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1.
目的:从天然的大容量噬菌体抗体库中筛选特异的抗结核分枝杆菌晶体蛋白( alpha-crystallin Acr)的人源抗体.方法:以结核分枝杆菌Acr蛋白包被免疫管,通过对噬菌体抗体库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的过程从大容量抗体库中筛选特异性抗结核分枝杆菌Acr蛋白的抗体,并对可变区序列进行了测序分析.将特异性的噬菌体抗体感染HB2151菌,经IPTG诱导表达,制备了抗结核分枝杆菌Acr蛋白的可溶性单链抗体;对其序列和抗原结合活性进行分析鉴定.结果:经过4轮筛选,获得了43个与结核分枝杆菌Acr蛋白结合的阳性克隆,其中29个特异结合的克隆;测序分析有26不同的可变区片段;通过可溶性单链抗体(scFv)表达筛选到14株特异性结合Acr蛋白的可溶性单链抗体克隆;经过基因测序,分析了可变区基因的亚群.成功制备了可溶性单链抗体.Westren blotting分析证实筛选的人源单链抗体能与天然蛋白结合.结论:利用单链大容量抗体库获得抗结核分枝杆菌Acr蛋白的噬菌体抗体并且成功制备抗结核分枝杆菌Acr天然蛋白的可溶性单链抗体,为今后的研究和应用奠定基础.  相似文献   
2.
目的:建立一种PCR方法,以快速校正基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成过程中发生的多位点缺失突变。方法:用PCR方法合成基孔肯雅病毒非结构蛋白基因;对测序的克隆进行序列比对,分析不同克隆上缺失突变发生的位置,以保守区域互相重叠的寡核苷酸为上下游引物、以该区域测序正确的克隆为模板进行PCR扩增,得到所需片段,再将这些片段用PCR方法进一步组装成完整的基因序列并进行测序。结果:测序结果表明,经过2次PCR扩增,校正了基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成过程中发生的5个位点缺失突变。结论:得到序列正确的基孔肯雅病毒非结构蛋白基因。在进行基因合成过程中如发生多位点缺失突变,可利用该方法同时对以上突变进行校正,无须再合成引物,降低了实验操作难度,并提高了实验效率。  相似文献   
3.
目的:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对聚乙二醇(PEG)修饰的水蛭素进行分析分离,用以分析修饰产物中不同修饰度水蛭素的组成和比例。方法:色谱柱为Hypersil C18,5μm,4.6mm×150mm;流动相A为H2O+0.01%的三氟乙酸,流动相B为乙腈+0.01%的三氟乙酸。40min内由10%-50%流动相B进行梯度洗脱,洗脱流速1mL/min,上样量50μL,检测波长为214nm。结果:在单甲基化PEG-丙酸琥珀酰亚胺和水蛭素摩尔比不同的的反应产物中,PEG1-水蛭素、PEG2-水蛭素均可以达到基线分离,且不同批次的反应产物进行RP-HPLC的重复性良好。结论:RP-HPLC可以有效地对PEG修饰的水蛭素产物进行分析分离,为PEG化水蛭素的长效、缓释剂型的开发提供技术支持。  相似文献   
4.
分泌型IgA (SIgA) 在机体的粘膜免疫中具有重要作用,在外分泌道中比单体IgA和IgG抗体具有更好的抗感染活性。为了表达抗禽流感病毒H5N1人-鼠嵌合分泌型IgA抗体,首先以本室先前构建的稳定表达IgA的中国仓鼠卵巢细胞 (CHO) 细胞系为基础,共转染分泌片和J链表达质粒,然后用抗生素Zeocin选择阳性克隆细胞,利用倍比稀释的方法筛选分泌SIgA的单克隆细胞,通过Western blotting分析培养上清中SIgA的表达情况。结果表明,在CHO细胞中成功表达了SIgA抗体,上述研究为研制分泌型  相似文献   
5.
目的:用色谱法纯化制备携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒。方法:采用5L生物反应器悬浮培养HEK-293N3S细胞进行病毒的扩增,冻融法裂解细胞,通过超滤、Source15Q离子交换层析和Sepharose4Fast Flow凝胶过滤层析进行分离纯化,采用分光光度法和高效液相色谱法分析重组腺病毒产品的纯度,采用组织培养半数感染剂量方法测定病毒的感染滴度。结果:通过两步色谱层析得到产品,经分光光度法分析,其D260nm/D280nm比值为1.21,高效液相色谱法分析其纯度达96.5%,产品滴度为1.0×1011U/mL,病毒颗粒数为1.76×1012/mL,比活性为5.68%。结论:确定了稳定可行的重组腺病毒色谱分离工艺,得到的产品在纯度、滴度和比活性等方面均符合国家食品药品监督管理局的标准。  相似文献   
6.
【目的】研究S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMs)对埃博霉素生物合成的影响。【方法】通过向发酵培养基中添加抑制剂和促进剂,比较分析纤维堆囊菌中SAMs的活性变化以及埃博霉素的产量变化。【结果】在埃博霉素的合成期,SAMs的活性较高。加入抑制剂吲哚乙酸(IAA)之后,SAMs的活性和埃博霉素的产量都不同程度的降低,而加入促进剂对甲苯磺酸钠(p-TSA-Na)之后,SAMs的活性和埃博霉素的产量在不同程度上都有提高。在纤维堆囊菌的次级代谢中,SAMs活性与埃博霉素的生物合成量呈正相关。【结论】S-腺苷甲硫氨酸合成酶在纤维堆囊菌的埃博霉素生物合成过程中发挥了重要的作用。  相似文献   
7.
目的:观察对比老年消化道肿瘤患者术后给予肠内营养(EN)、肠外营养(PN)联合应用(EN+PN)和单独采用PN对患者营养和免疫状况的影响。方法:选择我院2010年6月~2014年10月收治的老年消化道肿瘤患者60例,采用随机数字表法将所有患者分为PN组27例和PN+EN组33例。检测并比较两组患者血红蛋白(Hb)、血清白蛋白(Alb)、前白蛋白(Pre Alb)、转铁蛋白(TFN)、T淋巴细胞亚群及体重(BW)指标及术后并发症。结果:术后第8天较术前第七天两组患者血清Alb、Pre Alb、TFN均出现明显上升(P0.05),但两组间比较差异无统计学意义(P0.05),两组患者Hb和BW均略有下降,差异不存在统计学意义(P0.05);术后第8天EN+PN组患者的CD3+、CD4+/CD8+基本恢复到第七天水平,而PN组患者CD3+、CD4+/CD8+均低于第七天水平,差异存在统计学意义(P0.05);术后En+PN组较PN组,肛门排气时间较早、住院时间较短,差异均存在统计学意义(P0.05);两组均未发现严重并发症。结论:PN+EN和PN营养支持均可以改善老年消化道肿瘤患者术后的营养状况,但PN+EN更有利于提高患者免疫力,缩短住院时间。因此,PN+EN具有营养丰富、安全可靠的优点,值得临床推广应用。  相似文献   
8.
目的 了解儿童体内血铅的含量,为儿童铅中毒的防治提供科学依据.方法 采用原子吸收光谱法,对沈阳市妇婴医院2011年8月至2012年10月儿科门诊2 850例0 ~14岁儿童进行铅测定.结果 2 850例儿童中不同年龄组血铅中毒比例分别为2.67%、2.74%、3.12%和3.15%,血铅中毒比例随年龄增长略有增加.但各年龄组间比较差异无统计学意义(x2=-0.15,P>0.05).其中血铅<100 μg/L为2 769例,血铅轻度中毒81例,铅中毒率为2.85%,差异有统计学意义(x2=10.15,P<0.05).结论 血铅含量随着年龄增长在增多,男童铅中毒比例高于女童.建议早发现,早诊断,早治疗,以确保儿童健康成长.  相似文献   
9.
随着HIV感染者及各类医疗措施导致的免疫受损者的增多,探讨一种适合免疫缺陷人群的预防机会感染的策略越来越受到重视。研究表明,CD4^+T细胞是抵抗肺孢子菌等机会感染的最主要因素,但不是唯一的因素。其中CD40配体(CD40L)被认为是一种可以启动B细胞和CD8^+T细胞反应的关键因子。为探讨CD4^+L是否能在缺乏CD4^+T细胞的小鼠体内启动免疫反应,本文研究了用卵白蛋白(OVA)作为模型抗原,联合应用CD40L引起的免疫反应。结果显示,同时应用OVA和CD40L,可使CD4^+T细胞耗竭小鼠体内抗OVA IgG抗体和抗原特异性IFN明显增多,提示在CD4^+T细胞缺乏的宿主体内,CIMOL可以启动B细胞和CD8^+T细胞类免疫反应。该结果为抗肺孢子菌等机会性感染的免疫预防研究提供可贵的资料。  相似文献   
10.
本文对中药质量控制中的联用技术,如气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)、液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)、高效液相色谱-质谱联用技术(PHLC-MS),色谱与紫外、红外光谱、核磁共振等的联用技术;毛细管电泳-质谱联用技术(CE-MS)等进行了分析阐述。  相似文献   
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