酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B相互作用的蛋白质

应用酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B（hPRB）发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用的调控机制。应用酵母双杂交系统3,以hPRB不同结构域为诱饵,筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,并运用X—α—Gal等实验提供的信息,筛除假阳性克隆。最终以AF1-DBD结构域作为诱饵最终筛出了1个阳性克隆,经测序及生物信息学分析,这个克隆所编码的蛋白为PIAS3（活化的STAT3的蛋白抑制剂）。结果表明,孕激素受体可以和PIAS3发生相互作用,它们的相互作用有可能参与乳腺癌的生长调控。     

microRNA的研究进展

在多细胞生物的基因组中都存在一类非编码RNA基因,能够产生长度约为22个核苷酸的小分子RNA,称为microRNA（miRNA）,具有调节其他基因表达活性的功能。miRNA的发现,为我们理解复杂的基因调节网络开辟了新的空间。本文概述了miRNA的产生过程、转录抑制机理、研究并预测miRNA的方法等。     

从米糠中提取降血管紧张素转换酶抑制剂

采用盐析法提取米糠蛋白,分别选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单独或联合水解米糠蛋白,以从酶解米糠蛋白中分离获得具有血管紧张素转换酶（ACE）抑制活性的短肽组分。经Sephadex G-15凝胶层析和SP—Sephadex C-25离子交换层析分离各酶解组分,并检测各组分的ACE抑制活性。结果表明,米糠蛋白的酶解分离产物中含有较强ACE抑制活性的组分,其中经胃蛋白酶和胰蛋白酶共同水解时得到的小分子量寡肽组分的抑制活性最强,为后续对其进行结构分析奠定了基础。     

流感病毒神经氨酸酶抑制剂的筛选

以神经氨酸酶为药物靶点筛选神经氨酸酶抑制剂, 是研究和开发抗流感病毒药物的重要途径. 应用虚拟药物筛选方法, 从化合物数据库中选出部分待测化合物, 然后应用已建立的 神经氨酸酶抑制剂的高通量筛选模型, 检测了这些化合物的抑制活性, 从中发现了3个活性较高、结构新颖的化合物, 其IC50在0.1~3 μmol/L之间, 这些活性化合物的结构特点, 对于新型神经氨酸酶抑制剂的设计与开发, 将提供重要的信息指导. 流感病毒神经氨酸酶抑制剂的筛选结果表明, 虚拟筛选技术与高通量筛选技术的合理结合, 将有利于促进药物筛选与药物发现.     

抗癌药物--喜树碱类衍生物研究进展

喜树碱类衍生物是一类新型选择性拓扑异构酶I抑制剂。本文探讨了喜树碱类衍生的的抗癌作用机制,并对喜树碱类药物的研究开发进展作了评述。     

dUTP焦磷酸酶研究进展

dUTPase通过催化水解dUTP,降低尿嘧啶在DNA中的错误掺入,调节dUTP／dTTP的正常比例,保证了DNA复制的正确性和顺利进行。绝大多数dUTPase结构相似,活性中心由不同的亚基共同参与。dUTPase的活性已确定存在于真核及原核的多种组织中,其在细胞内的表达依赖细胞周期或细胞发育的调控。许多病毒也编码dUTPase,且与病毒的感染力有关。研究显示该酶的表达对由胸苷酸合成酶（TS）抑制剂产生的细胞毒性具有关键的拮抗作用,为dUTPase拮抗剂在癌症化疗和逆转录病毒治疗中的开发应用奠定了理论基础。     

豇豆胰蛋白酶抑制剂基因的克隆

利用RT-PCR的方法,从豇豆种子,子叶及成熟叶片中分别提取RNA,反转录后以该基因两端的保守序列为引物进行PCR扩增,PCR产物与pUCm-T载体连接进行克隆,蓝白筛选重组子,经测序,其核苷酸同源性高达100%,蛋白质同源性达91%。本试验同时对该基因的表达时期差异进行了大致检测。结果是种子的表达量最高,子叶其次,成熟叶中最低。     

人canstatin基因的克隆

为深化研究血管生成抑制剂canstatin的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性,针对canstatin cDNA序列设计引物,运用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）从人胚肝组织中钓取canstatin cDNA,将其克隆入pMND18-T载体中,通过酶切鉴定出重组体并测序分析,结果表明,获得684bp人canstatin基因,成功构建人canstatin cDNA 克隆载体pMB18-T/canstatin,为进一步进行canstatin蛋白表达及活性研究奠定了基础。     

粒酶B与细胞凋亡

粒酶B（GrB)是杀伤性T淋巴细胞（CTL）和自然杀伤细胞（NK）颗粒（granule)中最重要的丝氨酸蛋白酶,通过caspases依赖途径。直接入核途径及不依赖caspases的胞浆途径。启动CTL介导的靶细胞凋亡。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂mRNA在正常及异位子宫内膜中的表达

目的：观察正常及异位子宫内膜中基质金属蛋白酶－1,－2（MMP－1,－2）和基质金属蛋白酶组织抑制剂－1（TIMP－1）基因表达的变化,以探讨其与子宫内膜异位症的关系。方法：应用原位技术,采用地高辛生物素标记的cDNA探针（MMP－1,MMP－2,TIMP－1）对子宫内膜异位症患者（EM组）的子宫内膜（14例）、异位病灶组织（20例）及非子宫内膜异位症患者（对照组）的子宫内膜（12例）,分3批进行分子杂交检测,结果：3批结果相似。MMP－1,－2,TIMP－1mRNA在腺上皮细胞和间质细胞均有表达,EM组的子宫内膜MMP－1,－2及TIMP－1mRNA表达量与对照组无显著性差异（P＞0．05）,异位病灶组织的MMP－1,－2mRNA表达量明显高于对照组（P＜0．05）,而TIMP－1mRNA表达量则低于对照组（P＜0．05）。结论：子宫内膜异位症患者的异位病灶中,存在MMP－1,－2和TIMP－1明显的平衡失调,这可能与子宫内膜异位症的发生、发展和不孕有关。