一些化学和物理因素对羊瘙痒因子263K蛋白酶抗性的影响

朊病毒(prion)具有超强的理化因素抵抗能力,可抵抗常规物理和化学因子对其感染性的灭活.为了研究不同理化因素对PrPSc蛋白酶抗性的影响,采用不同浓度的NaOH、NaOCl、SDS、温度变化以及3%SDS与温度变化联合处理羊瘙痒因子263K,再经蛋白酶K(Proteinase K,PK)消化,通过Western blot检测观测PrPSc的PK抗性.结果发现,上述几种理化因素对羊瘙痒因子263K的PK抗性有不同程度的破坏作用.NaOH浓度在0.05mol/L以上,NaOCl游离氯含量在0.1%以上,温度在121℃以上都能使PrPSc的PK抗性消失;而1%～5%SDS不能使PrPSc的PK抗性完全消失,3%SDS与温度的联合作用可有效地破坏PK抗性,同时使所需温度降低.还发现,在较低浓度的化学因子或温度的条件下即可出现PK抗性的破坏,而在较高浓度或温度处理时才出现蛋白本身的消失.这些结果提示,与PrPSc感染性的结果相似,PK抗性可受相似浓度或强度的理化因素影响,具有明显的浓度或强度相关性,对判定消除PrPSc的感染性有一定的指导意义.     

分枝杆菌制剂对小鼠的免疫调节作用的初步研究

探讨不同分枝杆菌制剂对小鼠的免疫调节作用。将C57BL/6小鼠,随机分成4组分别注射生理盐水、微黄分枝杆菌、草分枝杆菌和田鼠分枝杆菌制剂,每隔2周免疫一次。免疫2次后,小鼠取脾淋巴细胞体外培养,分别以PPD、PPDB刺激,用MTT法检测T淋巴细胞增殖情况;用酶联免疫斑点法(Enzyme-Linked ImmunoSpot assay,ELISpot)检测脾细胞分泌IFN-γ情况,分析各分枝杆菌制剂对小鼠免疫应答的影响。结果显示,与对照组相比,微黄分枝杆菌制剂和草分枝杆菌制剂免疫小鼠的T淋巴细胞增殖反应和脾细胞分泌IFN-γ均明显提高,其中微黄分枝杆菌组与对照组相比有显著性差异(p<0.01)。分枝杆菌制剂可促进小鼠免疫应答。     

Survivin靶向siRNA抑制大肠癌细胞增殖的作用

目的 构建survivin靶向siRNA重组表达载体,研究其对人大肠癌细胞生长的抑制作用。方法构建Stirvivin靶向siRNA并转染结肠癌细胞,通过RT-PCR和Westernblot方法检测survivin的表达,采用MTT法检测siRNA对细胞增殖的抑制作用。结果经酶切鉴定和测序结果证实survivin靶向siRNA重组表达载体构建成功,它对大肠癌细胞survivinmRNA和蛋白的表达抑制率分别为36．33％和44．65％,肿瘤细胞的生长受到明显抑制。结论survivin靶向siRNA构建成功并能显著抑制survivin基因的表达。     

头孢哌酮钠和卡那霉素在豚鼠化脓性中耳炎中的作用及耳毒性机制研究

目的探讨头孢哌酮钠和卡那霉素在豚鼠化脓性中耳炎中的作用、耳毒性。方法 A、B、C组均应用金黄色葡萄球菌菌苗中耳腔注射法制备化脓性中耳炎模型。然后分别应用生理盐水、头孢哌酮钠滴耳液和卡那霉素滴耳液中耳腔给药治疗,各0.2 ml/次,2次/天,连续给药7天。听性脑干反应(ABR)检测豚鼠鼓室内注射金黄色葡萄球菌前后以及抗生素滴耳后ABR阈值。脓性分泌物评分和菌落计数。耳蜗基底膜铺片:毛细胞计数和形态学观察。结果 A组(生理盐水组)、B组(头孢哌酮钠组)、C组(卡那霉素组)实验后ABR听阈分别为(46.00±5.1)dB peSPL(peSPL:等效峰值声压级),(35.25±4.9)dB peSPL,(42.25±5.2)dB peSPL(差别主要是给药后,造模前后无差别)。脓性分泌物评分分别为A组(2.33±0.4)、B组(1.65±0.4)、C组(1.53±0.3)。细菌培养计数分别为A组(117±10.5)、B组(63±6.9)、C组(49±6.1)。A组和B组毛细胞未见缺失,纤毛和表皮板完好,结构正常,C组毛细胞大片缺失,相应部位的纤毛和表皮板也见缺失。结论头孢哌酮钠滴耳液的抗菌效应可以应用于化脓性中耳炎的治疗,且无耳毒性。卡那霉素滴耳液虽然抗菌效应强,但耳毒性较强,所以不推荐作为治疗化脓性中耳炎的一线用药。     

鼻息肉中NF-κB的活化对IL-8转录的影响及意义

目的 通过检测鼻息肉组织中核因子кB(NF-кB)的活化及白介素-8(IL-8)的转录水平,探讨鼻息肉组织中NF-кB的活化对IL-8转录的影响及临床意义.方法分别应用凝胶电泳迁移实验法、蛋白免疫印迹法、免疫组织化学法及逆转录聚合酶链反应法检测47例鼻息肉患者(鼻息肉组)的息肉组织中NF-κB的活性及其p65亚基蛋白水平、IL-8的组织定位及转录水平;以22例鼻中隔手术患者中鼻甲黏膜组织作为阴性对照(对照组);对NF-кB的活性及其p65亚基蛋白水平与IL-8的转录水平进行Pearson's相关性分析.结果 EMSA测得鼻息肉组患者息肉组织中NF-κB的活性(216.51±17.33)较对照组(63.57±5.26)显著增高(P<0.01);Western Blot 测得鼻息肉组NF-κB亚基p65 蛋白的水平(153.72±9.15)较对照组(73.92±6.74)显著增高(P<0.05);半定量RT-PCR 测得IL-8 mRNA的转录水平(0.95±0.08)也显著高于对照组(0.23±0.03)(P<0.05);Pearson's相关性分析结果提示:鼻息肉组患者息肉组织中NF-κB的活性及其p65亚基蛋白水平与IL-8的转录水平呈显著正相关性(r值分别为 0.78 & 0.53,均P<0.01).结论 IL-8是鼻息肉组织中NF-кB激活后所分泌的重要的炎性细胞因子,NF-кB和IL-8引起的局部微环境的改变可能是鼻息肉发病的重要因素.