人热休克蛋白90AB1基因克隆、原核表达、中试发酵及纯化

通过克隆人热休克蛋白90AB1基因(Hsp90AB1),构建其原核表达载体pET28a(+ )-hHsp90AB1,表达纯化获得目的蛋白,为hHsp90靶向药物筛选奠定基础.提取宫颈癌HeLa细胞总RNA,并经RT-PCR获得hHsp90AB1-cDNA.以hH-sp90AB1-cDNA为模板进行PCR体外扩增,胶回收纯化hHsp90ABl.将hHsp90AB1及pET-28a(+)质粒经Nde I和Sal I双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,使其定向重组,再将重组DNA转化DH5α,经复苏后,在含卡那霉素的LB固体养基上筛选出阳性克隆.挑取LB固体培养基上的单菌落经酶切及测序鉴定,证实为阳性克隆,即pET28a-hHsp90AB1体外重组成功,命名为pET28a(+ )-hHsp90AB1.重组质粒转化Rosetta( DE3)菌株,IPTG诱导表达,并对表达条件优化,以及通过SDSA-PAGE和Western blotting分析均表明Hsp90AB1蛋白得到了正确的表达,且表达产物以可溶性形式存在,优化条件下蛋白表达量约占菌体总蛋白13％.接种到18 L发酵罐中试发酵,表达产物经Ni-NTA凝胶素和层析,蛋白纯度达到98％.     

我们是怎样结合生物学教学开展科学研究小组活动的

毛主席指出:学生們的書本知識……也是他們前人总结生产斗争和阶级斗争的经验写成的理論,不是他自己亲身得来的知識。他們接受这种知識是完全必要的,但是必須知道,就一定的情况來說,这种知識对于他們还是片面的,这种知識是人家証明了,而在他则还沒有証明的。最重要的,是善于將这些知識应用到生活和实际中去。我組在學校党政的领导教育和鼓励与支持下,在     

课堂教学生动有趣试探

怎样使课堂教学生动有趣,是一个值得研究的重要教学课题,本文就这个问题作一探索.一、正确使用成语、口诀、谚语、俗语在课堂教学过程中,适当地使用一些成语、口诀、顺口溜等,对活跃课堂气氛是很必要的.例如在讲述遗传和变异时,可用"种瓜得瓜,种豆得豆"的俗语.在讲述生态系统食物链这个概念时,可用"螳螂捕蝉,黄雀在后"、"大鱼吃小鱼,小鱼吃虾米,虾米吃淤泥     

埃及血吸虫毛蚴表皮板的观察

埃及血吸虫毛蚴表皮板共有4排,各排数目为6:9:4:3。除第1排之外,其他各排的表皮板均由无纤毛的嵴所分隔,在第1与第2排之间的环嵴中,除第1排各板底边中央小凹处各有1感受器外,尚可见4对感受器。第2与第3排的环嵴内可见16—20个感受器。此外,于体之两侧第3排表皮板间各见1个排泄孔。顶突似六边形,于其两侧各有1个侧腺开口,其内侧可见14个感受器。本文在讨论中与前人对本虫毛蚴表皮板的描述做了简单比较。     

假单胞菌L-半胱氨酸合成酶的纯化和性质研究

假单胞菌TS-1138的细胞浆液通过硫铵沉淀、SephadexG-75凝胶过滤、DEAE-Cellulose52离子交换、SephadexG 100凝胶过滤等分离纯化手段分别将从L-ATC合成L 半胱氨酸的两个酶——L-ATC水解酶和L-SCC水解酶纯化了 83.9和 90.3倍。SDS-PAGE鉴定均为单一条带 ,两种酶的相对分子质量分别为 37.5和 42.8kD ;酶反应的最适温度均为 35℃ ,最适pH分别为 7.0和 8.0 ;酶的米氏常数分别为 0.67mmol L和 0.15mmol L ,     

五味子科的系统发育:核糖体DNA ITS区序列证据

The Schisandraceae is one of the most important taxa for understanding the origin and evolution of primitive angiosperms due to its basal position in the recent cladograms of the angiosperm based both on several gene sequences and on morphological characters, but phylogenetic relationships within the family are still unresolved. The sequences of nrDNA ITS region of 15 species representing four sections of Schisandra Michx., two sections of Kadsura Kaempf. ex Juss. and one outgroup, Illicium fargesii Finet et Gagnep., were used to reconstruct the phylogeny of Schisandraceae. Fourteen most parsimonious trees (Length=259, CI=0.934 and RI=0.889) were obtained from the analysis with I．fargesii as the outgroup. In the consensus tree, the genus Schisandra was found to be divided into three clades. Sect. Pleiostema formed a clade together with sect. Maximowiczia, sect. Sphaerostema was weakly supported to be the sister group of a clade comprising S. bicolor var. tuberculata and Kadsura species. In particular, S. bicolor var. tuberculata, a species of sect. Schisandra, was nested within Kadsura. It seems from this result and the morphological characters that Schisandra might not be a monophyletic group. According to the present molecular phylogeny, both elongated hypocarpium and deciduous habit originated independently at least twice in the Schisandraceae, and therefore, the value of the present morphological characters used in the classification of the family Schisandraceae should be reevaluated.     

线粒体拟核结构及相关疾病研究进展

线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)与一系列蛋白质相互作用形成核蛋白复合体,并包装折叠成类似原核生物拟核的结构,称为线粒体拟核(mitochondrial nucleoid)。参与线粒体拟核组成的相关蛋白包括线粒体转录因子、线粒体单链DNA结合蛋白以及多种参与线粒体中代谢途径的多功能蛋白。线粒体拟核结构的阐明对于进一步研究线粒体形态与功能以及mtDNA的遗传模式、基因表达调控具有重要意义。本文综述了线粒体拟核结构的最新研究进展,着重介绍组成拟核结构的重要蛋白,以及这些蛋白如何将mtDNA与柠檬酸循环等线粒体重要代谢途径相联系。同时,拟核相关蛋白(nucleoid-associated protein)的异常涉及多种人类疾病,这为研究线粒体相关疾病提供了新的思路。     

人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化

应用RT-PCR技术,从人白血病多药耐药细胞株K562/ADR中扩增出肿瘤坏死因子受体相关蛋白l(tumor necrosis factor receptor-associated protein1,TRAP1)基因的cDNA.选择Nde I和Xho I分别作为上下游引物的酶切位点,将TRAP1基因克隆到带有6×His标签的pET-28a(+)的载体上.重组质粒转化大肠杆菌DH5α中,涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上,经双酶切鉴定后的阳性克隆送去测序.测序成功的重组质粒pET28a(+)-TRAP1转化大肠杆茵BL21 (DE3)中,在IPTG的诱导下,成功表达重组蛋白TRAP1.通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间,找出最佳表达条件,使重组蛋白TRAP1表达量最高.结果表明,在39℃条件下,0D600达到0.8时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导6h,目的蛋白的表达量最高.该研究为纯化出TRAP1蛋白,进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础.     

基于土壤异质背景的玉米秸秆覆盖度遥感反演

玉米秸秆覆盖还田是东北平原当前大力推广的一种保护性耕作方式。区域作物秸秆覆盖度(CRC)的遥感估算可大范围快速获取耕地秸秆覆盖还田信息,对于政府监测和推广秸秆覆盖还田工作有重要作用。本研究以吉林省梨树县为研究区,基于Sentinel-2A卫星影像,选取归一化耕作指数(NDTI)、归一化秸秆指数(NDRI)、简单耕作指数(STI)和归一化差值指数(NDI7)4种光谱指数,建立光谱指数与玉米秸秆覆盖度的线性回归模型,进行秸秆覆盖度反演。结果表明: 研究区土壤背景空间异质性较强,对光谱指数回归模型影响显著,采用土壤质地分类(分区)分别建立回归模型的方法可提高反演精度。土壤背景空间异质性会增大模型估算误差;4种光谱指数与玉米秸秆覆盖度均有较强相关性,其中,NDTI和STI模型表现更好;基于NDTI和STI的分区线性回归模型验证R²为0.84、RMSE为13.3%,优于不分区的模型(R²为0.75,RMSE为16.5%),有效提升了反演精度。     

走出歌德的阴影: 迈向更加科学的植物系统学

传统的植物学理论中, 被子植物雌蕊的基本单位心皮被认为是变态的叶(即大孢子叶)通过纵向对折和内卷演化而来。该理论造成了被子植物和裸子植物之间不可逾越的鸿沟。近年来提出的一统理论认为被子植物的心皮由长胚珠的枝和包裹这个枝的叶共同组成, 从而弥合了被子植物与裸子植物之间的鸿沟。最近, 当代植物学界两大权威人物Peter R. Crane和Peter K. Endress分别撰文, 发表了不同于传统理论的观点。Endress认为, 心皮由胚珠和叶性器官组成; 而Crane认为, 所有的胚珠都长在枝上。结合二者的结论, 不难得出“心皮实际上等同于一个长胚珠的枝加上一个叶”的论断。这在某种意义上等于认同了一统理论的观点。两位权威人物观点的转变预示着植物学理论将很快发生根本性的转变。该文向国内植物学同行通报这一最新动态, 以期让我国学者能够了解最新理论。