甲亢源性心房颤动与肾素-血管紧张素系统相关发病机制的研究

目的:研究高甲状腺素导致房颤与肾素-血管紧张素系统(RAS)相关的发病机制。方法:左旋甲状腺素经兔腹腔注射,制作甲亢源性房颤易患模型,同时厄贝沙坦经胃管灌胃,乳兔左心房肌细胞培养药物干预;检测房颤诱发率、左心房肌细胞凋亡情况,检测RAS相关的细胞因子,凋亡蛋白表达情况。结果:中途撤药组、厄贝沙坦组、对照组房颤诱发率低于持续给药组(P<0.05)。中途撤药组、持续给药组、厄贝沙坦组心肌细胞凋亡率、ACE m RNA相对表达量、ACE血浆浓度、表达量、AngⅡ血浆浓度、表达量均高于对照组,持续给药组高于中途撤药组、厄贝沙坦组(P<0.05)。中途撤药组、持续给药组、厄贝沙坦组PARP、caspase3相对表达量均高于对照组,持续给药组高于中途撤药组、厄贝沙坦组(P<0.05)。AngⅡ组药物干预后左心房肌细胞凋亡率高于对照组、甲状腺素组(P<0.05)。结论:高甲状腺素所致的房颤发病机制可能是间接过度激活RAS,循环、组织AngⅡ表达增高,后者诱导心房肌细胞凋亡,左心房发生电-解剖重构。     

一株新的人肾癌原代细胞系的建立及其生物学特性鉴定

目的:取肾癌病人标本建立一株新的人肾癌细胞系,初步对该细胞系进行鉴定,为进一步的肾癌基础研究提供实验模型.方法:2008-2009年间共采集20例肾癌新鲜手术标本,于手术后1 h内将每例标本切取四块0.5cm× 0.5 cm× 0.5 cm组织块,分别包埋于2只裸鼠的右后肢皮下及背部皮下,连续传代3次,取移植瘤体外培养,记录细胞株的生长曲线,测定细胞集落形成率,对细胞进行DNA含量测定,进行染色体分析及病理学检查.结果:其中1只裸鼠皮下移植瘤生长,继续传代,肿瘤生长速度明显加快.取移植瘤标本体外培养得到肾癌细胞系XJG-9201.形态结构,分化程度与原发瘤一致,染色体众数为65.细胞群体倍增时间为38.2h,细胞周期分析G1期62.7%,G2期11.2%,S1期25.3%,集落形成率为70%.结论:肾癌细胞系XJG-9201与原发癌保持相同的生物学特性,体外连续传代1年以上传115代.细胞形态不变,生长周期恒定,已成为一个稳定的细胞系.     

劳盆地深海热液喷口沉积物中细菌多样性研究

采用PCR-RFLP技术调查了劳盆地深海热液喷口两位点沉积物中的细菌多样性。结果表明, 在劳盆地深海热液喷口沉积物环境中细菌多样性十分丰富, 样品DY1中发现6个细菌类群, DY2中则存在4个细菌类群, 其中Gammaproteobacteria细菌亚群和Epsilonproteobacteria细菌亚群在两文库中均占据最大比例, 为沉积物样品中的优势菌群。另外, 在克隆文库中还发现了一些与数据库中的已知序列同源性较低的类群, 从而说明劳盆地深海热液喷口沉积物中存在特有的微生物种属。     

超甜玉米种子萌发物质利用性状杂种优势及亲子回归关系分析

为阐明超甜玉米(Zea mays L.var.saccharata Bailey)亲本对F_1种子物质利用性状遗传效应,研究了19份自交系和其测配的10个杂交组合的杂种优势及亲子回归关系。结果表明,超甜玉米自交系及F_1种子的淀粉含量、蛋白质含量、脂肪含量、百粒重、种子物质动用量和种子物质利用率差异较大,10个杂交组合中亲本和F_1种子的淀粉含量、脂肪含量、百粒重均存在显著差异。F_1种子淀粉含量和百粒重均表现出正向超亲优势,即近高亲本遗传;而F_1种子的蛋白质含量、脂肪含量、种子物质动用量和种子物质利用率为近低亲本遗传。聚类分析和杂种优势分析表明,性状差异较大的FH14、Q26、GT22、GT2等亲本测配的杂交组合在种子百粒重或种子物质利用率等性状上具有较强的超亲优势。回归分析表明,母本对F_1种子的淀粉含量、百粒重有负效应,对种子物质动用量和种子物质利用率有正效应;父本对种子淀粉含量有负效应,对种子物质利用率有正效应。     

siRNA下调EZH2基因对肾癌细胞系769-P增殖的影响

目的：运用小干扰RNA下调果蝇zeste基因增强子人类同源物（enhancer ofzeste homolog 2,EZH2）在肾癌细胞系769-P中的表达,明确其对肾癌细胞增殖的影响。方法：将处于对数生长期769-P细胞分为实验组（experiment group）、阴性对照组（negative group）、空白对照组（blank group）,合成靶向EZH2基因的小干扰RNA片段（EZH2-siRNA）和无效序列片段后,通过脂质体介导分别转染至实理组和阴性对照组,空白对照组未做任何处理。以qRealtime-PCR检测EZH2基因mRNA水平的变化情况,以MTT法检测各组细胞增殖变化;流式细胞术（FCM）检测转染后细胞周期变化情况。结果：实理组中EZH2在mRNA表达水平明显受抑制;MTT实验中第4天始,实验组中769-P细胞的增殖能力开始受抑制,第5天时实验组细胞抑制更明显,与阴性对照组和空白组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。siRNA转染后实验组中G0/G1期细胞比例明显增多（81.32±3.14）%,与阴性对照组（44.13±1.52）%和空白对照组（45.71±2.32）%差异有统计学意义。结论：EZH2-siRNA可有效下调并抑制肾癌细胞769-P的增殖,EZH2在肾癌的发生、发展中发挥了重要作用,为下一步研究肾癌基因治疗提供了理论支持。     

RT-PCR检测毕赤酵母外源β-甘露聚糖酶基因拷贝数

利用荧光定量PCR方法检测毕赤酵母外源β-甘露聚糖酶基因(man)拷贝数。以毕赤酵母中高度保守基因三磷酸甘油醛脱氢酶基因(gap)为内参基因,分别构建含有gap和man的克隆质粒,进行RT-PCR反应构建gap和man双标准曲线;获得的双标准曲线具有良好的重复性,其相关系数(R2)均为0.999,其扩增效率分别为105.1%和102.2%。提取含有外源man基因的毕赤酵母基因组进行RT-PCR检测,通过双标准曲线计算出外源man基因的拷贝数。结果显示:预先经过博莱霉素(Zeoicn)抗性筛选得到的10株毕赤酵母重组菌株中含有1、2、3、4、5和7个不等拷贝的β-甘露聚糖酶基因。结果表明该方法能够高效快速筛选和鉴定出含有不同外源β-甘露聚糖酶基因拷贝数的毕赤酵母重组菌株。     

普鲁兰酶基因在毕赤酵母中组成型表达及定点突变研究

合成Bacillus acidopullulyticus的全长普鲁兰酶基因并在毕赤酵母X-33中进行组成型外分泌表达,重组酶的最适作用温度为60℃,最适作用pH值为4.5~5.0,酶比活力为2.0 U/mg.采用重叠延伸PCR方法对普鲁兰酶基因进行定点突变,实验结果表明,625、626位点Ala、Leu氨基酸突变为Leu、Tyr氨基酸后,该酶的催化效率有所降低,而Gln487Ala的突变对催化效率没有较大的影响.该研究结果为探究关键氨基酸区域对催化效率的影响提供了一定的理论和实验基础.     

产β-甘露聚糖酶Aspergillus sp. LQ21的分离、鉴定及发酵条件的研究

β-甘露聚糖酶是一类能够水解甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖的半纤维素酶类,广泛存在于动植物和微生物中,此酶在食品、医药、饲料、造纸、石油等方面已得到广泛应用;近年来,其作为食品和饲料添加剂方面倍受关注。对采自土壤和树皮的样品通过富集培养、平板初筛和摇瓶复筛,得到1株具产β-甘露聚糖酶能力的曲霉属菌株LQ21,结合形态特征、培养特征及18S rRNA基因序列分析,将该菌株鉴定为Aspergillussp.真菌。考察了培养时间、起始pH、培养温度、碳源和氮源对该菌株产酶的影响。初步确定了其最适产酶培养基组成:魔芋粉0.5%,蛋白胨1%,NaNO30.2%,K2HPO40.1%,KCl 0.05%,MgSO4.7H2O 0.05%,FeSO4.7H2O 0.001%;最适培养条件:初始pH4.5,温度35℃,转速200 r/min,培养60 h发酵液上清中酶活达到最高。     

响应面分析优化产木聚糖酶毕赤酵母基因工程菌培养条件

研究不同碳源、氮源和无机盐对毕赤酵母AX181菌株产木聚糖酶的影响。实验表明,分别采用葡萄糖和玉米浆干粉为碳源和氮源可以明显提高木聚糖酶的产量。无机盐单因子优化实验显示添加适量的（NH4）2SO4、KH2PO4、MnSO4·H2O、FeSO4·7H2O也可以部分提高木聚糖酶产量。在此基础上利用响应面法优化毕赤酵母产木聚糖酶培养基,利用12次实验的Plackett—Burman设计实验筛选出影响产木聚糖酶的3个主要因素,即玉米浆干粉、MnSO4·H2O和FeSO4·7H20。并进一步通过最陡爬坡路径逼近最大响应区域,采用中心组合实验设计确定最佳条件。优化后的产木聚糖酶培养基组分为（g/L）：葡萄糖40．00,玉米浆干粉80．84,（NH4）2SO46．25,KH2PO41．25、MnSO4·H2O0．35,FeS04-7H2O1．31。培养基优化后,实际产酶2883．86u／mL,是优化前YPD培养基产酶的2．51倍。