Nitric oxide and oxygen radicals induced apoptosis via bcl-2 and p53 pathway in hypoxia-reoxygenated cardiomyocytes

Twotypesofcellulardemisecanoccursimultaneouslyintissuesorculturedcellbynecrosisandapoptosis.Lossofmembraneintegrity,celledemaandbreak,andthecellcomponentsre-leasedoutarethecharacteristicsofnecrosis.Whilethecellapoptosisisaprogramcelldeathcodedbygeneandactivatedseriousendogenousenzymes[1].Recentstudieshavedemonstratedthatmyocardialischemia-reperfusioninjuryresultedinapoptoticcelldeathinadditiontotissuenecrosis[2—4].Oxygenstressisoneofthereasonsthatcausedcellapoptosisandtheoxygenradicalsinthest…     

一氧化氮和氧自由基诱导缺氧再给氧心肌细胞凋亡的bcl-2和p53信号通路研究

观察了心肌缺氧再给氧损伤的一氧化氮(nitric oxide, NO)和氧自由基机制. 新生Wistar大鼠心肌细胞置于95% N₂ /5% CO₂环境培养24 h, 然后置于95% O₂ /5% CO₂环境培养4 h造成缺氧再给氧心肌细胞损伤模型. 单纯缺氧组心肌细胞置于95% N₂/5% CO₂环境培养24 h, 但不再给氧. NO供体硝普钠(SNP, 5 mmol/L)、NO合酶抑制剂Nw-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME, 100 mmol/L)和其异构体Nw-硝基-D-精氨酸甲酯(D-NAME, 100 mmol/L)以及超氧化物歧化酶/过氧化氢酶(SOD/CAT, 各100 U/mL)分别于缺氧前加入培养基. 正常对照组心肌细胞置于95% 空气/5% CO₂环境下培养. 结果显示, 缺氧24 h能增加培养介质中NO, 硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)和乳酸脱氢酶(LDH)水平, 再给氧降低培养介质中NO和 水平, 增加TBARS和LDH水平. 缺氧上调bcl-2和p53和p21/waf1/cip1蛋白表达水平, 而再给氧下调bcl-2蛋白表达水平, 上调p53和p21/waf1/cip1蛋白表达水平. 同时, 缺氧增加心肌细胞凋亡率, 而再给氧增加心肌细胞坏死率. NO供体硝普钠(SNP)增加培养介质中 和TBARS水平, 下调bcl-2蛋白表达而上调p53和p21/waf1/cip1蛋白表达水平, 增加DNA断裂、凋亡及坏死细胞率. L-NAME和 SOD/CAT分别降低培养介质中 和TBARS水平, 它们均能上调bcl-2蛋白表达而下调p53和p21/waf1/cip1蛋白表达水平, 抑制DNA断裂、凋亡及坏死细胞率, 而D-NAME则无此作用. 以上结果表明, 在缺氧再给氧所致心肌细胞死亡过程中, NO和氧自由基参与下调bcl-2蛋白表达水平和上调p53和p21/waf1/cip1蛋白表达水平, 相应地激发细胞凋亡程序, 并提示一氧化氮及氧自由基诱导心肌细胞凋亡的机制与调节 bcl-2和p53和p21/waf1/cip1信号通路有关.     

双歧杆菌对实验性大肠癌凋亡促进基因表达的影响

目的：探讨青春型双歧杆菌体内诱导大肠癌裸鼠移植瘤细胞凋亡的具体途径。方法：以免疫组化法检测大肠癌移植瘤细胞凋亡促进基因bad和Caspase-3基因的蛋白表达率和阳性细胞密度。结果：双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤细胞凋亡促进基因bad和Caspase-3基因的蛋白表达率以及阳性细胞密度均显著于肿瘤对照组。结论：双歧杆菌可通过促进bad和Caspase-3基因的表达,最终诱导大肠癌的凋亡。     

胃微生态系统与胃病

胃微生态系统是微生态学研究领域的重要内容之一。自1977年西德学者VolkerRush首先明确提出微生态学这一概念以来,这一领域的研究在世界各地相继开展。本文综述近年来胃微生态学研究的进展。     

一株双歧杆菌质粒聚合酶基因的PCR扩增和鉴定

目的PCR扩增人双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因。方法用改良型MRS双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离长双歧杆菌,PCR扩增长双歧杆菌质粒聚合酶(Bifidobacterium plasmid polymerase,BPP)基因,对BPP基因检测阳性的PCR产物通过序列分析,进行鉴定。结果人长双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因PCR扩增后,经1.0%琼脂糖凝胶电泳,测得BPP基因的相对分子质量约为1.9 kb。通过BLAST序列比对分析与GenBank中相应基因同源性为96%。结论成功克隆了1株双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因,为构建与双歧杆菌宿主质粒相适应的载体奠定了基础。     

酪酸梭菌对艰难梭菌感染的防治研究

目的:观察酪酸梭菌对艰难梭菌感染的防治效果.方法:用艰难梭菌产毒株人工感染BALB/C小鼠,感染前后分别用酪酸梭菌进行预防与治疗,并检测盲肠内容物细胞毒性和进行肠黏膜病理观察.结果:酪酸梭菌不能预防艰难梭菌的感染,但在艰难梭菌感染后则能明显降低艰难梭菌的产毒力和盲肠黏膜的病理损伤.结论:酪酸梭菌对小鼠艰难梭菌感染有明显的治疗作用.     

双歧杆菌的完整肽聚糖对巨噬细胞NF-kB的影响

目的从NF-kb角度探索分叉双歧杆菌的完整肽聚糖（WPG）激活巨噬细胞的信号机制.方法首先分离培养SD大鼠腹腔巨噬细胞,然后以不同浓度的WPG刺激巨噬细胞,最后采用凝胶电泳迁移分析技术检测巨噬细胞NF-kb的DNA结合活性.结果分叉双歧杆菌的WPG作用于巨噬细胞后,其NF-kB的DNA结合活性明显高于对照组（P＜0.01）.结论分叉双歧杆菌的WPG能活化巨噬细胞的NF-kb.     

常规组织切片凋亡细胞原位末端标记方法

凋亡是有别于组织坏死的一种细胞死亡方式,多与基因调控的编程性死亡有关。准确地判断细胞凋亡对探讨程序化细胞死亡诱发机制具有重要意义。本文采用Biotin-16-dUTP对凋亡细胞内DNA断裂片段的末端进行标记,可原位检测常规组织切片上的凋亡细胞,方法具有敏感、直观、重复性好等优点。     

小肠结肠炎耶尔森菌研究概况

小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica,简称Y．e）是自20世纪80年代以来引起国际上广泛注意的一种人畜共染病原细菌,广泛分布于自然界,已从人、动物、土壤、水和多种食品中分离出来。是能在冷藏温度下生长的少数肠道致病菌之一,全球由该菌引起的食源性疾病爆发已有数十起。该菌虽早在20世纪30年代已被发现,但直至20世纪60年代才逐渐引起国外微生物学、临床医学和流行病学家们的广泛注意,随着其重新分类和免疫学、分子生物学技术的发展,对Y．e菌的研究更进了一步,现将其综述如下。     

Nitric oxide and oxygen radicals induced apoptosis via bcl-2 and p53 pathway in hypoxia-reoxygenated cardiomyocytes

Neonatal rat cardiomyocytes were subjected to 24 h of hypoxia 95%N2/5%CO2 and 24 h of hypoxia plus 4 h of reoxygenation 95%O2/5%CO2. 24 h of hypoxia increased the levels of NO, TBARS and LDH. 24 h of hypoxia plus 4 h of reoxygenation decreased the levels of NO, but further increased TBARS and LDH. The hypoxia up-regulated the expression of bcl-2, p53 and p21/waf1/cip1 but the reoxygenation down-regulated the expression of bcl-2, and further up-regulated p53 and p21/waf1/cip1. The hypoxia increased cell apoptosis and reoxygenation further increased both apoptotic and necrotic cell death. NO, TBARS, DNA fragmentation and cell apoptosis were enhanced by SNP and inhibited by L-NAME respectively. In addition, SOD/catalase down-regulated the expression of p53, p21/wafl/cipl and TBARS but up-regulated bcl-2 and increased indirectly the level of NO, and inhibited DNA fragmentation. The results suggest that hypoxia-induced cell death is associated with the activation of NO, bcl-2 and p53 pathway, while hypoxia-reoxygenation induced cell death via the generation of reactive oxygen species and activation of p53 pathway. The present study clarified that NO may be an initiative signal to apoptotic cell death and the activation of bcl-2, p53 and p21/waf1/cip1 pathway in hypoxic and hypoxia-reoxygenated cardiomyocytes.