| 人HPPCn重组蛋白可溶性表达及其增殖活性检测 |
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| 引用本文： | 路青山,乔媛媛,李金凤,王运良,王姗姗,史成和,杨霄鹏,张达矜.人HPPCn重组蛋白可溶性表达及其增殖活性检测[J].中国生物工程杂志,2015,35(12):15-20. |
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| 作者姓名： | 路青山 乔媛媛 李金凤 王运良 王姗姗 史成和 杨霄鹏 张达矜 |
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| 作者单位： | 1. 郑州大学第二附属医院 郑州 450014;
2. 中国人民解放军海军总医院基础医学研究中心 北京 100048;
3. 中国人民解放军第148医院 淄博 255300 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(81472350,31071256)资助项目 |
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| 摘 要： | HPPCn是一种新的肝细胞刺激因子,获得较高纯度的具有生物活性的HPPCn蛋白对研究其生物学功能具有重要意义。HPPCn在重组质粒PET-24a(+)/HPPCn中,诱导表达产物主要以包涵体形式为主。为优化表达条件,运用冷休克表达载体pColdⅡ和无缝克隆技术获得重组质粒pColdⅡ/HPPCn,分别对诱导温度、时间、分子伴侣等诱导条件进行筛选,镍离子柱亲和层析纯化,Western blot分析目的蛋白特异性,不同浓度人HPPCn重组蛋白(0、10、100ng/ml)刺激SMMC7721细胞,免疫细胞化学方法测定Brdu掺入、PCNA表达变化。目的蛋白在培养温度为16℃,终浓度为0.1mmol/L的IPTG过夜诱导时为可溶性表达,最终得到人重组HPPCn蛋白纯度为94.88%,人HPPCn重组蛋白可刺激SMMC7721细胞Brdu掺入增加、PCNA表达水平上调,其刺激作用具有量效关系。通过冷休克表达系统获得可溶性表达的人重组HPPCn蛋白,其具有促进SMMC7721细胞增殖的生物学功能,为深入研究HPPCn的作用机制提供了技术条件。
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| 关 键 词： | HPPCn 冷休克表达系统 ANP32 可溶性表达 |
| 收稿时间： | 2015-07-21 |
Soluble Expression of Human HPPCn Recombinant Protein and Detection of Its Proliferation Activity |
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| LU Qing-shan,QIAO Yuan-yuan,LI Jin-feng,WANG Yun-liang,WANG Shan-shan,SHI Cheng-he,YANG Xiao-peng,ZHANG Da-jin.Soluble Expression of Human HPPCn Recombinant Protein and Detection of Its Proliferation Activity[J].China Biotechnology,2015,35(12):15-20. |
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| Authors: | LU Qing-shan QIAO Yuan-yuan LI Jin-feng WANG Yun-liang WANG Shan-shan SHI Cheng-he YANG Xiao-peng ZHANG Da-jin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | HPPCn Cold-shock expression system Soluble expression ANP32 |
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