| 人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化 |
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| 引用本文： | 张嘉萱,卢嘉欣,王蕊,赵振岭,韩波,彭鑫磊,陈伟,刘忠,任哲,王绍祥.人TRAP1基因的克隆、原核表达及表达条件优化[J].生物技术通报,2011,0(8). |
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| 作者姓名： | 张嘉萱 卢嘉欣 王蕊 赵振岭 韩波 彭鑫磊 陈伟 刘忠 任哲 王绍祥 |
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| 作者单位： | 暨南大学生物医药研究开发基地,广州,510632 |
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| 基金项目： | 国家十一五“863”课题 |
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| 摘 要： | 应用RT-PCR技术,从人白血病多药耐药细胞株K562/ADR中扩增出肿瘤坏死因子受体相关蛋白l(tumor necrosis factor receptor-associated protein1,TRAP1)基因的cDNA.选择Nde I和Xho I分别作为上下游引物的酶切位点,将TRAP1基因克隆到带有6×His标签的pET-28a(+)的载体上.重组质粒转化大肠杆菌DH5α中,涂布于含卡那霉素的LB琼脂培养基上,经双酶切鉴定后的阳性克隆送去测序.测序成功的重组质粒pET28a(+)-TRAP1转化大肠杆茵BL21 (DE3)中,在IPTG的诱导下,成功表达重组蛋白TRAP1.通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间,找出最佳表达条件,使重组蛋白TRAP1表达量最高.结果表明,在39℃条件下,0D600达到0.8时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导6h,目的蛋白的表达量最高.该研究为纯化出TRAP1蛋白,进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | TRAP1 Hsp75 克隆 原核表达 优化 pET-28a(+) BL21 |
Cloning and Expression of Human TRAP1 Gene and Optimization of Expression Conditions |
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