甜瓜雄性不育系不同发育时期雄蕊转录组分析

从分子水平探讨甜瓜雄性不育雄蕊发育不同时期差异表达基因与花粉败育的相关性,为探究甜瓜雄性不育发生机理提供依据。通过对甜瓜雄性不育系(Male sterile,MS)花蕾(直径为2和5 mm时期)雄蕊进行转录组测序,筛选差异表达基因,并对差异表达基因进行荧光定量分析。共发现224个差异表达基因,对差异表达基因进行GO功能分析显示,全部基因均归属于生物合成、分子功能和细胞组分3大分支,其中与酶类相关的差异基因为9个,2个差异表达基因为羧酸酯酶同源基因,4个为碳水化合物相关酶类的表达基因,细胞信号传导相关表达基因和玉米素生物合成相关表达基因各1个;qRT-PCR(Quantitative realtime PCR)验证表明,与碳水化合物相关酶类的表达基因和玉米素生物合成相关表达基因在雄性不育株2 mm花蕾雄蕊中的表达量均低于5 mm花蕾雄蕊中的表达量,与细胞信号传导相关表达基因在雄性不育株2 mm雄蕊中的表达量高于5 mm雄蕊中的表达量。雄性不育的发生与能量代谢相关基因表达量的上升和细胞信号传导相关表达基因表达量的减少存在一定的相关性。     

变形链球菌细胞壁对EAhy926细胞TLR4、IL-6和IL-8表达的影响

【目的】观察变形链球菌细胞壁对EAhy926细胞的增殖活性、TLR4的表达和炎性细胞因子IL-6和IL-8分泌的影响,初步探讨变形链球菌致血管内皮细胞TLR4表达、炎症反应及其两者之间的关系。【方法】变形链球菌细胞壁作用于EAhy926细胞,MTT法检测EAhy926细胞的增殖活性;RT-PCR法检测EAhy926细胞TLR4、IL-6和IL-8 mRNA的表达;流式细胞术检测EAhy926细胞表面TLR4的表达;细胞生物活性方法和ELISA分别检测EAhy926细胞IL-6和IL-8的分泌;抗体阻断实验观察IL-6和IL-8的表达与TLR4的关系。【结果】不同浓度的变形链球菌细胞壁作用6 h可促进EAhy926细胞的增殖(P0.05),但12 h后可明显抑制该细胞的生长(P0.05),呈现显著的时间和剂量依赖性。变形链球菌细胞壁作用于EAhy926细胞后,TLR4 mRNA和蛋白水平的表达量随着作用时间延长而逐渐增高,在16 h达到高峰,24 h后又逐渐下降(P0.01);IL-6和IL-8的表达也呈现明显的时间依赖性增高(P0.05)。经TLR4抗体阻断后,变形链球菌细胞壁刺激EAhy926细胞IL-6和IL-8的产生明显减少(P0.01)。【结论】变形链球菌细胞壁可明显抑制EAhy926细胞的生长,上调该细胞TLR4的表达,促进炎性细胞因子IL-6和IL-8的分泌;IL-6和IL-8的产生与TLR4的表达上调密切相关。     

重组丙型肝炎病毒核心蛋白的原核表达、纯化和抗体制备

本文旨在获得纯化丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(HCV-C)及抗HCV-C多克隆抗体,为深入研究HCV-C与肝细胞相互作用的分子机制奠定基础。首先以HCV1b亚型HC-J4-91全基因组质粒为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增HCV-C基因,构建重组质粒pQE31-HCV-C。融合蛋白经原核表达、纯化后,免疫BALB/c小鼠,制备抗HCV-C多克隆抗体。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,蛋白免疫印迹(Westernblot)和间接免疫荧光染色鉴定抗体特异性。结果显示,表达HCV-C的原核表达质粒pQE31-HCV-C构建正确,获得相对分子质量约22000的纯化融合蛋白。ELISA检测重组蛋白免疫小鼠的抗血清效价达1:12800。结果显示,自制的抗HCV-C多克隆抗体能特异性识别HCV-C。本研究获得了纯度较好、原核表达的HCV-C,并成功制备了抗HCV-C多克隆抗体,为深入研究HCV-C的致病机制提供了有实用价值的研究工具。     

颅脑外伤患者血浆内毒素检测的临床意义

目的 探讨内毒素检测对颅脑外伤的临床意义.方法 选取151例颅脑外伤和颅脑疾病患者,采用鲎试验动态比浊法检测血浆内毒素,同时检查ALT、AST、CHE、CRP等生化项目指标,分析检测结果的相互关系和临床意义.结果 颅脑外伤组患者的内毒素、CRP结果高于颅脑疾病对照组患者,差异有统计学意义(P=0.034,0.038);颅脑外伤组患者的昏迷指数低于颅脑疾病对照组患者,差异有统计学意义(P=0.038),其余两组检测结果差异均无统计学意义(P＞0.05).两组的内毒素检测结果与昏迷指数、CHE有负相关性(Pearson值=-0.293,-0.300),差异有统计学意义(P =0.001).结论 检测血浆内毒素含量可有效评估颅脑疾病患者病情严重程度,降低内毒素水平可防止并发症发生加重疾病.     

氯虫苯甲酰胺对草地贪夜蛾的毒力及田间防效

草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda(Smith)是威胁粮食安全的重要害虫,本文测定了氯虫苯甲酰胺对草地贪夜蛾的室内毒力及田间防效,从中筛选出高效的施药方法和施药剂量,为当前草地贪夜蛾防治提供合理用药的参考。结果表明,在室内条件下,使用氯虫苯甲酰胺直接喷雾处理对草地贪夜蛾3龄和4龄幼虫毒力最高,LC_(50)值分别为0.42 mg/L和0.57 mg/L,使用0.5 mg/L 20%氯虫苯甲酰胺悬浮剂对草地贪夜蛾幼虫毒力较高,在处理后第5天均有超过90%的死亡率。在田间条件下使用氯虫苯甲酰胺对草地贪夜蛾幼虫有较好的防效,使用60.0 g.a.i./ha 0.4%氯虫苯甲酰胺颗粒剂喇叭口点施防治低龄幼虫防效较好,药后第1天、第3天和第7天低龄幼虫(1～3龄)的防效分别为90.3%、100%和100%,使用22.5 g.a.i./ha 20%氯虫苯甲酰胺悬浮剂喇叭口喷雾防治高龄幼虫(4～6龄)的防效较好,药后第1天、第3天和第7天高龄幼虫的防效分别为71.7%、84.5%和95.3%。     

426株凝固酶阴性葡萄球菌临床分布及耐药性分析

目的:分析凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)的分布及耐药性,为临床合理应用抗菌药物提供理论依据.方法:对我院2005年1月-2007年12月临床分离的CNS采用琼脂纸片扩散法(K-B法)检测药敏.结果:在426株CNS中共分离13种菌,其中表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌分别为218株、103株、46株,各占51.17%、24.18%和10.80%;CNS对氟霉素、阿米卡星的耐药率小于25%,对万古霉素和替考拉宁的耐药率为0%;对青霉素、笨唑西林、红霉素、头孢西丁、哌拉西林、庆大霉素和环丙沙星的耐药率大于50%.从CNS中检出的耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)和甲氧西林敏感的凝固酶阴性葡萄球菌(MSCNS)分别为350株和76株,分别占82.16%和17.84%;MRCNS对多种抗菌药物耐药,与MSCNS相比差异有显著性统计学意义(p＜0.01).结论:需要加强量CNS病原学耐药性监测,了解其分布特点,及时向临床反馈公布,为临床医师合理应用抗菌药物提供依据.     

微囊藻毒素LR对人HL7702细胞蛋白磷酸酶2A的影响

微囊藻毒素能显著抑制蛋白磷酸酶2A的活性,是公认的一类肝毒素。为进一步研究微囊藻毒素作用于离体细胞后细胞中PP2A相关指标的变化,实验用不同浓度的MC-LR对人正常肝细胞HL7702染毒24h后检测细胞中PP2A亚基蛋白和mRNA水平,并检测3、6、12和24h作用后细胞内PP2A的酶活性。结果发现,除B55α蛋白表达有明显的下降趋势且1000 nmol/L组有显著性降低外,其他亚基的蛋白没有明显改变;15种PP2A亚基mRNA水平在100 nmol/L组都显著升高,而500和1000 nmol/L组分别有7种和6种亚基的mRNA表现出显著性降低。用不同浓度MC-LR染毒6h后,细胞内PP2A酶活有显著性降低,并且呈现剂量依赖性关系,而3、12和24h染毒后酶活性没有明显变化。以上结果表明:一定浓度的MC-LR作用24h后影响了HL7702细胞PP2A相关亚基的转录,但没有明显改变蛋白质水平;MC-LR对细胞内PP2A的酶活抑制作用与染毒时间密切相关。       

3种拟除虫菊酯类农药对草地贪夜蛾的毒力测定及田间应用效果评价

评价使用氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、高效氯氟氰菊酯喷雾和喇叭口点施处理对草地贪夜蛾的活性与防效,为草地贪夜蛾综合防控提供技术支持。采用喷雾法测定了3种农药原药对草地贪夜蛾3龄幼虫毒力;采用喷雾和喇叭口点施2种方式田间施用5.7%氟氯氰菊酯乳油、25 g/L溴氰菊酯乳油、5.0%高效氯氟氰菊酯乳油,药后第1天、第3天、第7天调查挂牌标记玉米上草地贪夜蛾活虫数,计算防治效果。3种拟除虫菊酯农药对草地贪夜蛾3龄幼虫LC 50值大小顺序依次为氟氯氰菊酯(29.80 mg/L)<高效氯氟氰菊酯(42.39 mg/L)<溴氰菊酯(49.88 mg/L);3种拟除虫菊酯类农药在54.00 g a.i./ha剂量下均能明显降低草地贪夜蛾田间虫口数量,同等剂量防效氟氯氰菊酯乳油>高效氯氟氰菊酯乳油>溴氰菊酯微乳剂。由于草地贪夜蛾低龄幼虫和高龄幼虫取食部位有差异,喷雾法防治低龄幼虫的效果好,喇叭口点施防治高龄幼虫的效果好。拟除虫菊酯类农药对草地贪夜蛾具有较好的防治效果,喇叭口点施方式节省药剂、提高对高龄幼虫的防效,在防治草地贪夜蛾等害虫方面具有广阔的应用前景。     

四氯虫酰胺玉米全株喷雾和喇叭口点施防治草地贪夜蛾的药效评价

评价四氯虫酰胺玉米全株喷雾和喇叭口点施处理对草地贪夜蛾的活性与防效,为草地贪夜蛾综合防控提供技术支持。采用叶片喷雾法,测定了对草地贪夜蛾2龄幼虫毒力;以40%辛硫磷乳油为对照药剂,采用喷雾和喇叭口点施两种方式田间施用10%四氯虫酰胺悬浮剂,药前1 d和药后1 d、3 d、7 d,调查挂牌标记玉米上草地贪夜蛾活虫数,计算防治效果。结果表明:四氯虫酰胺对草地贪夜蛾2龄幼虫具有良好的毒力;10%四氯虫酰胺悬浮剂制剂用量600 g/hm 2喷雾处理后1 d、3 d、7 d对草地贪夜蛾的防效分别为75.90%、91.91%和92.02%,制剂用量300 g/hm 2喇叭口点施处理后1 d、3 d、7 d对草地贪夜蛾的防效分别为82.28%、89.52%和91.23%,40%辛硫磷乳油制剂用量1500 g/hm 2处理,两种施药方式防效均不佳。四氯虫酰胺对草地贪夜蛾具有良好的防治效果,喇叭口点施方式节省药剂可达50%以上,在防治草地贪夜蛾等害虫方面具有广阔的应用前景。     

乙基多杀菌素悬浮剂对草地贪夜蛾的生物活性及田间防效

测定不同浓度乙基多杀菌素悬浮剂对草地贪夜蛾的生物活性,明确60 g/L乙基多杀菌素对入侵生物草地贪夜蛾的田间最佳使用稀释倍数、防治效果及安全性。室内活性测定采用浸叶法,并采用喷雾和喇叭口点施两种施药方式进行田间试验确定其药效。试验结果表明:25.00 mg/L乙基多杀菌素药液浸叶处理叶片后24 h和48 h,草地贪夜蛾3龄幼虫的死亡率分别为78.33%和97.67%。60 g/L乙基多杀菌素SC 1 000、1 500、2 000倍液喷雾处理后3 d,对草地贪夜蛾的防效分别为95.74%、87.05%和80.78%,处理后7 d为98.58%、90.38%、85.14%;60g/L乙基多杀菌素SC 1 000、1 500、2 000倍液喇叭口点施处理后1 d,对草地贪夜蛾的防效分别为93.22%、91.19%和80.73%,处理后7 d为99.28%、97.03%、92.73%。乙基多杀菌素对草地贪夜蛾幼虫具有较好的毒杀活性,田间试验中60 g/L乙基多杀菌素SC点施处理效果最佳,且具有速效性,建议使用浓度为1 000～1 200倍液,在低龄幼虫发生盛期用药防治,每亩地兑水45 kg在下午或傍晚施药。