宽果苁菔适应昼夜变化ESTs的分离与分析

以流石滩地区植物广布种宽果苁菔为实验材料,应用磁珠介导的抑制消减杂交方法,分离昼夜差异基因。随机挑选了136个差异ESTs克隆并进行测序,测序结果使用Blast2go程序进行功能注释和分析。结果表明绝大部分ESTs功能与稳定细胞状态和抗性响应相关,其次与物质能量代谢和信号传导相关,宽果苁菔适应昼夜变化过程的机制非常复杂,本研究为进一步研究高山植物适应流石滩恶劣环境的机制奠定了基础。     

拟南芥光形态突变体的筛选与基因鉴定

以哥伦比亚(Columbia)野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana)为实验材料,用含有激活标记双元质粒pCB260的农杆菌浸花进行转化,构建拟南芥T-DNA插入突变体库.通过突变体的筛选和表型分析,获得了两株光形态突变体,子叶下胚轴伸长的光抑制效应减弱.通过TAIL-PCR(thermal asymmetric interlaced-PCR)技术,成功扩增出突变植株T-DNA插入位点侧翼序列,经NCBI序列比对,T-DNA分别插在CRY1第一和第三外显子部位.突变体的表型分析及PCR鉴定结果表明,T-DNA插入CRY1并影响到突变植株的光形态建成.     

玉龙雪山种子植物资源评价

云南西北部玉龙雪山地处中国三大生物多样性中心之一。基于植物数据库和种子植物名录并结合野外采集的植物标本资料,我们得出玉龙雪山地区有超过2 815种的种子植物,其中96种为濒危物种的结论。同时完善和补充了丽江高山植物园种子植物名录,并基于植物的用途和特性分析和评价了资源植物;讨论了植物资源保护与开发间存在的矛盾与冲突,并且对植物资源的保护和可持续开发利用提供了意见和建议。     

蛋白组学解析拟南芥响应细菌信号分子N-3-oxo-hexanoyl-homoserine-lactone（OHHL）的机制

细菌来源的群体感应信号分子能诱导与调控植物的抗病性与生长发育,本文用细菌群体感应信号分子N一3-oxo—hexanoyl-homoserine—lactone（OHHL）对拟南芥进行不同时间的处理,提取蛋白进行双向电泳分析,用蛋白组学的方法解析拟南芥响应细菌信号分子的机制。双向电泳与质谱分析共鉴定出47个点,这些蛋白中随处理时间的增加表达量上调的蛋白点数目增加,并且与植物抗氧化、物质代谢和细胞信号转导密切相关。因此通过蛋白组学分析结果可以更好的解释植物与细菌的相互作用机制,进一步利用其之间的联系来促进植物更好的生长发育。     

拟耧斗菜昼夜差异表达ESTs的分离与分析

应用磁珠介导的抑制消减杂交方法,以青藏高原白马雪山流石滩地区植物拟耧斗菜为实验材料,分别在白天与夜晚采样,以白天样品为目标,晚上样品为驱动样品,分离昼夜差异表达的基因。随机挑选了96个差异ESTs克隆并进行测序,测序结果进行blastx网上数据库比对、Blast2go功能注释和KEGG代谢路径分析。结果表明：绝大部分ESTs功能与物质能量代谢、生物合成、蛋白和核酸结合、转移酶活性相关,还有少数与逆境胁迫相关等。这为进一步研究高山植物逆境适应的分子机制奠定了基础。     

狭果葶苈高温响应表达序列标签的分离与初步分析

目的:分离与分析白马雪山流石滩地区植物狭果葶苈高温响应基因,研究高山植物高温耐受机制。方法:应用磁珠介导的抑制消减杂交分离差异表达序列标签(EST),通过测序与Blastx比对,用Blast2go程序进行功能注释和代谢路径分析。结果:大部分EST功能与物质能量代谢、生物合成、蛋白和脂肪结合、转移酶活性相关,还有一些胁迫响应的基因。结论:狭果葶苈高温胁迫应答机制是非常复杂的,需要众多基因的参与。     

云南栽培种及野生种芋头的AFLP指纹分析

目的:分析云南芋头种质资源遗传多样性。方法:应用扩增片段长度多态性(AFLP)指纹技术,用3对AFLP引物对采集自云南省的9份芋头栽培品种及1份野生品种进行研究,分离AFLP多态性条带。结果:共分离到60个AFLP多态性条带,AFLP多态位点百分率为96.77%,云南芋头种质资源在DNA分子水平上表现出丰富的遗传多样性。聚类分析将10份芋头品种分为2组,遗传距离为0.101～0.908。结论:AFLP指纹技术是筛选品种间差异基因的有效方法,研究结果为云南省芋头品种鉴定、遗传相关性分析、特殊功能基因的分离等工作提供了一定的理论基础。     

番茄茎腺毛差异表达序列分离与分析

腺毛是参与植物防御性反应与次生代谢挥发物合成的特异化器官,了解腺毛专一性表达序列标签将有助于我们进一步认识植物腺毛的特异性功能.本文应用磁珠介导的抑制消减杂交方法(SSH),以番茄茎腺毛为检测子(tester),去除腺毛的番茄茎为驱动子(driver),构建番茄茎腺毛差异表达cDNA文库,分离腺毛差异表达基因.随机挑选了108个差异ESTs进行测序,测序结果使用Blast2go程序进行blastx比对、功能注释和KEGG代谢路径分析.结果表明,绝大部分ESTs功能与胁迫响应、物质代谢、生物及非生物刺激反应相关,具有结合、催化功能.这些分离的差异ESTs为进一步研究番茄腺毛的植物防御性机制奠定了基础.     

拟南芥叶边缘锯齿状突变体的分离与鉴定

叶的极性建立直接决定叶的平展性发育,极性改变导致叶形态异常,影响植物体的各种正常生理活动。利用反向遗传学方法,从拟南芥基因激活标签突变体库中分离到一个叶片边缘锯齿状表型的突变体（命名为pCB1294）,该突变体同时表现出叶表皮腺毛形态发育异常。通过TailPCR方法成功定位突变基因为At5g41663,该基因编码miR319b基因。Real time PCR显示,pCB1294突变体植株中miR319b基因的表达量是野生型（col）植株的11倍多。所得结果为进一步研究miRNA调控叶极性的分子机制和进一步分析miR319b与叶形态发生的关系奠定了基础。     

激活标签法构建拟南芥突变体库及其表型分析

以拟南芥(ArabMopsis thaliana)野生生态型(Columbia)植株为实验材料,以含有激活标记双元质粒pCB260的农杆菌进行转化,并以抗除草剂Basta为筛选标记,构建了拟南芥激活标签突变体库,所用pCB260双元质粒含有两个Ds位点、一个GFP标记基因与一个抗basta标记基因,可以方便高效地筛选转基因植物.目前经初步筛选获得了约10 000个独立转化株系(T1代),其中约50个株系具有明显的表型变化,包括花期改变、株型变异、叶形特异、育性降低、花发育异常、种子颜色变浅等.运用TAIL-PCR技术,成功获得了其中10个表型特异株系的T-DNA侧翼序列,分别分布于拟南芥基因组的5条染色体上.