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目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌细胞株SW620增殖、凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计、合成反义寡核苷酸并通过脂质体将其转染至人结肠癌细胞SW620中。噻唑蓝(MTT)法观察survivinASODN对SW620细胞增殖的抑制作用,测定IC50;转染36h后,Hoechst33342染色荧光显微镜下观察检测SW620细胞核变化,RT-PCR检测survivinASODN处理后SW620细胞中caspase-3mRNA表达,分光光度法检测caspase-3酶活性.结果:转染8h后,SW620细胞中可见黄绿色荧光均匀分布:不同浓度survivinASODN处理SW620细胞44h后,SW620细胞增殖显著受到抑制,IC50为1×10^-6M。2×10^-7,4×10^-7,6×10^-7,8×10^-7 and1.2×10^-6M的survivinASODN处理后,细胞生长抑制率分别为15.38±0.022%、2404±0.023%、30.87±0.027%、45.02±0.018%和65.01±0.024%:Hoechest33342染色后荧光显微镜下可观察到染色质凝集并出现凋亡小体,RT-PCR检测到caspase-3mRNA表达上调,另外caspase-3酶活性显著升高。结论靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计合成的survivinASODN可抑制显著结肠癌SW620增殖、诱导细胞凋亡,其机制与诱导caspase-3表达,提高caspase-3酶活性有关。 相似文献
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人纤溶酶原饼环区5(hPK5)基因的分泌型表达 总被引:3,自引:0,他引:3
构建人纤溶酶原饼环区5(hPK5)基因的原核可溶性表达载体并进行表达和纯化,获取大量高纯度、具有生物活性的hPK5蛋白。以纤溶酶原cDNA为模板,PCR扩增了hPK5基因,经过适当酶切后构建表达载体pET22b(+)hPK5,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达并经组氨酸亲和层析获得纯化。带有重组质粒pET22b(+)hPK5的大肠杆菌经IPTG诱导后以可溶性形式表达16kDa的蛋白,其表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯化后目的蛋白纯度达95%以上,Western印迹表明重组蛋白具有Histag抗原活性。构建了pET22b(+)hPK5重组质粒并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达,为获得大量hPK5基因工程产品奠定了实验基础。 相似文献
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