抗人CD3单链抗体四聚体基因的构建及表达

为构建和表达抗人CD3单链抗体 (scFv) 人p5 3四聚功能域融合基因 ,选用人IgG3上游铰链区作为抗人CD3scFv和人p5 3四聚功能域之间连接的linker .利用递归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p5 3四聚功能域融合基因 ,克隆入pUC18载体中构建pUC18 IgG3 p5 3克隆载体 .将抗人CD3scFv克隆入pUC18 IgG3 p5 3载体中 ,构建抗人CD3scFv 人p5 3四聚功能域融合基因 .经酶切鉴定及序列测定证实后 ,将融合基因克隆入真核表达载体pSecTag2 B中 ,转染HeLa细胞进行表达 ,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行亲和活性测定 .获得了抗人CD3scFv 人p5 3四聚功能域融合基因 ,基因全长 882bp ,可编码 2 94个氨基酸 ,与已发表的抗人CD3scFv、人IgG3上游铰链区和人p5 3四聚功能域基因cDNA序列一致 .表达产物经SDS PAGE和Western印迹实验证实为约 35kD的特异蛋白条带 ,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合人外周血单个核细胞 (PBMC)细胞 ,亲和力高于scFv ,为进一步临床应用奠定基础     

囊肿去顶减压术是否改善肾功能的动物实验研究

目的:通过模型加压兔子肾脏,监测加压前后肾功能变化,论证压力对肾功能的影响,根据实验结果给多囊肾临床治疗提供借鉴。方法:将成年新西兰兔随机分为三组(A,B,C),A组兔子切除一侧肾脏,另一侧肾脏通过模型固定圆形气泡予肾脏加压;B组兔子切除一侧肾脏,另一侧肾脏通过模型固定塑料圆球予肾脏加压;C组兔子切除一侧肾脏,另一侧肾脏不予加压处理。分别监测实验组和对照组兔子术前术后肾功的变化(血肌酐、尿素)。对不同加压肾脏标本进行HE、masson和六氨银染色,了解肾脏加压后的病理改变。结果:实验组A行加压术后肾功相对术前与对照组C相比无明显差异;实验组B行加压术后,肌酐、尿素升高明显,与术前、实验组A、对照组C比较均有明显差异(P<0.01)。实验组C一侧肾切除后相比术前肾功能无明显差异。病理示:肾脏加压后,肾小球、肾小管、肾血管继发一系列损害肾功的病理改变。结论:对肾脏施加的压力足够大的时候,压力致使肾脏发生相应病理改变,肌酐、尿素升高,肾功能明显下降。因此传统的囊肿去顶减压术,仍是有意义的对症治疗手段。     

一株新的人肾癌原代细胞系的建立及其生物学特性鉴定

目的:取肾癌病人标本建立一株新的人肾癌细胞系,初步对该细胞系进行鉴定,为进一步的肾癌基础研究提供实验模型.方法:2008-2009年间共采集20例肾癌新鲜手术标本,于手术后1 h内将每例标本切取四块0.5cm× 0.5 cm× 0.5 cm组织块,分别包埋于2只裸鼠的右后肢皮下及背部皮下,连续传代3次,取移植瘤体外培养,记录细胞株的生长曲线,测定细胞集落形成率,对细胞进行DNA含量测定,进行染色体分析及病理学检查.结果:其中1只裸鼠皮下移植瘤生长,继续传代,肿瘤生长速度明显加快.取移植瘤标本体外培养得到肾癌细胞系XJG-9201.形态结构,分化程度与原发瘤一致,染色体众数为65.细胞群体倍增时间为38.2h,细胞周期分析G1期62.7%,G2期11.2%,S1期25.3%,集落形成率为70%.结论:肾癌细胞系XJG-9201与原发癌保持相同的生物学特性,体外连续传代1年以上传115代.细胞形态不变,生长周期恒定,已成为一个稳定的细胞系.     

PPARγ激动剂罗格列酮诱导人前列腺癌细胞系LNCAP凋亡的作用

目的:探讨罗格列酮(ROZ)对体外培养细胞系LNCAP增殖及凋亡的作用.方法:20、50、100 μmol/LROZ作用LNCAP细胞24 h、48 h、72 h后,MTT法检测ROZ对LNCAP细胞生长的影响.采用末端脱氧核苷酸转移酶原位标记(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况.Western Blot检测LNCAP细胞中Casepase-3表达水平的变化.结果:ROZ(20μmol/L至100μmol/L)对前列腺癌细胞有显著的增殖抑制作用,以100μmol/L浓度最为明显.ROZ(100μmol/L)作用72h后最高增殖抑制率达78.58%.流式细胞仪检测结果显示,LNCAP细胞凋亡数目随药物浓度的增加呈递增趋势;100μmol/LROZ作用72h后凋亡细胞数达48.11%.与此一致,TUNEL染色阳性细胞数目在ROZ处理组显著增多,Western Blot检测显示,ROZ显著增加LNCAP细胞中Caspase-3蛋白表达水平.结论:ROZ在体外对前列腺癌细胞系LNCAP有明显的增殖抑制及促进凋亡作用,有望成为前列腺癌患者新的治疗方法.     

抗菌肽的固相合成、分离纯化与构效关系的研究

应用手工固相DCC/HOBt法合成Cecropin B、shival、ABP 3、WHD4种抗菌肽。各抗菌肢的C端均为酰胺化。最终用}珏,LC分离纯化。这4种肽对大肠杆菌K₁₂D₃₁野生型大肠杆菌、产气杆菌及4种植物病原菌青枯菌、临床致病型大肠杆菌、伤寒杆菌、硝酸盐杆菌均有明显的杀伤或抑制作用．对白血病细胞K 560、肺癌细胞A 549也有杀伤作用。其中尤以wHD杀伤作用最为明显,并用对其它3种肽不能作用的枯草杆菌、绿脓杆菌也略有抑制。而shiva l对细菌的作用较其它3种肽弱,另外还用cD谱对4种抗菌肽的溶液构象做了初步研究。     

分级诊疗中基层首诊的利益相关者分析

以基层首诊为研究主体,结合我国目前分级诊疗中基层首诊的初步试点现状与效果,剖析推行过程中存在的主要问题,分析各个利益相关群体的在基层首诊试点过程中出现的利益冲突,提出相应的对策建议,旨在为推进基层首诊的就医格局而提供理论意义和参考依据。     

开放及腹腔镜小儿隐睾复位固定术后免疫功能的比较

目的:探讨开放手术及腹腔镜下隐睾复位固定术对小儿机体免疫功能的影响。方法:检测两组术前1d和术后1d、4d外周血中TNF、IL-6及CD3、CD4、HLA-DR的表达水平。结果:腹腔镜组TNF、HLA-DR的表达术前术后未见明显异常,开放组术后TNF维持高水平,而HLA-DR术后持续降低;腹腔镜组IL-6术后1天高于正常,术后4天恢复术前水平,开放组术后维持高水平;2组术后1d外周血CD3、cD4细胞较术前均有不同程度的下降(P<0.05),术后4天腔镜组恢复术前水平,开放组仍明显低于正常。结论:研究结果证实腹腔镜手术对小儿机体免疫功能的损伤影响大大低于开放手术。     

小儿腹腔镜肾上腺切除术对IL-6、内皮素和C反应蛋白水平的影响

目的:探讨小儿开腹肾上腺切除术与腹腔镜肾上腺切除术两种方法对患儿血IL-6、C反应蛋白水平和内皮素水平的影响,从而比较两种术式对患儿手术应激的影响程度。方法:选择开腹肾上腺切除术患儿25例,腹腔镜肾上腺切除术患儿17例,分别于术前和术后抽取静脉血检测血IL-6、C反应蛋白和内皮素的水平并进行比较。同时比较两组手术时间、术中出血量及术后住院时间。结果:开放手术组患儿术后血IL-6、C反应蛋白和内皮素的水平明显高于腹腔镜手术组,而术前两组间无统计学差异。腹腔镜组患儿手术时间术中出血量及住院时间均小于后者。结论:腹腔镜肾上腺切除术与开腹肾上腺切除术相比,手术刺激小,恢复快。     

粗茎鳞毛蕨孢子萌发研究

以经过3年低温储藏的粗茎鳞毛蕨孢子为实验材料,从孢子离心、孢子消毒、培养基种类、光质等4方面对孢子萌发进行研究,结果表明:在离心转数≤14 000 r.min-1、离心时间≤30 min条件下,离心处理对孢子萌发基本无影响;对孢子进行1%NaClO水溶液浸泡处理20～30 min为最佳消毒条件;改良Knop’s培养基为最佳孢子萌发培养基;黑暗条件下孢子不能萌发,但是黑暗处理能够明显提高孢子萌发整齐性;红光比白光能促进孢子提早萌发1 d左右,但对提高萌发率效果不显著。     

细菌黑色素的合成途径及生物功能研究进展

黑色素的合成是生物界从细菌到人类都普遍存在的现象。黑色素在生物体中具有抗紫外辐射、清除自由基等功能,对于生物的生长发育虽非必需,却能极大提高生物体的生存竞争能力。此外,黑色素合成途径中的关键酶类如酪氨酸酶能代谢不少酚类物质,在化工等领域具有实际应用价值。本文重点从细菌黑色素的种类、生物合成途径、黑色素的生物学功能方面进行阐述。