双歧杆菌预防大肠癌生长的凋亡途径

目的探索青春型双歧杆菌预防大肠癌生长有凋亡的途径。方法首先建立大肠癌裸鼠移植瘤动物模型,然后以免疫组化法检测大肠癌裸鼠移植瘤组织caspase-3基因的蛋白表达水平。结果双歧杆菌预防组大肠癌Caspase-3的阳性细胞密度以及表达率明显高于肿瘤对照组（P〈0.01）。结论青春型双歧杆菌可通过上调caspase-3基因的蛋白表达来预防大肠癌的生长。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对实验性大肠癌bak和bax基因表达的影响

目的：探讨青春型双歧杆菌的完整肽聚糖(whole peptidoglycan,WPG）的抑瘤机制。方法：以免疫组化检测大肠癌裸鼠移植瘤bak基因的蛋白表达水平。结果：WPG注射组大肠癌移植瘤bak和bax的阳性细胞密度、阳性表达率和表达强度均显著高于肿瘤对照组。结论：WPG的抑瘤机制之一的是通过增强bak和bax基因的蛋白表达,最终诱导肿瘤细胞的凋亡。     

双歧杆菌对实验性大肠癌诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:用免疫组化法观察大肠癌移植瘤诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。方法:以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,将青春型双歧杆菌注射于裸鼠腹腔。结果:显示双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤iNOS的表达率、表达强度和阳性细胞数量均显著高于肿瘤对照组(P<0.01)。结论:青春型双歧杆菌能增强大肠癌移植瘤iNOS的蛋白表达水平。它的表达可能介导了双歧杆菌诱导大肠癌移植瘤细胞的凋亡。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对实验性大肠癌凋亡调控基因表达的影响

为探讨双歧杆菌的完整肽聚糖的抑瘤途径及机制,本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,采用免疫组化ＳＰ法检测了４０只裸鼠移植瘤ｂｃｌ－２及ｂａｘ基因的蛋白表达率及表达强度。结果显示完整肽聚糖注射组大肠癌移植瘤ｂｃｌ－２蛋白表达率及阳性细胞密度均低于肿瘤对照组,ｂａｘ基因的表达情况则相反。提示双歧杆菌的完整肽聚糖可使大肠癌裸鼠移植瘤的ｂｃｌ－２基因表达下调,ｂａｘ基因表达增强,最终诱导肿瘤细胞凋亡,实现其抗瘤目的。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对实验性大肠癌凋亡控制基因表达的影响

为探讨双歧杆菌的完整肽聚糖的抑瘤途径及机制,本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,采用免疫组化ＳＰ法检测了４０只裸鼠移植瘤ｂｃｌ－２及ｂａｘ基因的蛋白表达率及表达强度,结果显示肽聚糖注射组大肠癌移植瘤ｂｃｌ－２蛋白表达率及阳性细胞密度低于肿瘤对照组,ｂｃｘ基因的表达情况则相反。提示双歧杆菌的完整肽聚糖可使大肠癌裸鼠移植瘤的ｂｃｌ－２基因表达下调,ｂａｘ基因表达强,最终诱导肿瘤细胞凋亡,实现其抗瘤目的。     

双歧杆菌对实验性大肠癌PCNA和bcl-2表达的影响

目的：观察青春型双歧杆菌对大肠癌移植瘤增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和ｂｃｌ－２基因蛋白表达水平的影响。方法：以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,用免疫组化法。结果：显示双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤ＰＣＮＡ阳性细胞密度以及ｂｃｌ－２蛋白表达率、表达强度、阳性细胞密度均显著低于肿瘤对照组（Ｐ＜０．０１）。结论：青春型双歧杆菌能明显降低大肠癌的增殖活性,同时使其ｂｃｌ－２基因的表达下调。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对实验性大肠癌诱导型一氧化氮合酶表达的影响

建立大肠癌裸鼠移植瘤模型,以免疫组化法观察大肠癌移植瘤一氧化氮合酶（iNOS）基因的蛋白表达水平,结果显示完整肽聚糖（Whole peptidoglycan,WPG）注射组大肠癌移植瘤iNOS蛋白的表达率、表达强度以及阳性细胞密度均明显高于肿瘤对照组（P＜0.01）,提示分叉双歧杆菌的WPG能增强大肠癌移植瘤细胞iNOS基因的蛋白表达,这可能是其抑瘤机制之一。     

双歧杆菌诱发实验性大肠癌凋亡的电镜观察

本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,用透射电镜观察了青春型双歧杆菌对移植瘤超微结构的影响。结果表明：双歧杆菌经荷瘤鼠腹腔注射后能诱导多量大肠癌细胞凋亡,凋亡早期的细胞主要表现为核染色质浓缩边聚;中期为核膜破裂,胞核崩解,凋亡小体形成;晚期主要为邻近活细胞吞噬凋亡小体。提示双歧杆菌诱导大肠癌细胞程序化死亡可能是其抑瘤机制之一。     

原位末端标记技术观察双歧杆菌诱导实验性大肠癌的凋亡

本文以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,将实验分为双歧杆菌注射组以及肿瘤对照组,用原位末端标记法观察了移植瘤组织的凋亡细胞百分率。结果显示：双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤的凋亡细胞百分率为２６４２８±１８６２,而对照组则为２０６２±８８０,两者比较具有显著的统计学意义（Ｐ＜０００１）。提示青春型双歧杆菌可诱导大肠癌组织的凋亡,这可能是其抑瘤机理的一个方面     

血管形成在双歧杆菌预防大肠癌生长中的作用

目的 从血管形成角度探索青春型双歧杆菌预防大肠癌生长的途径。方法 建立大肠癌裸鼠移植瘤模型,以免疫组化法检测大肠癌组织血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达水平及其微血管密度（MVD）。结果 双歧杆菌预防组大肠癌VEGF的阳性细胞密度及MVD的数量均明显低于肿瘤对照组（P〈0．01）。结论 青春型双歧杆菌能下调大肠癌VEGF的表达,进而抑制其血管形成,这可能是它预防大肠癌生长的途径之一。     

Inducible nitric oxide synthase and apoptosis in human B cell lymphomas

Nitric oxide synthases are isoenzymes that catalyse the synthesis of nitric oxide (NO). NO plays both pathological and physiological roles depending on its rate of synthesis and concentration in cellular source and microenvironment. Apoptosis is an important biological factor in lymphomas. This study evaluates expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in human lymphomas and its relation with apoptosis. This study comprised 46 cases of B-cell lymphoma. The lymphomas were classified as 3 mantle cell, 5 marginal zone, 4 follicular, 2 Burkitt, 25 diffuse large cell, 2 anaplastic large cell, 3 lymphoblastic, 2 lymphoplasmacytic according to WHO classification of lymphoid neoplasms. Hematoxylin eosin slides of the cases were reviewed and immunoperoxidase technique was performed iNOS and Caspase monoclonal antibodies to selected sections of each case. Antigen staining was carried out with iNOS and Caspase proteins and Ultravision Polyvalent, HRP-AEC kit (Neomarkers-Biogen USA). For the evaluation of iNOS and Caspase, tumor areas with a high density of expression were chosen. Positive stained cells were counted in 5 different areas at a magnification ×40 by an Olympus B × 51 microscope in each case. The iNOS and Caspase expressions were independently recorded by four pathologists and the results were averaged. All of the cases were positive for the iNOS and Caspase. But there is not a statistically important relation between lymphoma grade and iNOS activity. We could not find a correlation between iNOS and patients age. This study reveals the capacity of B-cell neoplasms to express iNOS in situ. In conclusion, our study revealed that there is a positive relation between iNOS expression and apoptosis (p $=$ 0.032 spearman correlation).     

siRNA沉默VEGF基因对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的研究VEGF和受体FLT-1、FLK-1在大肠癌组织中的表达及与临床病理因素之间的关系;观察SiRNA干扰VEGF基因对人大肠癌细胞系Caco-2生物学特性的影响。方法应用免疫组织化学S?P法,检测82例大肠癌及14例大肠正常黏膜组织中VEGF和FLT-1、FLK-1的表达;以脂质体lip-2000为载体,用针对VEGF特异靶点的siRNA转染入人大肠癌细胞系Caco-2后,免疫细胞化学S-P法、Western Blot检测VEGF蛋白表达变化,MTT法检测对细胞增殖的影响;流式细胞技术检测细胞凋亡。结果 (1)大肠癌组织VEGF和受体FLT-1、FLK-1阳性表达率显著高于正常大肠组织(P0.05)。VEGF的表达在有无淋巴结转移组和不同的Duke’s分期中亦有显著差异(P0.05)。(2)VEGF-siRNA转染Caco-2细胞后,免疫细胞化学结果显示转染VEGF-siRNA组阳性细胞呈弱阳性表达,明显减弱;Westernblot结果显示VEGF-siRNA组细胞的蛋白条带亮度明显降低;MTT检测VEGF-siRNA组细胞生长出现明显的抑制(P0.05),不同时段(24h、48h、72h)肿瘤细胞增殖抑制率之间有显著差异(P0.05);流式细胞术检测VEGF-siRNA组出现明显亚二倍体峰,凋亡率显著高于正常对照组(P0.01)。结论 VEGF在大肠癌的进展过程中起重要作用。siRNA干扰VEGF基因能有效抑制人大肠癌细胞系VEGF蛋白表达,细胞增殖能力减弱,促进细胞凋亡。以VEGF基因为靶点,利用siRNA技术进行基因治疗有可能成为一种新的有效手段。     

p27和p53基因在大肠癌中的表达及临床意义

目的 研究大肠癌患者癌组织中p27、p53基因的表达及其相互之间的关系,以探讨p27、p53基因在大肠癌发生中的作用及临床意义。方法 运用原位杂交方法及免疫组化SP法检测58例大肠癌组织及正常黏膜中p27mRNA和P27蛋白的表达,同时运用免疫组化法分析相同组织中P53蛋白表达状况。结果 p27mRNA在大肠癌组织及正常黏膜中的表达阳性率均为100%。P27蛋白在大肠癌组织中的表达阳性率为55.17%,在正常黏膜中的表达阳性率为96.55%（P〈0.01）;癌组织中P53蛋白表达阳性率为53.45%,正常黏膜未见P53蛋白表达（P〈0.01）;大肠癌组织中P27与P53蛋白表达无明显相关性。P27蛋白的表达与肿瘤分化程度呈负相关（P〈0.01）,与临床其它病理因素均无相关性（P〉0.05）。大肠癌组织中P53蛋白表达与临床病理因素亦无相关性（P〉0.05）。结论 P27蛋白表达的调控主要在转录后水平,P27蛋白检测可作为评价大肠癌恶性程度和预后判断的重要指标。P27及P53蛋白在大肠癌的发生发展过程中具有重要作用。     

高糖通过Nox4型NADPH氧化酶影响施旺细胞凋亡的机制研究

目的:探讨高糖通过Nox4型NADPH氧化酶影响施旺细胞凋亡的机制。方法:提取Wistar大鼠新生鼠的施旺细胞体外培养。分为对照组、高糖组、NOX4 siRNA组及对照siRNA组(n=10)。采用WST-1法检测细胞活力,DCFH-DA法检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量,荧光实时定量RT-PCR检测Nox4和Caspase3 mRNA表达,蛋白印迹法检测Nox4和Caspase3蛋白表达。结果:高糖培养上调施旺细胞Nox4 mRNA及蛋白表达,降低施旺细胞活性,增加细胞内ROS含量,通过增加Caspase3 mRNA及蛋白表达促进细胞凋亡。NOX4 siRNA通过抑制Nox4基因表达,阻止高糖培养的施旺细胞内ROS蓄积,降低高糖对施旺细胞的活性损害,通过下调Caspase3 mRNA及蛋白表达减少细胞凋亡。结论:Nox4参与高糖引起的施旺细胞凋亡,针对Nox4表达或功能的调控方式可能成为治疗糖尿病周围神经病变的新途径。     

Smac类似物Birinapant的抗肝癌作用及相关分子机制

目的：探讨Birinapant抗肝癌的作用及分子机制。方法：人肝癌细胞QGY-7701经终浓度为0、1、5、25和125 nmol/L的Birinapant作用24、48和72 h,各设3个复孔,检测细胞增殖活性,分析细胞凋亡率,观察细胞核型和线粒体膜电位变化,分析基因转录与表达水平,评价药物细胞毒性;同时,将4周龄雄性BALB/C小鼠随机分成5组,每组20只,腹股沟注射肝癌细胞QGY-7701,两天后各组皮下分别注射Birinapant（0、1、5、25和125 μg/kg）,隔天注射一次,首次注射Birinapant后18 d,每组脱颈处死10只小鼠,取瘤组织称重,并记录各组剩余10只小鼠的存活期,观察Birinapant对荷瘤小鼠肝癌生长及生存期的影响。结果：与对照组（NC）比较,Birinapant处理组的细胞增殖显著受抑制、细胞凋亡率显著增加（P<0.01）,出现细胞线粒体膜电位降低及核型改变,同时细胞内cIAP-1（cellular inhibitor of apoptosis protein 1）、cIAP-2（cellular inhibitor of apoptosis protein 2）、ras、raf、mek、erk基因的表达显著下调（P<0.01）,caspase-3和caspase-9基因的表达水平显著上调（P<0.01）;与模型对照组（MG）比较,Birinapant处理组的荷瘤小鼠瘤组织生长速度显著减小且生存期延长（P<0.01）。结论：Birinapant通过抑制cIAP-1、cIAP-2和Ras-Raf-MEK-ERK通路蛋白的表达,激活线粒体介导的内源性凋亡,对肝癌有一定的抑制作用。     

低氧胁迫对青海湖裸鲤端脑抗氧化酶活性、细胞凋亡及相关基因表达的影响

为研究青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)端脑在低氧胁迫下的生理响应机制,选取体重(97.68±0.12) g、体长(24.11±0.12) cm的健康青海湖裸鲤进行低氧[溶解氧含量(0.7±0.1) mg/L]胁迫,设常氧[溶解氧含量(8.4±0.1) mg/L]为对照组,分别在低氧胁迫8h和24h时采集青海湖裸鲤的端脑组织,进行脑细胞线粒体超微结构和膜电位、抗氧化酶活性、脑细胞凋亡和凋亡相关基因(Caspase 3、Bax和Bcl-2)及低氧诱导反应相关基因(Hif-2α和EGLN1)表达测定。结果显示,在低氧胁迫过程中:(1)端脑神经细胞线粒体出现肿胀、嵴溶解;线粒体膜电位在8h时显著升高, 24h时显著降低,表明随着低氧胁迫时间的延长端脑神经细胞线粒体可能受到了损伤。(2)TUNEL检测显示端脑细胞发生了凋亡,但随着低氧胁迫时间延长端脑细胞凋亡率无显著差异;qPCR显示,随着低氧胁迫时间的延长端脑细胞Caspase 3、Bax和Bcl-2基因表达水平升高; Bcl-2/Bax比值随低氧胁迫时间的延长显著降低; Hif-2α基因表达水平显著升高; EGLN...