急性髓系白血病免疫表型特征及遗传学特征分析

目的:研究急性髓系白血病免疫表型特征以及遗传学特征。方法:选取2011年1月到2014年5月我院收治的急性髓系白血病患者169例,采用流式细胞术和相关的单克隆抗体来分析所有患者的骨髓免疫表型,采用染G染色体显带技术分析患者的核型,根据淋系抗原(lym Ag)的表达将患者分为lym Ag+组和lym Ag-组。结果:抗原CD13、CD33、CD117以及MPO等髓系抗原最常在急性髓系白血病患者中表达,其中CD117在M3型病例中表达为85.7%(24/28),而CD34、HLA-DR双阴性、较强的自发荧光、CD13、CD33和MPO对M3型的诊断也具有一定的价值;其中47.9%(81/169)的患者伴随着淋系抗原表达,以CD7和CD56为主;60.4%(102/169)的患者伴随着核型异常;而伴随着t(8:21)的M2患者中的CD15、CD19和CD56的表达显著增强,而t(15:17)均发生于M3型患者中;而lym Ag+组患者CD34的阳性患者为77.8%(63/81)显著高于lym Ag-组的47.7%(42/88),两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:免疫表型对急性髓系白血病的诊断具有重要的意义,且免疫表型和异常核型存在密切的联系。     

兔脓毒性休克模型的建立

目的:建立相对稳定的兔脓毒性休克模型.方法:雄性新西兰大白兔20只,随机分为模型组和假手术组.麻醉后无菌操作下取中、下腹部正中切口,找出盲肠,距盲肠末端8.0cm处4号丝线结扎盲肠和相应血管;于盲肠游离末端避开血管戳孔2次,孔径0.5cm;将盲肠原位放回腹腔,缝合腹壁切口;腹腔内注射30ml/kg温生理盐水.假手术组只探查腹腔.术后每隔3小时监测肛温.颈动脉插管有创动脉压监测确定模型成功后送血培养、血气、血乳酸,监测4小时后处死动物,送腹水培养,取右肺中叶测定肺含水量,取心、肝、脾、肺、肾、肠常规切片HE染色.结果:制模成功时间为:(18.91±1.384)小时;模型平均动脉压MAP(95.00±10.817 vs 52.38±15.565,P＜0.05);血气:PH(7.40±0.047 vs 7.09±0.146,P＜0.01),PCO2(30.0±5.831 vs 19.80±4.104,P＜0.01),BE(-6.46±4.931 vs -24.11±4.276,P＜0.01),HCO3-(18.45±4.367 vs 5.73±2.422,P＜0.01);血乳酸(2.53±1.108 vs 7.85±5.834,P＜0.05);血培养(7/10)阳性:大肠埃希菌;腹水培养(10/10)阳性:大肠埃希菌及阴沟肠杆菌;肛温于术后呈先上升后下降,假手术组肛温较模型组差异有显著性(39.63±0.492 vs 36.82±0.999,P＜0.01);成模后肛温与平均动脉压呈正相关关系,r=0.748.P=0.013,方程:y(平均动脉压)=34.46x+0.45;肺干湿比及肺含水量无明显差异[(0.22±0.014 vs 0.19±0.288,P＞0.05),(78.17±1.375 vs 80.58±2.878,P＞0.05)].常规HE染色可见明显病理学改变.结论:本模型可模拟多微生物感染致脓毒性休克模型,模型相对稳定,可用于兔种属.     

人CCL20基因打靶载体的构建与鉴定

目的:构建针对人CC亚族趋化因子配体20(CC chemokine ligand 20,CCL20)基因外显子2的置换型打靶栽体.方法:设计和合成引物,利用长距离聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)从永生化人角质形成细胞系(HaCaT)基因组DNA中克隆出CCL20基因组DNA片段,再以CCL20基因为模板扩增出长度为1969 bp的同源短臂和2356 bp的同源长臂.分别插入pioxP栽体的Neo基因上游和下游,构建针对人CCL20基因外显子2的置换型打靶载体(ploxP-hCCL20).将打靶载体线性化并以电穿孔方法转移入HaCaT,观察克隆的形成.结果:经过PCR、限制性内切酶鉴定及DNA序列测定.证实该载体的两条同源臂包含人CCL20基因的外显子1、3、4及其邻近的部分内含子.结论:ploxP-hCCL20载体构建成功,增加Neo基因下游同源臂长度的策略有可能提高细胞基因敲除的同源重组率.     

胆固醇酯转运蛋白转基因动物的研究进展

胆固醇酯转运蛋白 (ＣＥＴＰ)是胆固醇代谢中的一种血浆酶 ,是胆固醇逆向转运系统中的关键蛋白质。ＣＥＴＰ催化血浆脂蛋白之间非极性脂质特别是胆固醇酯 (ＣＥ)的交换和平衡 ,关系到各种脂蛋白的颗粒大小和脂质组成 ,决定高密度脂蛋白 (ＨＤＬ)和低密度脂蛋白 (ＬＤＬ)质和量的变化 ,在胆固醇逆向转运中起关键作用 ,与动脉粥样硬化 (ＡＳ)的发生和发展密切相关。ＣＥＴＰ缺陷患者伴有明显的高α脂蛋白血症 (ＨＡＬＰ)的发现使人们对ＣＥＴＰ在脂代谢中的重要性有了更高认识。人ＣＥＴＰ遗传缺陷表型和ＣＥＴＰ转基因动物研究表明 ,ＣＥＴＰ…     

林带空间配置与布局优化研究

农田防护林(林带)的空间配置与布局是影响防护林结构和防护效益发挥并持续的关键因素．为达到农田防护林防护效益最大并持续的经营目标。在保证林分多样性和稳定性的条件下．林带必须具有空间上布局的合理性和时间上的连续性．经过多年防护林营林研究实践．在对1992年于辽宁省昌图县双井子乡设计营造的试验示范林带调查的基础上．对农田防护林单条林带方向的设置、带内树木的空间搭配方式、树种组成形式,多条林带或林网的带间距离以及大面积或区域防护林体系的空间景观布局等进行了综合研究．结果表明,单条林带和林网走向都应以垂直主害风作为设计的原则;林带内树木的空间搭配以“品”字型为佳,在不同树种混交的同一条林带中,可利用“边行优势”将生长相对缓慢的树种配置于边行．生长相对迅速的树种配置于内行;多条林带或林网空间配置参数——带间距离的设计应以林带达到初始防护成熟龄时的树高作为成林高．以林带结构变化规律和降低害风比例作为林带设计关键参数;区域防护林体系的空间布局应以景观生态学原理为基础．对林网体系进行评价与调控．     

mtCOI PCR-RFLP技术鉴别中国入侵型和土著型烟粉虱种群的有效性分析

烟粉虱Bemisia tabaci (Gennadius)是世界范围内最重要的入侵生物之一,准确地鉴别烟粉虱入侵生物型和土著生物型具有十分重要的现实意义。mtCOI PCR-RFLP技术具有快速、高效的特点,是当前应用最广泛的烟粉虱生物型鉴定技术,但是,不同限制性内切酶为基础的mtCOI PCR-RFLP技术在鉴定我国烟粉虱种群中的有效性仍不明了。本文比较了已报导的5种mtCOI PCR-RFLP技术在鉴别中国烟粉虱种群入侵生物型和土著生物型(B型、Q型,ZHJ1型、ZHJ2型、ZHJ3型)的有效性。结果表明,内切酶AluI不能区分B型和ZHJ2型烟粉虱;内切酶TaqI不能准确区分ZHJ3型和Q型烟粉虱个体;而内切酶VspI不仅不能准确区分ZHJ1型和Q型烟粉虱个体,也不能准确区分B型和ZHJ2型烟粉虱;内切酶MseI和Tru9I则不能有效鉴别上述5种烟粉虱生物型,因此不适宜推广使用。     

固醇调节元件结合蛋白的研究

细胞膜中的胆固醇浓度保持动态平衡有赖于固醇调节元件结构蛋白（SREBPs)。SREBPs是DNA结合蛋白,当细胞内固醇减少时,SREBPs裂解激活蛋白（SCAP）能感受到,SCAP与SREBPs形成复合物,护送SREBPs从内质网到高尔基体,再经过两个顺序性的蛋白裂解,SREBPs的N端结构域从膜上释放出发,含有bHLH-Zip的该结构域进入到细胞核,与固醇调节元件相结合,进而激活编码胆固醇生物合成的酶和LDL受体基因的转录;当胞内固醇超载时,SCAP不再护送SREBPs到高尔基体进行蛋白裂解,核内SREBPs的N端结构域也发生降解,胆固醇合成停止。若此信号传导中任一环节有误,会导致体内固醇代谢紊乱,引起高脂血症。     

微量材料系列性基因表达分析技术的研究

建立了微量材料(1 μg RNA)系列性基因表达分析技术（minimal serial analysis of gene expression, miniSAGE）,并用miniSAGE技术对冠心病（coronary artery disease, CAD）患者和正常人成纤维细胞的基因表达谱进行了分析,合成了两个高质量的SAGE库,比较了两个库的SAGE标签,为CAD发病机理的研究提供了大量表达异常基因的资料.从而为后续分离与CAD发病相关的新基因打下了基础.miniSAGE技术是一种有力的基因表达分析方法,可用于微量RNA（1 μg）材料的基因表达分析,为多因素复杂疾病的研究提供了有力的基因表达分析工具.     

免疫磁珠分选人角朊干细胞的实验研究

目的:探索人角朊干细胞(keratinocyte stem cells,KSCs)的免疫磁珠分选(Magnetic Activated Cell Sorting,MACS)的方法。方法:从人包皮组织获得角朊细胞悬液,然后利用人角朊干细胞表面CD49f(整合素α6)和CD71的表达情况(CD49fbriCD71dim)通过MACS法将KSCs分选出来,在荧光显微镜下观察其荧光标记情况,同时将分选所得的CD49fbriCD71dim细胞进行体外无血清培养,观察其形态及克隆形成。结果:人角朊细胞经MACS法分选后所得的CD49fbriCD71dim细胞比率可达12．02(±6．92)%。CD49fbriCD71dim细胞经培养可见细胞为典型的上皮样特征,呈铺路石样形态,高核浆比例,细胞紧密排列,轮廓清楚,折光性好,并可在5-7天左右形成全克隆,符合KSCs的特点。结论:研究表明MACS分选法可以得到较高比例的人角朊干细胞,并能进行后续培养研究,其不失为一种较理想的人角朊干细胞的分选方法。     

慢性阻塞性肺病稳定期的下呼吸道细菌定植研究

目的 研究慢性阻塞性肺病(COPD)患者是否存在下呼吸道细菌定植,其对气道炎症的影响以及与急性加重之间的关系。方法 人选诊断明确的COPD稳定期患者,对其痰液及支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细菌学定量、定性分析,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)对痰液白细胞介素6(IL-6)、IL-8,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平检测。结果 46例中、重度COPD患者中,在稳定期和急性加重期,痰标本菌落计数＞10~6 CFU／ml分别为32．6％(15／46)和45．65％(21／46),BALF菌落计数＞10~3 CFU／ml则分别为44．4％(4／9)和54．5％(6／11),其中流感嗜血杆菌占首位,急性加重期菌落数显著高于稳定期,存在细菌定植的患者痰液中IL-6及TNFα的浓度显著高于无细菌定植的患者,细菌定植和IL-8呈显著正相关(P＜0．05)。结论 部分COPD稳定期患者存在细菌定植,细菌定植的患者可能通过菌落数量的增加和促使气道炎症反应而导致急性加重频繁。