乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠模型的建立及其应用研究进展

主要介绍了乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠模型的建立,及其在HBx的反式激活作用和肝细胞癌等方面的研究进展。     

小鼠胚胎神经干细胞的分离培养及其鉴定

且的探索小鼠胚胎神经干细胞的体外培养方法,并获取高纯度的神经干细胞,为神经干细胞的深入研究提供实验材料。方法无菌条件下分离E15天小鼠胚脑皮质,制成单细胞悬液,在bFGF和B27存在的培养基中培养扩增,通过免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞及其子代细胞的分化方向。结果培养的部分细胞在B27和bFGF存在的无血清培养基中可以在体外分裂增殖,同时表达神经干细胞特异性抗原nestin,并在撤出B27和bFGF的有血清培养基中向神经细胞和胶质细胞分化。结论小鼠胚脑皮质存在具有多向分化潜能的神经干细胞,这些细胞可以在体外稳定培养、传代并自然分化,为细胞替代治疗提供了理想的细胞来源。     

小鼠锌指蛋白基因ZF-12基因剔除的ES细胞系的建立

利用小鼠锌指蛋白ZF－12基因组DNA片段,构建了针对小鼠ZF－12基因座的替换型打靶载体pSSC-TV-10.5。经限制性核酸内切酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后,通过电穿孔将线性化打靶载体导入ES人,经G418／GANC双药筛选和分子鉴定,获得4个ZF－12^ /-基因的ES细胞杂合子克隆,其生长状态良好,为进一步建立ZF－12基因剔除的小鼠动物模型创造了条件。     

棉花洞A雄性不育系花药发育的mRNA差别显示

应用cDNA-AFLP(Amplified fragment length polymorphism）技术,分析了棉花洞A雄性不育和可育材料在花药发育过程中花粉发育相关基因表达的差异。结果表明：在花药发育的相同时期,不育和可育花粉cDNA-AFLP的谱带在单核期的差异大于减数分裂期。在花粉发育过程中,花粉发育相关基因的表达具有时空特异性。共回收了64条差异cDNA片段,随机选择3个片段标记为探针,RNA斑点杂交分析表明,GHA27具有花器官组织特异性,仅在花器官中表达;GHA28、GHA47则具有花药组织特异性且仅在可育花药中表达。序列相关性比较表明：GHA27与植物ADP-ribosylation factor(ARF）基因有较高的相似性,而GHA28、GHA47与已知序列的相似性很低。     

昆明山海棠诱发小鼠精子8号染色体、不分离的研究

应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测了昆明山海棠 (THH)水抽提物在小鼠生殖细胞形成过程中对 8号染色体不分离的诱发效应。以THH水抽提物 (12 0mg/kg、2 4 0mg/kg、4 80mg/kg)腹腔注射昆明种雄性小白鼠 ,于处理 2 2天后取小鼠附睾精子涂片 ,以生物素标记的 8号染色体着丝粒重复序列探针进行FISH ,结果发现 ,THH在中间剂量组(2 4 0mg/kg)和高剂量组 (480mg/kg)诱发精子 8号染色体非整倍体频率均显著高于溶剂对照 (P <0 .0 0 1) ,低剂量组(12 0mg/kg)的异常精子频率与溶剂对照无显著差异 (P >0 .0 5 )。研究表明 ,THH在雄性小鼠生殖细胞发育过程中具有染色体不分离诱发效应。     

基于凝血因子IX基因剔除小鼠建立血友病乙转基因动物模型

为在凝血基因IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体原转基因小鼠家系,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术,构建含有特定点突变的人凝因IX基因表达载体,该载体包括由人凝血因子IX编码区及第一内含子构成的人凝血因子IX基因（hFIXml）、4个拷贝的MCK增强子（MCKe）、鸡β－肌动蛋白启动子（bA）及PolyA,命名为pMe4bAIXml质粒。将其线性化后,用显微注射法注射入817只凝血因子IX基因剔除小鼠受精卵雄原核,再将它们分别回输45只假孕受体母鼠的输卵管中,共产仔69只,存活63只。采用PCR与基因组Southern杂交筛选法鉴定小鼠,证实6只小鼠基因组中整合有含特定点突变的pMe4bAIXml质粒,并对1只小鼠的PCR产物进行测序,证实转基因结构特征符合设计要求。     

未经休眠处理的体细胞用于异种核移植

自“多莉”诞生以来,在全世界掀起了一场体细胞克隆的浪潮,许多体细胞克隆动物,如小鼠、山羊、牛、猪等纷纷问世。围绕体细胞克隆的供体细胞周期问题,学术界存在两种不同的观点,一是Wilmut等认为体细胞必须经过休眠处理,使细胞停滞在G0/G1期,或者采用以G0/G1期为主的活体细胞作为供体,这是克隆成功的关键,这一方面的报道已有很多。第二是Cibelli等认为不必对细胞作     

小鼠惊厥时孕烯醇酮及其硫酸盐对GABAA受体的调制作用

在建立稳定的红藻氨酸(KA)诱发小鼠惊厥模型的基础上,用放射配体受体结合分析法,研究孕烯醇酮(Pe)及其拮抗剂孕烯醇酮硫酸盐(Pes)对小鼠下丘脑、大脑皮层、海马和小脑四个脑区γ-氨基丁酸A(GABAA)受体的调制作用.结果显示,Pe能增加某些脑区3H-GABA与GABAA受体的结合量,下丘脑、海马和小脑差异显著(P＜0.05或P＜0.001),而大脑皮层差异不显著(P＞0.05).Pe对GABAA受体的调制作用能被印防己毒素(Pic)阻断,对KA的致惊效应具有抑制作用.Pes 能显著降低各脑区GABAA受体的结合量(P＜0.01或P＜0.001),对惊厥有促进作用.实验结果提示:孕烯醇酮具有明显的镇静和抗惊厥效应,并且可能是通过GABAA受体介导的.