棒状杆菌原生质体的制备方法

AS1.1001等棒杆菌采用常规方法去壁比较困难。观察了青霉素对AS1.1001形成原生质球的影响。结果,0.3微克/毫升苯唑青霉素钠处理高渗溶液中的对数期细胞2小时,即已能形成原生质球。应用青霉素加溶菌酶技术,可明显提高营养缺陷型突变株拈出率。还试验了以这一技术,制备了疑为AS1.1001菌的质粒DNA。     

L-异白氨酸发酵的研究IV．L-异白氨酸生物合成调节机制的初步研究

钝齿棒状杆菌新种AS 1．542,及其诱变株AS 1.998均含有Tdase、AHAase及Taase活性。试验了二价离子及pH对酶活性的影响。测定了Tdase及AHAase受末端氨基酸反馈抑制的程度,及表观米氏常数。结果表明,Tdase及AHAasc均有两个酶反应最适pH。Leu、Ileu、Val及KB对酶活性均有负反馈抑制作用。AS 1.998的Tdasc受Ileu、Val的负反馈抑制作用减少;其AHAase总活性明显增加。由此认为诱变株AS 1.998受到的末端氨基酸反馈控制作用被部份解除,从而导致该菌积累Jleu．     

一株两氨酸高产菌

<正> α-丙氨酸目前世界年产量约200吨,年增长率属于各类氨基酸之首,其生产有直接发酵法、天门冬氨酸脱羧酶法及丙酸合成法等,在直接发酵法中,我们曾用Arthrobac tec SP. AS1.8号菌从葡萄糖产生2.3%的丙氨酸,有报导用Brevi bacterium ge lat inosum菌可得到40%的产率。     

L-缬氨酸生物合成调节机制的初步研究

比较了钝齿棒状杆菌(Corynebacterium crenatum)AS1.542及其积累缬氨酸的诱变株AS1.1001的L-苏氨酸脱氨酶(TDase)与α-乙酰羟酸合成酶(AHASase)活性,及受各种氨基酸反馈抑制的程度。AS1.1001菌TDase对苏氨酸的K_m值为4.5mM,AHASase对丙酮酸的K_m值为3.4mM。缬氨酸、异白氨酸及丁酮酸对AHASase表现出竞争性抑制,其K_i值依次为0.39、0.52及2.37mM。TDase的Hill系数随苏氨酸浓度增加,从1.2升至3.2。AHASase的Hill系数则为1.2左右。认为TDase活性降低,AHASase活性增加,缬氨酸与异白氨酸的反馈抑制程度减轻,导致了缬氨酸的过量累积。据此初步探讨了缬氨酸生物合成途径及调节机制。     

L—缬氨酸生物合成的研究——Ⅰ.钝齿棒状杆菌 AS1.1001发酵产生 L—缬氨酸的条件

从钝齿棒状杆茵A S1.542诱变获得L—缬氨酸产生茵A S1.1001(AHVr,ILeu~-)。摸索了各种糖类、核酸碱基、维生素、L—异白氨酸、α—酮丁酸及有机营养物等对缬氨酸积累的影响,在适宜条件下,缬氨酸积累可达3.6%。     

L-异白氨酸发酵的研究II．用糖质原料直接发酵生产L-异白氨酸

由钝齿棒状杆菌(Corynebacterium crenatum) AS 1.542经亚硝基脏诱变获得抗弘氨基a-氨基-β-羟基戊酸的突变株AS1.998,它的生长不再受外加的L-异白氨酸抑制。在含葡萄糖10％,硫酸铵4．0％,磷酸氢二钾0．1％,玉米浆0．75％,麸皮水解液0．5％,碳酸钙4.5%的培养基中,接种置2．5％,28℃振荡培养3天,L-异白氨酸的积累量达14毫克／毫升以上。用铜盐法制备的产品,经纸上层析,聚酰胺薄膜层析、比旋光度测定和生物鉴定,确证是L一异白氨酸。     

利用谷氨酸生产菌转化生产L-天门冬氨酸

L-天门冬氨酸在生理代谢上具有重要作用,是高血氨症、心肌功能障碍、脑神经机能亢进和肝脏系统疾病的有效治疗药物,又可作为合成高效无毒甜味剂的原料。利用微生物生产L-天门冬氨酸的方法较多,近几年来又有关于     

L-苏氨酸产生菌的选育

以亚硝基胍(MNNG)诱变处理大肠杆菌ASI．358,获得蛋氨酸缺陷型(Met-)突变株,从中得到一株B2851菌,能在培养基中积累少量苏氨酸。通过连续诱变,得K1-73菌株(Met-),在5％葡萄糖与DL-蛋氨酸舔加量为75mg／l的条件下,能够积累3．5mg／ml L-苏氨酸。同样以MNNG诱变处理钝齿棒状杆菌C. crtenalum ASI．542,获得抗a一氨基一β一羟基戊酸(AHV)突变株1770林,其中6％菌株能够积累少量苏氨酸。选得LR—1458菌产L一苏氨酸(1mg／ml。 对该菌逐步诱变,得一株抗8mg／ml AHV及蛋氨酸缺陷型双重突变株(AHV,Mer) LRA-96,其L一苏氨酸产率与亲株比较有明显提高,达3．5mg／ml。连续再诱变并结合单菌落分离选育,得一突变株m一85(AHV,Met-),能在培养基中积累13mg／ml L-苏氨酸。试验表明,连续诱变处理是选育L一苏氨酸高产菌株有效手段之一。     

一株两氨酸高产菌

<正> α-丙氨酸目前世界年产量约200吨,年增长率属于各类氨基酸之首,其生产有直接发酵法、天门冬氨酸脱羧酶法及丙酸合成法等,在直接发酵法中,我们曾用Arthrobac tec SP. AS1.8号菌从葡萄糖产生2.3%的丙氨酸,有报导用Brevi bacterium ge lat inosum菌可得到40%的产率。