MTHFR基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗塞的关系

采用ＰＣＲ－ ＲＦＬＰ技术,检测了６２ 例动脉粥样硬化性脑梗塞患者和７９ 名对照者的Ｃ６７７Ｔ 突变的基因型。结果发现, ＭＴＨＦＲ基因Ｃ６７７Ｔ 突变型等位基因（Ｖ）频率在实验组和对照组中,有显著性差异（χ２＝ ４．４１,Ｐ＜ ０．０５）;三种基因型频率在两组人群中均无显著性差异。基因型频率的相对风险分析,ＡＶ基因型比ＡＡ 基因型患脑梗塞风险高１．７６ 倍;ＶＶ 基因型比ＡＡ 基因型患脑梗塞风险高３．２５ 倍。结果表明, ＭＴＨＦＲ 基因Ｃ６７７Ｔ 突变型等位基因与动脉粥样硬化性脑梗塞有一定的关联,突变基因型增加了动脉粥样硬化脑梗塞的发病风险。     

小鼠胚胎干细胞（ES细胞）建系和维持过程中的问题及对策

总结了十多年来我们从事ES细胞建系和培养工作的经验和教训,提出了研究工作中存在的问题以及解决这些问题的方法和对策,并对一些常规性的操作步骤进行了改进。同时,对某些尚不明确的问题进行了讨论,提出了我们的看法和建议。研究工作表明,我们采取的对策和方法是可行、有效的。 Abstract：Based on manipulating Embryonic Stem cells for more than ten years, we proposed our methods to solve the problems in establishing an d maintaining ES cell lines, especially the improvement of routine operational a pproach.We also discussed some ambiguous problems and gave corresponding opinion and suggestion which was proved to be feasible and effective in our own research.     

BALB/c小鼠胚胎干细胞系建立的方法学探讨

以小鼠胚胎成纤维细胞（ME）为饲养层,以大鼠心脏细胞条件下培养基（RH－CM）为ES细胞培养基,全面、详尽地对BALB／c小鼠ES细胞的纱和培养方法进行了探讨,成功地建立了一套建立和培养BALB/c小鼠ES细胞系的新方法。这一培养条件不但有效地维持了ES细胞的未分化状态和正常二倍体核型,而且维持了其作为能性胚胎干细胞的一系列特征。实验设计了两种离散方法和两种浓度的消化兴,用来离散增殖的ICM和ICM离散后出现的ES集落。两种离散方法即“一次离散法”,和“多次离散法”,两种浓度的消化液即0．25％。Trypsin－0．04％。EDTA和．005％。Trypsin-0.888％EDTA;同时对ICM离散时机、RH－CM在BALB／c小鼠ES细胞建系和培养中作用进行了探讨。结果表明：在低浓度消化液作用下,采用“多次离散法”离散增殖4天的ICM和ES集落的方法建立BALC／c小鼠的ES细胞系是理想的;从细胞形态、集落形态、增殖生长能力、核型检测、碱性磷酸酶测定以及体内外分化能力表明,所建立的9个BALB/c小鼠ES细胞系符合小鼠胚胎干细胞的一系列特征。     

大鼠心脏细胞条件培养基对小鼠ES细胞特性的维持

以C19-2和MESPU-13为供试细胞,用克隆测试、传代培养等方法对17种细胞的条件培养基进行了筛选,结果表明,大鼠心脏细胞的条件培养基（RH-CM）具有显著抑制小鼠ES细胞分化、维持其二倍体核型、促进ES细胞贴壁生长的作用。经RH-CM培养10代和20代的小鼠ES细胞在体内外分化能力上仍保留了原ES细胞的多方向分化潜能和特征;RH-CM也可作为小鼠ES细胞培养基的添加物,用含70%RH-CM的ES细胞培养基和小鼠胚胎原代成纤维细胞饲养层（PMEF）培养ES细胞,可长期有效地维持其未分化状态和二倍体核型。RT-PCR检测到大鼠心脏细胞有LIF mRNA表达。     

MTHFR基因多态性与动脉粥样硬化性脑梗塞的关系

采用PCR-RFLP技术,检测了62例动脉粥样硬化性脑梗塞患者和79名对照者的C677T突变的基因型。结果发现, MTHFR基因C677T 突变型等位基因(V)频率在实验组和对照组中,有显著性差异(χ2＝4.41,P<0.05);三种基因型频率在两组人群中均无显著性差异。基因型频率的相对风险分析,AV基因型比AA基因型患脑梗塞风险高1.76倍;VV基因型比AA基因型患脑梗塞风险高3.25倍。结果表明, MTHFR基因C677T突变型等位基因与动脉粥样硬化性脑梗塞有一定的关联,突变基因型增加了动脉粥样硬化脑梗塞的发病风险。 Abstract:　In order to detect the relationship between MTHFRgene C677Tpolymorphism and arteriosclerotic cerebral infarction, this study examined the genotype of 62 patients with arteriosclerotic cerebral infarction and 79 control subjects by PCR-RFLP. The result showed that there was significance difference between patients and control subjects in V allele frequency of MTHFRgene C677Tmutation (χ2＝4.41,P<0.05) and there was no difference between patients and control subjects in genotype frequency of MTHFRgene C677Tmutation. The relative risk for arteriosclerotic cerebral infaction of heterozygote (AV/AA) was 1.76 and that of homozygote (VV/AA) was 3.25. The study confirmed an association between mutated allele of the MTHFRgene C677Tand arteriosclerotic cerebral infarction, mutated genotypes increased the risk of arteriosclerotic cerebral infarction.     

建立对未分化细胞特异性标记的小鼠胚胎干细胞系

构建pRex-1-EGFP表达载体,电穿孔转染小鼠ES细胞,用增强绿色荧光蛋白对起源于3．5d胚泡内细胞团的小鼠胚胎干细胞进行特异性标记,用荧光显微观察EGFP的表达以及RT-PCR方法检测Rex-1基因在未分化和分化中ES细胞中的表达情况。结果显示,EGFP基因成功转入小鼠ES细胞,并在未分化的ES细胞中高效表达;细胞开始分化后,EGFP的表达开始下降。由Rex-1基因启动子控制下的EGFP稳定表达的小鼠ES细胞系,对哺乳动物早期发育过程的研究以及对筛选能够调节上述过程的小分子化合物具有重要意义。