小麦6B染色体微切割及其不同片段的DNA文库构建

用Nd∶YAG激光微束将处于有丝分裂中期的小麦(Triticum aestivum L.)6B染色体微切割为四段,并用微细玻璃针将每个片段分别回收。将分离的染色体片段DNA用Sau3A接头介导的多聚酶链式反应(LA-PCR)分别扩增。Southern杂交证明4个特定区域的DNA确实来自于小麦基因组。用一系列(42对引物)位于6B染色体和其他染色体上的微卫星序列对微切割的染色体片段的PCR产物进行了验证。结果表明,获得的染色体片段的PCR产物来自于小麦6B染色体。将6B染色体4个片段的第二轮PCR产物克隆到pGEMT-vector中,建立了4个染色体特定区域的基因组文库,命名为R1、R2、R3和R4,分别包含2.1×10~5、2.74×10~5、2.45×10~5和2.93×10~5个重组子克隆。每个文库均随机挑选150个克隆进行质粒的小量制备和酶切验证。结果显示:插入片段大小在300～1800 bp之间,平均大小为820～870 bp,其中43％～48％的克隆为低/单拷贝序列,42％～47％为中/高拷贝序列。本研究为详细分析植物单染色体的不同片段的分子遗传学研究提供了基础。     

番茄对高根温引起的叶片水分胁迫的适应

应用PV技术研究了不同根温时番茄叶片多种水分参数,以探讨番茄对根温变化的适应机制。结果表明,低根温时（15－25℃）番茄叶片ψs^100、ψs^0、ROWC^0、b值、ψw^0和ε均较高根温（30－40℃）时高,α值、ψs^100－ψs^0、－α－ψw^0均较高根温时低,只偶而出现例外。应用fuzzy数学中隶属函数的方法对不同根温时番茄叶片的多种水分参数刊物综合分析,得出结论,高根温时番茄通过渗透调节和降低细胞壁弹性模量而保持压力势,维持正常生理活动,从而对谪根温引起的水分胁迫做出适应性反应。     

根系温度对甜椒生理特性的影响

甜椒苗期的最适根温为２５－３０℃。根温不适宜时,叶片生长明显减慢,光合速率下降,以致干物质积累减少。根温低的甜椒气孔呈前反馈式反应,根温高的气孔则呈反馈式反应,部分关闭和导度降低,胞间ＣＯ２分压减小,净光合速率降低。     

啤酒酵母增加营养盐的生物学特性研究

在啤酒发酵过程中,麦汁中适当的添加营养盐可以促进酵母的活性,使11°bx麦汁的发酵时间由过去的20天左右,降低到10—12天,双乙酰含量由过去的0.10—0.18mg/1降低到0.03—0.06mg/1发酵度由过去63%—68%,提高到69%—72%,并且酵母的使用代数增加到4—5伏.     

一种简单、有效的适于PCR操作的放线菌DNA提取方法

目的:利用改良酶法发展了一种从微量(几百微升)发酵液中快速安全的提取放线菌基因组DNA的方法。方法:利用溶菌酶破壁,蛋白酶K和SDS除蛋白,成功提取较高质量的放线菌基因组DNA,所得的DNA可作为PCR反应的模板进行16SrRNA等基因有效扩增。结果:能从海绵和土壤分离的放线菌中成功提取基因组DNA。结论:该方法操作简单、费用低廉、不使用酚、氯仿等有毒害作用有机试剂,非常适于长期从事放线菌操作的研究人员。为大量放线菌菌株的快速鉴别、高通量筛选和系统分类研究创造了条件。     

差减抑制杂交技术在植物研究中的应用

差减抑制杂交技术在医学研究中应用较多,而在植物研究中的应用较少,近几年有所增加。本文介绍了目前差减抑制杂交技术在植物发育、逆境胁迫或人为诱导条件下差异基因表达以及不同组织中差异基因表达和突变等研究方面的应用。随着研究的不断深入,差减抑制杂交技术将在植物新基因的发现和克隆中发挥更大作用。     

小麦6B染色体微切割及其不同片段的DNA文库构建

用Nd:YAG激光微束将处于丝分裂中期的小麦(Triticum aestivum L.)6B染色体微切割为四段,并用微细玻璃针将每个片段分别回收.将分离的染色体片段DNA用Sau3A接头介导的多聚酶链式反应(LA-PCR)分别扩增.Southem杂交证明4个特定区域的DNA确实来自于小麦基因组.用一系列(42对引物)位于6B染色体上的微卫星序列对微切割的染色体片段的PCR产物进行了验证.结果表明,获得的染色体片段的PCR产物来自于小麦6B染色体.将6B染色体4个片段的第二轮PCR产物克隆到pGET-vector中,建立了4个染色体特定区域的基因组文库,命名为R1、R2、R3和R4,分别包含2.1×105、2.74×105和2.93×105个重组子克隆.每个文库均随机挑选150个克隆进行质粒的小量制备和酶切验证.结果显示;插入片段大小在300～1800之间,平均大小为820～870bp,其中43%～48%的克隆为低/单拷贝序列,42%～47%为中/高拷贝序列.本研究为详细分析植物单染色体的不同片段的分子遗传学研究提供了基础.     

根系温度对苋菜生长及光合特性的影响

气候室中研究了根温对苋菜幼苗生长及光合等生理特性的影响。结果表明,苋菜幼苗生长曲线呈S形, 30d苗龄时生长最快, 40d苗龄时每株干、鲜重分别为0.45g和6.79g。20~25℃根温时40d苗龄苋菜生长最快,高根温对生长的危害大于低根温, 40℃根温苋菜根系生长、代谢受害严重。苋菜净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Cs)和胞间CO2分压(Pi)随根温的变化趋势基本一致, 20~25℃根温时,Cs、Pi、Pn和Tr均高,不良根温影响了Cs,使Tr降低, Pi降低,进而影响到Pn。回归分析表明, Pn与Cs、Pn与Pi、Tr与Cs、Pi与Cs均呈显著正相关。说明Cs下降是不良根温影响Pn的主要原因。     

春小麦体细胞无性系变异的研究

利用RAPD技术检测春小麦愈伤组织和再生植株在离体培养过程中产生的变异,对培养不同时期的愈伤组织、再生植株检测结果表明,在小麦离体培养愈伤组织和再生植株中,RAPD谱带发生变化,表明发生了体细胞无性系分子水平变异．且具有明显的规律性和变异特点：杂交B代幼穗培养获得的愈伤组织发生变异的频率高于遗传稳定品种幼穗培养获得的愈伤组织。在愈伤组织培养75d时,在RAPD电泳图谱反映出高频率的亲本谱带缺失和非亲本谱带增加。不同基因型或外植体诱导的愈伤组织和再生植株中出现了相同的变异。与愈伤组织相比．再生植株中检测到的变异频率更高。不同外植体离体培养获得的再生植株,即使表型上没有观察到变异,但从RAPD图谱上却反映出变异的发生。表明RAPD技术可以快建方便地检测组织培养每个阶段出现的DNA水平变异。     

海洋微生物宏基因组工程进展与展望

据初步统计,生活于海洋环境包括大洋深处的微生物有100万种以上,构成了一个动态的遗传基因库,其中绝大多数微生物或者从来没有经过实验室培养,或者至今无法培养,因而其分类地位及其生态学功能尚未为人类所认识。随着16S rRNA序列分析与系统分类学的广泛应用,海洋微生物多样性研究领域已经发生了很可观的改变,这些变化极大的丰富了人们对的微生物多样性及其生态功能的认识和理解。这里结合笔者近十年来的工作实践,讨论近年来在海洋微生物资源开发利用方面的研究进展,提出一个带有自动化特征的宏基因组功能表达平台,探讨海洋微生物资源利用的新途径。可以预见在不久的将来,海洋环境宏基因组工程研究将在一定程度上使得传统未培养海洋微生物基因资源及其功能产物能够为人类所开发和利用。