HyTK基因转移联合ganciclovir对瘢痕成纤维细胞的体外杀伤作用

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的过度增生主要是由于高度增生活性的成纤维细胞的数量异常增多及细胞外基质合成增加所致．用逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶｔｋ）的转移,随后应用药物９－（１,３－二羟基－丙氧基－甲基）鸟嘌呤（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ,ＧＣＶ）可选择性地杀死增生细胞．采用组织块贴壁法在体外原代培养成功增生性瘢痕病人的成纤维细胞（ＦＢ）．重组逆转录病毒ＧＴＫ转染ＦＢ细胞后,用ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ筛选出阳性细胞克隆（ＦＢ／ＧＴＫ）,经ＰＣＲ方法检测证明ＨｙＴＫ基因已成功地导入ＦＢ中,但不含可复制的辅助病毒．分别用不同浓度的ＧＣＶ作用于ＦＢ／ＧＴＫ及ＦＢ,光镜下观察不同时间后细胞形态变化及ＭＴＴ法检测细胞活性．结果表明,ＧＣＶ浓度大于０．１μｍｏｌ／Ｌ时即对ＦＢ／ＧＴＫ有显著的杀伤作用,且具有强有力的“旁观者效应”     

用“乒乓效应”提高包装细胞培养上清中逆转录病毒滴度的方法

逆转录病毒是基因治疗研究中最为主要的基因转移载体,目前批准的基因治疗试验方案中绝大多数采用逆转录病毒作为载体。逆转录病毒具有稳定、安全、高效的优点,但仍存在病毒滴度低的问题。目前多从质粒结构和病毒包装两方面来提高病毒滴度。 将HyTK基因替换逆转录病毒载体GlNa     

TK基因/GCV对瘢痕组织成纤维细胞增生的体外抑制研究

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是在创伤延迟愈合期间,由于过度胶原沉积而形成的突出皮肤表面或从原损伤部位侵入周围正常皮肤的增殖性瘢痕组织,是整形外科和皮肤科难治疾病之一。传统的临床治疗由于缺乏充分的分子生物学基础,目前仍无一种明确有效的方法,主要问题是难以控制其复发。我们通过逆转录病毒载体GTK介导HSV-TK基因转移联合9-(1,3-二羟-2-丙氧甲基)鸟嘌呤(更昔洛韦,ganciclovir,     

TK/GCV系统体外诱导成纤维细胞凋亡

 在体外培养并鉴定增生性瘢痕成纤维细胞（ Ｆ Ｂ）的基础上,采用重组逆转录病毒 Ｇ Ｔ Ｋ 介导并联合应用 ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ 对 Ｆ Ｂ细胞进行体外杀伤,以探究 Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统体外杀伤成纤维细胞的机制．经光镜、电镜及凝胶电泳等实验发现,在 Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 对瘢痕成纤维细胞的杀伤过程中存在明显的细胞凋亡现象．这提示 Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统对体外培养的瘢痕成纤维细胞的杀伤作用部分是通过细胞凋亡途径实现的．     

重组逆转录病毒载体GTK的构建及HyTK基因转移的研究

用逆转录病毒载体将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶｔｋ）导入恶性肿瘤细胞,随后可应用药物９－（１,３－二羟基－丙氧基－甲基）鸟嘌呤（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ,ＧＣＶ）选择性地杀死肿瘤细胞．将ＨｙＴＫ基因替换逆转录病毒载体ＧｌＮａ中的ｎｅｏ基因,构建成重组逆转录病毒载体ＧＴＫ,转染混合包装细胞（双噬性ＰＡ３１７细胞和单噬性ＧＰ＋Ｅ－８６细胞）,通过“乒乓效应”获得高滴度重组病毒．用该重组病毒转染小鼠恶性黑色素瘤细胞系Ｂ１６细胞,用ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ筛选出阳性细胞克隆（ＨｙＴＫ＋）,经ＰＣＲ方法检测证明ＨｙＴＫ基因已成功地导入肿瘤细胞中,且不含可复制的辅助病毒．分别用不同浓度的ＧＣＶ作用于ＨｙＴＫ－及ＨｙＴＫ＋的Ｂ１６细胞,光镜下观察２４ｈ和４８ｈ后细胞形态及进行活细胞计数．结果表明,ＧＣＶ浓度大于０．１μｍｏｌ／Ｌ时即对Ｂ１６／ＨｙＴＫ＋细胞有显著的杀伤作用     

臭氧对植物细胞透性的影响及赖氨酸的防护作用

植物细胞渗出汁液电导率的变化,反映出臭氧对细胞膜透性影响呈一单峰曲线的关系,可划分为“缓升期”、“陡升期”、“峰值点”、“陡降期”、“缓降期”。依据电导率变化程度,检验了实验中的六种植物,基本类似于症状学指标划分的抗性等级,说明细胞质膜透性变化可作为植物抗臭氧程度的生物学指标。赖氨酸能引起植物外渗液电导率下降,用0.3—0.7%浓度范围的赖氨酸喷洒植株,对臭氧危害植物有较明显的防护作用。