重组CHO乙肝疫苗细胞培养收换液工艺改进

利用CHO细胞生产重组乙肝疫苗,在细胞培养收换液工艺中建立管道化生产线。采用大罐配成新鲜工作液,过滤除菌,经管道直接输入细胞培养瓶内;细胞培养上清的收集也经管道或直接倒入不锈钢罐内。工艺改进后,细胞原液收获率提高15％,配液污染率降低12％,同时降低了成本。     

乙型肝炎卡介苗联合疫苗稳定性的研究

研究乙型肝炎卡介苗联合疫苗中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)组分的稳定性。将连续3批联合疫苗,分别放置于37、25、4℃三种温度条件下,并于1、2、3、6、12、18、24个月时间取样检测,采用ELISA方法检测HBsAg含量,研究不同条件下联合疫苗中HBsAg的变化和HBsAg组分的免疫原性。37、25℃条件下6个月,4℃条件下2a,HBsAg组份含量无明显变化,均在合格范围内。37℃放置1、6个月,4℃条件下放置2a的联合疫苗免疫豚鼠,HBsAg组分的免疫原性无明显变化。乙型肝炎卡介苗联合疫苗中HBsAg组分的稳定性良好,4℃条件下放置2a效力无明显下降。     

神经祖细胞与纤维蛋白支撑物移植对老年痴呆模型鼠的记忆认知功能改善及其机理探究

目的探讨阿尔茨海默病（AD）模型鼠双侧海马区移植含多因子孵育的神经祖细胞（NPCs）后记忆认知功能改善情况及NPCs移植后迁移定位和分化能力。 方法取胎龄10?d的C57BL/6J孕鼠,分离得胎鼠NPCs,NPCs体外分化及鉴定,AD模型鼠分3组：NPCs+因子组、因子组及PBS组,对照组为同月龄C57BL/6J小鼠;Morris水迷宫及新物体识别实验检测AD模型鼠移植NPCs细胞前,及移植1至6个月后记忆行为变化情况;通过免疫荧光,免疫组化和Western-blot检测海马区移植的NPCs向神经元和胆碱能神经元分化及迁移能力。组间比较采用F检验。 结果Morris水迷宫实验中,NPCs+因子组找到平台前的逃避潜伏期时间（14.12±7.45）s要明显低于注射PBS的AD模型鼠组[（39.65±4.64）?s,F = 2.578,P = 0.0094],因子组时间（15.68±5.34）s同样低于PBS组[（39.65±4.64）s,F?= 1.324,P = 0.0016],24 h撤去平台后,NPCs+因子组逃避潜伏期时间（15.12±3.52）s仍低于PBS组[（37.17±2.18）?s,F = 2.598,P = 0.0003],因子组时间（16.62±3.23）s同样低于PBS组[（37.17±2.18）s,F = 2.186,P = 0.0004）];新物体识别实验中,各实验组对新物体探究时间占总探究时间百分比结果中,NPCs+因子组（68.46±2.4）%要高于PBS组[（54.47±4.79）%,F =3.983,P = 0.018],因子组（65.20±1.03）%同样高于PBS组[（54.47±4.79）%,F = 21.63,P = 0.042];实验结果表明,通过移植细胞与因子AD模型鼠的记忆认知功能在早期均得到改善,随着时间的增长,移植NPCs组的记忆改善情况持续时间更长久;Western blot结果显示AD模型鼠海马区胆碱能神经元与正常C57BL/6J鼠相比表达减少,移植NPCs后,AD模型鼠脑内胆碱能神经元增多;免疫荧光与免疫组化结果显示,移植的NPCs在AD模型鼠脑内移植区存活,并向胆碱能神经元分化。 结论AD模型鼠双侧海马区移植的含多因子孵育的NPCs,通过分化成功能性的胆碱能神经元来改善AD鼠的记忆认知功能。     

人体皮肤成纤维细胞的快速分离及多向分化能力鉴定

目的建立快速分离人皮肤成纤维细胞的方法,并探讨成纤维细胞在成脂、成骨、成软骨和成神经的多向分化潜能。 方法利用组织块培养法分离人体皮肤成纤维细胞,通过形态学观察、流式分析、Vimentin蛋白染色鉴定成纤维细胞;再利用生长曲线、核型分析、线粒体染色分析不同传代细胞的增殖速度,线粒体及染色体形态的改变;最后进行成纤维细胞成脂、成骨、成软骨和成神经的诱导分化实验,鉴定其多向分化潜能。两代细胞增殖速度及线料体相对量的比较采用t检验统计分析。 结果分离的皮肤成纤维细胞呈典型梭状及多角形;高表达细胞表面标记物CD90 （NCF1,NCF2占比分别为99.9%,98.7%）和CD73 （NCF1,NCF2占比分别为98.2%,85.6%）,但极少表达造血干细胞标记物CD34 （NCF1,NCF2占比分别为1.8%,2.6%）;细胞Vimentin蛋白表达呈阳性,阳性率为100%;对细胞生长曲线进行分析,表明分离后不同代次细胞增殖差异无统计学意义（t?= 1.586,P?= 0.1567）;线粒体相对含量统计分析,同一株细胞系第5代（相对荧光强度值：6876±577.8）与第10代（相对荧光强度值：7371±471.9）之间的差异无统计学意义（t?= 0.664,P?= 0.543）;核型分析分别显示传代后保持染色体数目为正常46条且形态无明显异常;经诱导后成纤维细胞可向成脂、成骨、成软骨和类神经分化。 结论利用组织块培养法分离出的人体皮肤成纤维细胞状态稳定,增殖能力强,具有成脂、成骨、成软骨和成神经多向分化诱导潜能,为细胞移植修复骨损伤、软骨损伤和神经损伤性疾病的临床研究提供细胞来源及实验依据。     

急性出血性结膜炎流行后居民中柯萨奇病毒A24变种抗体水平的变化

由柯萨奇病毒A24变种(CA24v)引起的急性出血性结膜炎(AHC)在沙市出现首次流行后半年与1年(即1989年春、秋季),从城市居民中采集了423份血清,用微量中和试验作了CA24v中和抗体与特异性IgM的检测。春季中和抗体阳性率为37.9％,特异性IgM阳性率为3.3％;秋季为48.8％与6.7％,并从感冒样病人中分离到1株CA24v,提示1989年秋季又有一次CA24v的传播过程。在年龄分布上,秋季中各年龄组抗体阳性率已无明显差异,提示经一年多的传播扩散,各年龄组的免疫水平已趋于接近,达到50％左右,并预测近期内本地将不会有CA24v引起的AHC流行。     

森林脑炎病毒地鼠肾细胞培养增殖动态及疫苗生产工艺改进的研究

为了解森林脑炎病毒的增殖动态,改进现有疫苗的工艺,将森林脑炎病毒感染地鼠肾细胞,控制不同的培养条件,以利病毒增殖,并于不同时间收获病毒液,测定病毒滴度。疫苗液用不同浓度的福尔马林灭活后,测定疫苗的保护指数。结果表明森张株病毒增殖高峰在68－72h,多次收获的病毒液及其病毒滴度、疫苗效力均优于现有疫苗,新工艺可提高病毒产量,为疫苗的精制纯人奠定了基础。