作用于HBV（adr亚型）RNA的tRNA—包埋锤头状核酶的研究

设计了针对ＨＢＶ（ａｄｒ亚型）ＲＮＡ的二个锤头状核酶（ＲＳ３和ＲＣ２）,并将其插入ｔＲＮＡ反密码环中（ＲｔＳ３和ＲｔＣ２）,以增加其稳定性。实验表明,虽然插入ｔＲＮＡ中的核酶与裸露核酶相比,催化活性有所下降,但在胎牛血清和ＨｅｐＧ２细胞抽提液中的稳定性却明显提高。因此,ｔＲＮＡ－包埋核酶有可能提高在体内的抗病毒能力。     

tRNA-包埋核酶在HepG2细胞中的抗HBV活性

已知 ｔ Ｒ Ｎ Ａ 包埋核酶比裸露核酶在胎牛血清和 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞抽提液中有较高的稳定性 构建了 ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 启动子驱动下的抗 Ｈ Ｂ Ｖ（ａｄｒ 亚型）的 ｔ Ｒ Ｎ Ａ 包埋核酶基因质粒,与携带 Ｈ Ｂ Ｖ 基因的ｐ１２Ⅱ质粒共转染 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞,用 Ｇ４１８ 筛选抗性细胞 分析稳定表达细胞中的 Ｈ Ｂ Ｖ Ｒ Ｎ Ａ, Ｈ Ｂ Ｖ 抗原合成和新生 Ｄ Ｎ Ａ 合成,表明ｔ Ｒ Ｎ Ａ 包埋核酶比裸露核酶有较高的抑制 Ｈ Ｂ Ｖ 活性．ｔ Ｒ Ｎ Ａ 包埋核酶和裸露核酶分别使靶 Ｒ Ｎ Ａ 减少 ８２％ ～８７％ 和 ７５％ ～８１％ ,抗原减少 ７３％ ～８０％ 和７０％ ～７４％ 以及新生 Ｄ Ｎ Ａ 减少 ７４％ ～７６％ 和 ６７％ ～７１％ 结果指出,核酶,特别是 ｔ Ｒ Ｎ Ａ 包埋核酶,对 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞中 Ｈ Ｂ Ｖ 表达和复制有明显抑制作用,可能作为 Ｈ Ｂ Ｖ 基因治疗的手段之一      

乙型肝炎病毒B基因组在转基因小鼠内的表达和复制

采用受精卵显微注射方法,产生了41只整合有完整的乙型肝炎病毒(HBV)B基因组的转基因小鼠建立者。建立者基因组中所整合的HBV基因组都能以孟德尔方式向后代传递。在这些建立者中,有33只为HBsAg阳性,同时也为HBeAg阳性的有18只。对血清HBsAg和HBeAg同时阳性的8只小鼠进行免疫组化分析,发现在它们的肝和肾组织中也有HBsAg和HBeAg的存在,但不存在于脾、脑、肺、睾丸、皮呋、卵巢及肌肉组织中。进而又采用了     

锤头状核酶在HepG2细胞中抑制adr亚型的乙型肝炎病毒

针对HBV基因组设计了三种锤头状核酶－－RS3、RC2和RC1。将裸露的和用tRNA包埋的核酶（RtS3、RtC2和RtC1）基因插入RNA修剪质粒pRG523中,然后转变为真核表达载体,使用同样克隆技术,构建由不同长度（2、4、8、12个）RS3或12个RtS3连成的鸟枪型真核表达载体,将它们分别与带有HBV基因组的质粒共转染人肝癌细胞系HepG2,用G418筛选抗性细胞。分析不同种类的核酶在G418抗性细胞中的HBV抑制活性,包括子代HBV－DNA、HBV－RNA和抗原（HBsAg或HBcAg/HBeAg)表达的减少。结果表明,所有设计的核酶对HBV有＞70％的抑制活性,而tRNA包埋核酶的活性略高于裸露核酶。特别值得提出的是,由8个或12个相同核酶连接的鸟枪型质粒（8RS3、12RS3和12RsS3）具有很高的抑制HBV活性,达到＞9－％的抑制。