小型猪腹壁拉链模型的建立

目的建立小型猪腹壁拉链模型并对其生物学特性进行研究,为教学和科研工作的开展提供便利的研究工具。方法通过外科手术的方法将定制的生物拉链固定于小型猪体表,建立小型猪腹壁拉链模型,观察小型猪的体征和精神状态,利用全自动血液分析仪及尿液分析仪对其血液和尿液生化指标进行动态检测。结果模型建立后7-49d小型猪的活动、精神状态良好,其生理生化指标表现稳定,与对照相比无显著变化。结论本课题组建立的小型猪腹壁拉链模型建立后7-49d体征、精神状况良好,生理生化指标稳定,可以推广应用于相关的科研、教学试验。     

双色荧光杂交芯片在近交系小鼠遗传监测中的应用

应用一种新的高通量SNP检测方法-双色荧光杂交芯片技术进行近交系小鼠遗传监测。应用双色荧光杂交芯片技术对4个品系近交系小鼠的多个基因组DNA样本进行SNP分型,整合6个SNP位点的芯片杂交信息,对样本所属品系进行判断。研究结果表明SNP检测方法-双色荧光杂交芯片技术能够对选定的6个SNP位点进行高准确率分型;双色荧光杂交芯片技术是一种高通量SNP检测的良好工具,适合于对少量近交系品系来源的大样本量小鼠进行遗传污染监测和品系鉴定,并具有扩大应用的潜力。     

玉米蛋白及其水解产物对自发性高血压大鼠降血压作用的研究

目的探讨玉米蛋白及其水解产物对自发性高血压大鼠（SHR）血压的影响。方法 6～8周龄雄性SHR大鼠60只随机分为A组（玉米蛋白组）、B组（胃蛋白酶水解产物组）、C组（胰蛋白酶水解产物组）、D组（复合酶水解产物组）和E组（生理盐水对照组）,每组12只动物,均以1 g/kg体重剂量灌胃,测定灌胃0、1、2、4、6、8h后SHR血压值。结果胃蛋白酶水解产物、胰蛋白酶水解产物和复合酶水解产物在0～6 h内对SHR的血压升高具有明显抑制作用,其中0～2 h内降血压效果明显;各组水解产物中,以复合酶水解产物在0～6 h内降压效果最佳,SBP与生理盐水对照组、胃蛋白酶水解产物组和胰蛋白酶水解产物组相比具有极显著差异（P〈0.01）。结论玉米蛋白胃蛋白酶、胰蛋白酶和复合酶水解产物能有效地降低SHR大鼠的血压,为其在保健食品领域及医药方面的开发应用提供了参考。     

一项小鼠采血新技术——颌下静脉丛采血法

目的介绍小鼠颌下静脉丛采血方法。方法选用2月龄昆明小鼠,固定小鼠后,将采血注射针头刺入颌下静脉丛血管取血。结果单人操作约1 min内可完成小鼠颌下静脉丛采血,采血量达到0.3-0.5 mL。结论此方法无需麻醉、创伤小、采血量大并可重复采血,是一种简便、安全、快速、采血量多的采血方法。     

近交系小鼠双色荧光正相杂交芯片技术体系的建立和优化

目的探讨采用单核苷酸多态性（SNP）检测方法-双色荧光正相杂交芯片技术对近交系小鼠遗传质量监测及相关影响因素。方法运用基于芯片的双色荧光正相杂交检测SNP技术,进行芯片杂交动力学研究,考察信号值（Cy3,Cy5）和ratio值（Cy5/Cy3）与PCR产物点样浓度、PCR产物长度和荧光标记探针长度之间的关系,研究PCR产物点样浓度、PCR产物长度和荧光标记探针长度对SNP分型的影响。结果采用正反标记实验后,Ratio值随着PCR产物点样浓度的增加呈稳定趋势;PCR双链产物长度对信号值影响比较大,点样时其长度不宜太长,最好不超过450 bp;随荧光标记探针长度的增加,基因分型能力明显下降,长度为15 bp最佳,长度超过20 bp时,已基本没有区分能力。结论PCR产物点样浓度、PCR产物长度和荧光标记探针长度是双色荧光正相杂交SNP分型系统的重要影响因素,采取适当的PCR产物点样浓度、PCR产物长度和荧光标记探针长度,并采用正反标记实验,可以取得稳定、准确的基因分型效果。为进一步进行近交系小鼠遗传质量监测的研究奠定基础。     

黄曲霉素对裸鼹鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞基因表达的影响

目的:观察不同浓度黄曲霉素对裸鼹鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞(AEC II)相关因子m RNA表达的影响,探讨裸鼹鼠抵御肺癌的分子机制。方法:通过酶消化法分离裸鼹鼠肺组织细胞并用免疫黏附法进行纯化得到裸鼹鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞进行原代培养,40小时后,实验组分别给予不同浓度(0.25、0.5、1.0、2.0和4.0 mg/L)的黄曲霉素处理,溶剂对照组给予DMSO(0.4 m L/L)处理。黄曲霉素作用48小时后收集细胞,用实时定量PCR技术检测裸鼹鼠AECII细胞中的SP-C基因及TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-12等炎症因子的m RNA表达变化。结果:原代分离的裸鼹鼠AEC II细胞纯度70%,活性90%,可用于体外实验。定量PCR结果显示黄曲霉素使裸鼹鼠AEC II细胞SP-C表达水平显著下降,TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-12等炎症因子的表达水平在黄曲霉低于2 mg/L浓度的条件下没有显著变化。结论:裸鼹鼠AEC II细胞在黄曲霉素导致细胞受损的情况下,仍然保持较低水平的炎症因子表达,这可能是其抵抗肺癌的机制之一。     

K-Rasa^G12D基因突变体慢病毒载体的构建及其鉴定

目的：构建K-RasGl2D基因突变体慢病毒载体。方法：从病人组织中提取RNA通过RT—PCR反转录获得cDNA作为K-RasGl2D基因模板,通过PCR法扩增出K-RasGl2D基因突变体片段。将酶切的片段克隆入真核表达载体pCDH-CMV—MCS—EF1-RFP中,构建K-RasG12D基因突变体逆转录病毒真核表达载体。将连接产物转化至感受态大肠埃希菌DH5a,挑取转化平板上的细菌克隆,在抗生素培养液中培养过夜后进行PCR鉴定。经测序正确后转染293T细胞系,利用重组质粒PCR及串联基因表达的检测等方法对目的基因的转录与表达进行分析与鉴定。结果：所构建的K-RasGl2D突变体基因逆转录病毒真核表达载体经PCR鉴定和测序鉴定正确,转染293T细胞后可以观察到可检测到高强度表达的RFP荧光信号。结论：成功构建了重组真核表达载体,为下一步建立稳定转染细胞系及进一步研究K-Ras突变在癌症发病中的作用奠定了基础。     

NJS小鼠与其亲本小鼠遗传多样性的RAPD分析

目的分析NJS及其亲本小鼠的遗传结构.方法筛选出5条随机引物对NJS及其亲本小鼠的遗传结构进行RAPD分析,并对NJS小鼠个体之间的基因组DNA进行相似性分析.结果两种小鼠均有相同的扩增片段且产生了各自的特异性条带;NJS小鼠不同个体间拥有的RAPD条带也具有差异,但拥有相同条带的个体小鼠比率较高.该群体小鼠的相似系数(F)为0.927(0.880～0.980).结论 RAPD分析获得的多态性可用于NJS与其亲本小鼠之间的遗传分析;而且NJS小鼠个体间具有较好的遗传一致性和遗传稳定性,其群体分化程度处在一个较低的水平.     

凝血因子Ⅸ基因剔除小鼠的遗传及血液学指标检测

目的鉴定凝血因子Ⅸ基因剔除小鼠.方法采用PCR扩增检测小鼠的DNA样品以及采用一期法检定小鼠血浆FIX活性和血浆凝血酶原时间(plasma prothrombin time,PT)、白陶土部分凝血活酶时间(Kaolin partialthromboplastin time,KPTT)值.结果小鼠PCR检测为阳性,FIX活性＜5%.结论凝血因子Ⅸ基因剔除小鼠能稳定遗传,鉴定结果提示该小鼠符合人血友病B相应临床症状.     

纳米珍珠粉对大鼠钙吸收利用的影响

目的研究纳米珍珠粉对大鼠钙吸收利用的影响,并比较纳米和微米珍珠粉对大鼠生长发育和骨钙水平作用的差异。方法出生21d断乳SD大鼠100只,喂养低钙饲料2周。随机分为5组,雌雄各半,Ⅰ～Ⅱ组分别为微米珍珠粉低、高剂量组,喂饲饲料为低钙饲料混合不同剂量的微米珍珠粉;Ⅲ～Ⅳ分别为纳米珍珠粉低、高剂量组,喂饲饲料为低钙饲料混合不同剂量的纳米珍珠粉;Ⅴ组为低钙对照组,喂饲低钙饲料;另取10只SD大鼠为实验本底组(即Ⅵ组),Ⅵ组于实验开始前处死。实验期为4周。结果2个不同剂量的纳米珍珠粉组的大鼠体重、股骨干重及长度、钙吸收率、钙存留率均高于2个相应剂量的微米珍珠粉组,且差异有显著性(P<0.05)。结论纳米珍珠粉能够被大鼠很好地吸收利用,具有增加骨钙含量的功能,在钙吸收利用作用方面明显优于微米珍珠粉。