人HPPCn重组蛋白可溶性表达及其增殖活性检测

HPPCn是一种新的肝细胞刺激因子,获得较高纯度的具有生物活性的HPPCn蛋白对研究其生物学功能具有重要意义。HPPCn在重组质粒PET-24a(+)/HPPCn中,诱导表达产物主要以包涵体形式为主。为优化表达条件,运用冷休克表达载体pColdⅡ和无缝克隆技术获得重组质粒pColdⅡ/HPPCn,分别对诱导温度、时间、分子伴侣等诱导条件进行筛选,镍离子柱亲和层析纯化,Western blot分析目的蛋白特异性,不同浓度人HPPCn重组蛋白(0、10、100ng/ml)刺激SMMC7721细胞,免疫细胞化学方法测定Brdu掺入、PCNA表达变化。目的蛋白在培养温度为16℃,终浓度为0.1mmol/L的IPTG过夜诱导时为可溶性表达,最终得到人重组HPPCn蛋白纯度为94.88%,人HPPCn重组蛋白可刺激SMMC7721细胞Brdu掺入增加、PCNA表达水平上调,其刺激作用具有量效关系。通过冷休克表达系统获得可溶性表达的人重组HPPCn蛋白,其具有促进SMMC7721细胞增殖的生物学功能,为深入研究HPPCn的作用机制提供了技术条件。     

胰腺癌对TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)的抗性与逆转研究

TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand)是一种能识别和选择性杀伤肿瘤细胞的蛋白质因子,但研究发现胰腺癌对TRAIL的敏感程度远远不及其他肿瘤,其抵抗机制主要集中于胞内水平的调节,如c-FLIPS、BCL-2/BCL-xL、XIAP表达上调等,且针对性的逆转策略也进行了深入的研究.本文就TRAIL途径在胰腺癌中的研究进展作一概要的介绍.     

从大容量噬菌体抗体库中筛选抗Acr蛋白人源单链抗体

目的:从天然的大容量噬菌体抗体库中筛选特异的抗结核分枝杆菌晶体蛋白( alpha-crystallin Acr)的人源抗体.方法:以结核分枝杆菌Acr蛋白包被免疫管,通过对噬菌体抗体库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的过程从大容量抗体库中筛选特异性抗结核分枝杆菌Acr蛋白的抗体,并对可变区序列进行了测序分析.将特异性的噬菌体抗体感染HB2151菌,经IPTG诱导表达,制备了抗结核分枝杆菌Acr蛋白的可溶性单链抗体;对其序列和抗原结合活性进行分析鉴定.结果:经过4轮筛选,获得了43个与结核分枝杆菌Acr蛋白结合的阳性克隆,其中29个特异结合的克隆;测序分析有26不同的可变区片段;通过可溶性单链抗体(scFv)表达筛选到14株特异性结合Acr蛋白的可溶性单链抗体克隆;经过基因测序,分析了可变区基因的亚群.成功制备了可溶性单链抗体.Westren blotting分析证实筛选的人源单链抗体能与天然蛋白结合.结论:利用单链大容量抗体库获得抗结核分枝杆菌Acr蛋白的噬菌体抗体并且成功制备抗结核分枝杆菌Acr天然蛋白的可溶性单链抗体,为今后的研究和应用奠定基础.     

模拟舰船火灾烟雾吸入致急性肺损伤大鼠模型的建立与评估

目的建立一种以多种复合材料为燃烧物,且温度可控的舰船火灾烟雾吸入性急性肺损伤大鼠模型。方法设计独立的产烟箱与舱室模拟箱,将清醒的大鼠限制在舱室模拟箱体内指定区域的鼠笼内。实验过程中通过检测并控制试验箱内进烟量达到致伤因素稳定的目的。实验分两部分进行,第一部分为不同烟雾吸入时间组,观察各组烟雾吸入48 h的生存率;第二部分是选取烟雾吸入30 min为致伤因素,对烟雾吸入后1,6,24 h的血气分析、肺损伤病理评分、肺泡灌洗液、外周血白细胞、主要炎症因子、信号通路中主要信号因子、肝肾功能的变化进行检测。结果 1)不同烟雾吸入时间组生存率结果为:84.21%(15 min组);25%(30 min组),0(50 min组);(2)烟雾吸入30 min后1 h碳氧血红蛋白、二氧化碳分压、乳酸值在烟雾吸入后1 h内显著升高(P0.05),此后可逐渐恢复到正常水平;与对照组相比,烟雾吸入后1,6,24 h肺损伤评分(LIS)、肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量显著增高;BALF中白细胞总数于烟雾吸入后显著升高,其中肺泡巨噬细胞比例呈现先降低后升高而中性粒细胞先升高后降低的趋势。对多种炎症因子及信号通路的研究发现,烟雾吸入1 h内即可出现多种信号因子的活化,WB及免疫荧光显示6 h活化最显著,24 h逐渐降低。烟雾吸入后的肝肾功能无特异性改变。结论建立了一种稳定可靠且高致死率的模拟舰船火灾烟雾吸入肺损伤模型,烟雾吸入急性期存在多条炎症通路的广泛激活,伴有典型的炎性细胞改变及肺部损伤特点,可为此后的深入研究奠定基础。     

单倍体相合造血干细胞移植联合脐带间充质干细胞输注治疗儿童重型再生障碍性贫血的临床观察及安全性分析

目的观察单倍体相合造血干细胞移植（hi-HSCT）联合脐带间充质干细胞（hUC-MSC）输注治疗儿童重型再生障碍性贫血（SAA）的临床效果及安全性。 方法整理海军总医院儿科2010年2月至2014年1月收治的11例接受hi-HSCT联合hUC-MSC输注治疗的SAA患儿的临床资料,进行回顾性分析。对其治疗情况、并发症发生情况及生存情况进行观察,总结该治疗方案的临床效果与安全性,以及治疗体会。 结果患儿全部获得造血重建,移植后1个月复查嵌合体均为70% ~ 100%供者嵌合。白细胞植入时间8 ~ 21 d,中位时间为12 d;血小板植入时间10 ~ 24 d,中位时间为15 d。11例患儿中,2例发生Ⅰ度急性移植物抗宿主病（GVHD）,1例发生Ⅲ度急性GVHD,均经相关治疗后好转;1例发生局限性慢性GVHD,经相关治疗后好转;2例发生广泛性慢性GVHD,发生率为18.18%。患儿移植期间均发生不同程度的恶心、呕吐、纳差和发热等症状,给予对症支持治疗后好转。8例（72.73%）发生口腔黏膜炎,2例（18.18%）发生肺部感染,9例（81.82%）发生病毒感染,2例（18.18%）发生腹泻,均经综合治疗后好转。11例患儿随访时间12 ~ 29个月,中位随访时间16个月,截止末次随访时1例因广泛性慢性GVHD接受持续治疗,2例接受免疫抑制剂减量治疗,其余4例均停用免疫抑制剂;1例患儿因家属自行停用环孢素A发生排异死亡。 结论hi-HSCT联合hUC-MSC输注治疗儿童SAA具有良好临床疗效,值得进一步关注。     

GCC mRNA和hTERT mRNA在腹腔镜结直肠癌根治术患者外周血中的表达及意义

目的:探讨腹腔镜和开腹手术对结直肠癌根治术患者外周血鸟苷酸环化酶C(GCC)m RNA和人端粒酶逆转录酶(h TERT)m RNA表达的影响及其意义。方法:按照随机数字表法将2009年8月-2014年4月我院收治的结直肠癌患者分为腹腔镜组和开腹手术组,通过逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测并比较两组患者外周血GCC m RNA和h TERT m RNA的表达情况。结果:与开腹手术组相比较,腹腔镜组患者手术时间长、术中出血量少、术后排气早、住院时间短,差异有统计学意义(P0.01);两组患者手术前GCC m RNA和h TERT m RNA阳性率无显著差异(P0.05);两组患者手术后GCC m RNA和h TERT m RNA阳性率显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:腹腔镜和开腹手术均会增加结直肠癌患者血行微转移,但腹腔镜结直肠根治术不会增加术后肿瘤血循环微转移的危险性。     

AOM／DSS模型与炎症相关癌变研究进展

氧化偶氮甲烷（azoxymethane,AOM）／葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate,DSS）小鼠模型是一种在致癌剂AOM和致炎剂DSS协同作用基础上,由炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）逐步发展为结直肠癌的炎症相关性癌症的研究模型。AOM／DSS模型能很好地模拟慢性肠道炎症诱发癌症的生理病理过程,近年来被广泛用于炎症相关性癌症形成机制的研究。简要综述AOM／DSS模型与炎症相关性癌症癌变机理的研究进展。     

2010年度国家自然科学基金微生物学学科项目申请与资助情况分析

本文详细介绍了2010年度国家自然科学基金委员会生命科学部微生物学学科的项目申请、受理和资助的情况,并对项目申请中的新情况、新特征进行了初步的分析,希望这些分析能够为今后科研人员的项目申请提供有用的参考。     

基于心电信号的飞行员应激评价模型的研究

本文基于教练机飞行员训练期间的心电信号,以人体瞬间应激水平为评价依据,通过采集特殊的飞行作业期间的飞行员的心电信号,计算心率以及心率变异性的相关指标,对个体产生瞬间应激的心电信号进行心率相关指标分析以及心率变异性的时域指标分析.同时对应激反应下心率曲线面积变化进行分析,采用多尺度算法,构建了应激强度随训练次数变化的函数关系,揭示了飞行训练应激强度变化的规律,提出了飞行训练及应激阶段的划分方法,建立了基于心电信号的飞行员应激评价的模型.     

小潮气量通气对严重胸外伤所致急性呼吸窘迫综合征的疗效观察

目的:探讨小潮气量(LTV)加呼气末正压(PEEP)通气模式(MV)治疗严重胸外伤所致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的疗效,提高重症胸外伤救治的成功率;方法:以29例小潮气量(5～8 mL/kg)加用PEEP的MV为观察组,25例常规潮气量(8～12mL/Kg)MV为对照组,比较两组血气、血液动力学指标、脱机时间;结果:观察组SaO2高于对照组(P＜0.05);观察组出现4例VILI,对照组出现9例VILI,减少了VILI的发生(P＜0.05),观察组死亡2例,平均脱机时间7.25天;对照组死亡4例,平均脱机时间10.45天.结论:采用小潮气量加PEEP的MV治疗,配合规范的护理措施,可以有效提高严重胸外伤致ARDS的治疗效果.