东亚飞蝗hunchback基因在卵子形成和胚胎发育过程中的原位表达

hb（hunchback）基因是昆虫胚胎前后轴模式形成的关键基因．对东亚飞蝗（Locusta migratoria manilensis,Meyen）hb基因的功能已有报道,但其表达模式还不清楚．为了研究胁基因在东亚飞蝗卵子形成和胚胎发育过程中的时空表达情况,本研究采用免疫组化方法在蛋白质水平上检测了hb基因的时空表达模式．在卵子形成过程中,hb基因局限在卵细胞核区中表达,随着卵子的发育逐渐移至卵细胞的后端;卵受精后,核区里的Hb蛋白向外扩散,在卵后端形成浓度梯度;胚盘期,hb基因在胚盘中央呈带状表达;胚盘分化为原头和原躯干后,表达条带变宽,并呈现出梯度表达,该表达区域将形成颌、胸部的部分体节;随着腹节开始形成,hb基因在颌胸部的表达逐渐减弱,而在腹部后端的“生长区”表达,并呈现出不连续性．经比较,hb易基因在昆虫颌胸部的表达较为保守,而在卵子形成过程中和腹部的表达具有较大的变异性．与黑腹果蝇等长胚带昆虫相比,东亚飞蝗hb基因在体节形成的基因级联调控中具有更重要、更直接的调控作用．     

人工饲养条件下眼斑芫菁不同发育阶段斑蝥素含量的变化

【目的】分析人工饲养条件下眼斑芫菁Mylabris cichorii Linnaeus不同发育阶段体内斑蝥素含量的变化。【方法】收集不同发育阶段的眼斑芫菁,通过热碱浸提法提取斑蝥素,而后以气相色谱法检测含量。【结果】在幼虫期,1龄幼虫斑蝥素相对含量最高,2龄幼虫斑蝥素相对含量降到最低点;以后随着虫体的发育,幼虫体重和斑蝥素含量都逐渐增加。羽化后的成虫经隔离饲养,雄虫在羽化后5～30天大量合成斑蝥素,而雌虫体内斑蝥素含量则极低,具有典型的性二型现象;雌雄混合饲养组中,20～30天雌虫体内可以检测到大量斑蝥素,而同期雄虫斑蝥素含量远低于隔离饲养组。【结论】幼虫期斑蝥素含量随虫体发育而增加;成虫期主要由雄虫合成斑蝥素。混合饲养组成虫平均单头斑蝥素含量高于隔离饲养组雌雄虫平均斑蝥素含量。成虫身体各部位的斑蝥素含量以腹部最高,胸部次之。     

Bt杀虫基因在桑粒肩天牛幼虫肠道内生优势菌中的转化研究

桑粒肩天牛(Apriona germariHope,Ag)幼虫是一种营钻蛀性生活的重要林业害虫,通过传统纯培养、生理生化鉴定和16SrDNA分子生物学分析等方法分离、鉴定出其肠道优势内生菌溶血葡萄球菌(Staphylococcus haem olyticus,S.haem olytic-us)Ag06菌株和人葡萄球菌(Staphylococcus hom is)Ag08菌株。从中筛选菌株S.haem olyticusAg06进行质粒消除后作为出发菌株,利用电转化技术将含有对鞘翅目昆虫具专一性毒力B t杀虫基因cry3A的Escherichia coli-Bacillus thuringiensis穿梭表达质粒pHT305 a和pHT7911分别转入其中。经质粒稳定性试验、转化子生长特性测试等分析,结果显示cry3A基因已经成功转入Ag幼虫的优势内生菌溶血葡萄球菌中。     

东亚飞蝗中肠几丁质酶基因的克隆、序列分析及组织定位

通过RACE方法,克隆了东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis (Meyen)几丁质酶基因 (LmChi)cDNA全序列 (GenBank 登录号：EF092841)。获得的cDNA全长1 604 bp,其中可读框1 452 bp, 编码483个氨基酸。推测其氨基酸序列与18家族昆虫几丁质酶有较高的相似性。与其他几丁质酶一样,东亚飞蝗几丁质酶序列也包含一个信号肽、一个几丁质酶活性位点、一个碳端丝氨酸富集区和一个几丁质结合域。半定量RT-PCR研究表明,LmChi基因只在东亚飞蝗不同发育阶段的中肠组织中表达,而在东亚飞蝗体壁、前肠和后肠均没有发现LmChi基因的转录。     

人胰岛素基因在体内外表达的研究

利用定点突变人胰岛素基因,以脂质体载体和质粒不同比例形成的复合物进行体内外转染。体外转染鼠肝细胞,G418进行筛选,利用放免法测定培养液中胰岛素含量;体内通过肝门脉注射,测定模型鼠血糖及转染后7天时血液中胰岛素的含量,结果显示目的基因已转入肝细胞,且体内外转染都有一定量的成熟胰岛素表达,体外转染中质粒与脂质体比为1∶6转染后24h表达量最高为10.45μIU/ml,体内转染使模型鼠的糖尿病症状明显改善,血糖最高降幅达55%。 Abstract:The transfection of mutated human insulin gene was studied using the complex of different proportion of plasmid and Liposome.Hepatic cell was used as the target cell in vitro,isolation of Hepatic cell including insulin gene was carried out by G418,the expression level of insulin in medium was measured by RIA method.The portal vein was cannulated with therapeutic gene in vivo,the blood glucose of the model was regularly examined and the insulin level was detected on the seventh day after transfection.The results showed that the target gene was transferred into the hepatic cell,expression of mature insulin was detected both in vivo and in vitro,It reached the peak 10.45μIU/ml on the 24th hour after transfection with the proportion 1:6 of.plasmid and Liposome in hepatic cell.Diabetic sympotom of the model was improved after transgene,the blood glucose could decrease 55% at the most.     

人胰岛素基因在体内外表达的研究

利用定点突变人胰岛素基因,以脂质体载体和质粒不同比例形成的复合物进行体内外转染。体外转染鼠肝细胞,G418进行筛选,利用放免法测定培养液中胰岛素含量;体内通过肝门脉注射,测定模型鼠血糖及转染后7天时血液中胰岛素的含量,结果显示目的基因已转入肝细胞,且体内外转染都有一定量的成熟胰岛素表达,体外转染中粒与脂质体比为1:6转染后24h表达量最高为10.45μIU/ml,体内转染使模型鼠的糖尿病症状明显改善,血糖最高降幅达55％。     

应用荧光染色法检测寄主昆虫体表病原真菌孢子及其附着孢

采用蝗虫翅膀作为侵染组织,探讨了荧光染色剂Calcofluor White M2R在观测寄主体表绿僵菌孢子及其附着孢形成中的应用。结果表明,在荧光显微镜下,清晰可见蝗虫翅膀上发蓝色荧光的绿僵菌孢子、芽管及附着孢,而蝗虫翅膀未被染色,避免了干扰观察目标物。该方法可以准确观察病原真菌孢子在昆虫体表组织的萌发及附着孢形成。     

桑粒肩天牛肠道纤维素分解细菌的分离和鉴定*

为研究天牛消化利用纤维素的机理,利用纤维素-刚果红琼脂培养基,从桑粒肩天牛(A.germari)幼虫中肠分离到一种兼性厌氧纤维素分解菌。菌落为白色圆形,边缘比较规则,周围溶纤维素透明圈直径一般可达10mm～20mm,细菌大小为0.5～0.8μm×1～3μm,革兰氏染色阳性,杆状,极生鞭毛,无芽孢。结合生化实验结果,初步鉴定该菌株为纤维单孢菌属(Cellulomonas)。     

贡嘎蝠蛾幼虫肠道真菌多样性分析

[目的]分析贡嘎蝠蛾肠道(Hepialus gonggaensis)幼虫肠道真菌多样性.[方法]采用常规分离与分子鉴定的方法和基于ITS(internal transcribed spacer)基因的RFLP方法,建立贡嘎蝠蛾幼虫肠道真菌的ITS克隆文库,分别用MspⅠ、HaeⅢ和Taq Ⅰ对205个阳性克隆的质粒酶切指纹图谱分析,结果显示有23个不同的RFLP操作分类单元(OTU),对这23个操作分类单元的阳性克隆子进行测序并绘制系统进化树.[结果]结果显示贡嘎蝠蛾幼虫肠道内存在8个属的真菌类群.其中被孢霉属(Mortierella)和丝孢酵母属(Trichosporon)的丰度最高,分别占克隆文库的46.34%和40.00%,鉴定为肠道内的优势真菌类群.用常规分离与分子鉴定方法只获得隐球酵母(Cryptococcus magnus)、Geomyces sp和丝孢酵母(Trichosporon porosum)3个类群的真菌.结合常规分离法与RFLP法能够更有效的分析肠道微生物的多样性,获得更多更全面的微生物多样性信息.     

几种差异序列分析方法的比较及其研究前景

分离和鉴定不同生物基因的差异序列,有助于功能基因的分离,揭开物种间进化的规律,阐明某些疾病相关基因的作用机理。本文简述了几种近年来常用的筛选差异基因的方法,特别是最新发表的杂交监控差异分析法(HMDA)的原理、适用范围及其特点,重点探讨了HMDA法在真核基因组差异序列筛选中的技术性突破及其研究前景。