规、尿常规、肝功能和肾功能四个方面的检查,同时观察服药患者在治疗过程中发生的不良反应。并对精液量、精子密度、A级精子等指标进行观察和比较。轻中度患者观察其(A+B)级精子,重度患者观察其(B+C)级精子,同时评价其治疗前后的生育能力,并与对照组比较。结果:与治疗前比较,治疗1、2、3组治疗后精液量[(3.7±1.6、3.7±1.1、3.8±1.2)mL]、精子密度[(3.4±1.4、23.2±1.8、39.6±14.2)(mol/L)]、A级精子[(3.6±2.5、15.6±6.3、28.6±9.6)%]、(A+B)级精子、(B+C)级精子比例、生育力指数(0.2±0.0、0.8±0.1、1.4±0.1)均升高明显,差异显著(P〈0.05);与对照组比较,治疗1、2、3组治疗前均有所减少,治疗1、2组治疗后虽有所上升,但还是显著低于对照组(P〈0.05),治疗3组治疗后与对照组差异不大,提示该方法对轻度少、弱精症者效果较重、中度好。结论:左卡尼汀配合复方玄驹胶囊对特发性少弱精子症效果显著。 相似文献