抗菌肽B基因导入水稻及转基因植株的鉴定

构建了一个适合在水稻中表达的含有抗菌肽B基因的转化载体(pCB1),应用基因枪转化法将其导入水稻未成熟胚,获得了一些转基因水和植株.Basta抗性鉴定,抗菌肽B基因PCR扩增分析,点渍印迹和Southern印迹分析结果表明,选择标记基因(bar)和抗菌肽B基因都已整合入转化水稻基因组中,Northern印迹分析证实了抗菌肽B基因在RNA水平上的表达.转基因水稻植株增强了对水稻白叶枯病和细条病的抗性.     

黑麦1R染色体的显微分离与回收

建立了利用显微操作技术分离植物单个染色体的方法。以黑麦(Secale cereale L.)为材料,以其标准染色体组型图为依据,识别出黑麦含抗病基因的1R染色体。经显微操作,将单条1R染色体放入Ep-pendorf管中。研究表明,用α-溴奈饱和液对细胞进行预处理,可快速鉴别出黑麦1R染色体。采用去壁低渗制片技术,可明显地改善显微分离单染色体的条件。     

基因枪转移Bar基因获得抗除草剂(Basta)的糜子蔗克隆再生植株

用糜子蔗(sorghum×sugarcane)×millet sorghum茎尖愈伤组织为受体,通过基因枪轰击将Bar基因转入糜子蔗细胞;用除草剂Basta含量分别为1、2.5、5、10mg/L的8114诱导与分化培养基上选择抗性愈伤组织;在Bast a含量为1与1.5mg/L筛选培养基上,选择出3个快速增殖并大量再生绿苗的体细胞无性系(Clone),如BarC1、BarC2、BarC3;BarC1、C2再生植株用Basta含量为1、2.5-5mg/L的溶液进行抗性检测,证明这些小植株具有极强的抗性。 Abstract:The Bar genes were introduced into〔(sorghum×sugarcane) ×millet sorghum〕callus cells using particle bombardment.The callus were cultured on the 8114 media with Basta,the Bastas concentration is 1,2.5 and 5,10mg/L.3 Clones with regenerated capacity were screened out on the media with Basta 1,2.5mg/L,for example BarC1,BarC2,BarC3.The regenerated plant from BarC1、BarC2 were cultured on the solution with Basta 1.5,2.5,and 5mg/L,high resistance were obtained in these regenerated plants.     

提高水稻基因枪转化效率的研究

在转化前将受体材料转移到高渗培养基上,即用含有一定浓度的甘露醇和山梨醇的培养基对受体材料进行处理。基因枪轰击后把受体材料转出,结果表明,这样做明显提高了瞬时表达（ＧＵＳ基因的表达）效果,用可筛选的标记基因（潮霉素磷酸转移酶基因,ＨＰＴ）试验表明,经高渗处理后,稳定转化的效率也有提高。用基因枪将带有ＨＴＰ基因的粒子轰击其盾片,经过筛选及植株再生,获得了转基因植株,ＰＣＲ扩增反应及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明了外源基因已整合入水稻的基因组     

水稻基因枪法多基因转化研究

为探索多基因转化系统,利用基因枪法进行水稻3个质粒的共转化研究,结果从25个转基因植株中获得3个三转化植株N12、K4-39和K1-1-66,成功地将分别位于不同质粒载体上的GUS,hpt和RTBV CP基因同时导入到水稻中。3个三转化植株中N12、K4-39正常可育。对N12的后代遗传分析表明,该转基因植株中3个载体所携外源基因均呈孟德尔式分离(3:1),3个外源基因分别整合到水稻的两条染色体上。GUS基因与hpt连锁,RTBV CP位于另一条染色体上。     

水稻、小麦花粉单倍体的研究及利用

综合近年来我国对于由花药培养所获得的大量水稻、小麦花粉植株的遗传学及细胞学研究,可明确以下几个问题: 1.花粉植株的倍数性:粳稻、籼稻及小麦花粉植株的倍数性表现各有特点,粳稻中二倍体占一半以上,籼稻则约有一半为多倍体及异数体,而小麦则大部分为单倍体,二倍体只占百分之几到二十几。三种植物的花粉植株中都有相当数量的异数体及倍数嵌合体。     

用激光微束法将外源基因导人水稻细胞的研究

将外源基因导入植物细胞是植物基因工程的关键步骤之一。用激光微束技术转化动物细胞已经取得了成功,并证明外源基因已整合到细胞染色体上。最近又证明激光微束可穿透植物细胞壁和细胞膜,将pBR322DNA导入植物细胞和细胞器。本实验在利用激光微束技术将外源基因导入水稻培养细胞上进行了探索。 所用外源DNA是pBI121质粒,该质粒带有CaMV35启动子和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因,用     

水稻原生质体培养及植株再生的研究

由粳稻77-170品系及籼稻品种IR-50的细胞悬浮培养物游离的原生质体,用琼脂糖包埋于RY-2培养基中,发生了持续分裂。前者植板率达2.5％以上,二者最后都再生出植株。对游离和培养方法做了如下改进:1)采用两步法,即先用果胶酶,再用果胶酶和纤维素酶的混合酶进行游离,可避免原生质体发生融合并获得高质量的原生质体;2)悬浮细胞培养基中加入ABA有利于原生质体的存活和分裂;3)琼脂糖包埋培养可大大提高植板率;4)用较高渗透压的培养基培养原生质体再生的细胞团及愈伤组织,可提高植株再生频率。由于这两个品种(系)的培养物都已继代一年半之久,再生植株均为白化苗。这是迄今第一个由籼稻原生质体再生植株的报道。