酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B相互作用的蛋白质

应用酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B（hPRB）发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用的调控机制。应用酵母双杂交系统3,以hPRB不同结构域为诱饵,筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,并运用X—α—Gal等实验提供的信息,筛除假阳性克隆。最终以AF1-DBD结构域作为诱饵最终筛出了1个阳性克隆,经测序及生物信息学分析,这个克隆所编码的蛋白为PIAS3（活化的STAT3的蛋白抑制剂）。结果表明,孕激素受体可以和PIAS3发生相互作用,它们的相互作用有可能参与乳腺癌的生长调控。     

人外周血单核细胞的分离和电穿孔法转染

目的:建立分离纯化人外周血单核细胞及转染的有效方法。方法:应用基于HISTOPAQUE的密度梯度离心及抗体标记纯化的方法分离单核细胞,并以电穿孔技术转染绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)小干扰RNA。结果:基于外周血单核细胞的表面标志分子CD14的流式细胞分析表明得到了高纯度(89.95%)的外周血单核细胞;GFP荧光照片显示GFP表达质粒的转染效率为60%～70%;免疫印迹显示TRAF6的表达抑制(90%)下调了脂多糖(LPS)对JNK的激活,说明通过电穿孔技术有效递送了TRAF6小干扰RNA,表明单核细胞若缺少TRAF6将抑制LPS-TLR4信号通路的激活。结论:建立了一种高效的从人外周血中分离原代单核细胞的方法,且应用基于NucleoFectorⅡ的电穿孔技术实现了对此原代单核细胞的高效转染,为进一步外周血单核细胞的相关功能研究奠定了方法学基础。     

EWS蛋白质抑制核因子κB的转录活性

目的:研究EWS蛋白质是否参与核因子κB(NF-κB)信号通路,以及EWS蛋白质对NF-κB转录活性的影响。方法:在真核细胞中表达Flag-EWS,利用Western印迹检测其表达;通过双萤光素酶光报告系统,研究EWS蛋白质对NF-κB转录活性的影响及其发挥作用的分子水平。结果:Western印迹检测到相对分子质量为95×103的Flag-EWS能够在真核细胞中正确表达,过表达EWS蛋白质能够抑制TNFα、IL-1β及poly(I:C)激活的NF-κB转录活性;EWS蛋白质能够抑制由过表达HA-TRAF2或HA-p65激活的NF-κB转录活性,其抑制NF-κB转录活性发生在p65转录因子水平。结论:过表达EWS能够抑制多种刺激激活的NF-κB转录活性,这种抑制作用发生在p65转录因子水平。     

小毛莨居群分化研究（Ⅱ）——居群遗传变异的等位酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测小毛莨的3个地点共6个居群的遗传变异。对4个酶系统7个酶位点的基因型频率的聚类分析。结果表明,小毛莨居群遗传分化主要与居群所在生境因素相关,与地理位置之间仅有不显著的相关性,等位酶分析与形态变异研究的结果基本吻合。     

军事医学科学院肿瘤研究进展

本文从肝癌易感基因发现、炎症与肿瘤发生及其调控、p53与细胞凋亡调控、肿瘤标志物和治疗靶标发现等方面,综述军事医学科学院近年来关于肿瘤研究的进展.     

小毛茛居群分化研究(Ⅱ)——居群遗传变异的等位酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测小毛茛的 3个地点共 6个居群的遗传变异。对 4个酶系统 7个酶位点的基因型频率的聚类分析 ,结果表明 :小毛茛居群遗传分化主要与居群所在生境因素相关 ,与地理位置之间仅有不显著的相关性。等位酶分析与形态变异研究的结果基本吻合     

微齿眼子菜繁殖生物学特性的初步研究

微齿眼子菜以风媒传粉为主,具有明显的雌蕊先熟性,显示出明显的异交特性;同时其雌雄可育期部分重叠,被片、花药和柱头三者的空间布局使其极利于自花受粉,暗示了自交存在的可能性.花粉保持萌发活力的时间短(约20h)及萌发率低(＜10%)可能是导致其自然结实率(20.16%)低的主要原因.自交作为衍生性状在其有性生殖中占有相当的比例,繁育系统属于兼性的交配类型,并有向自交演化的趋势.有性生殖分配与其营养体生物量呈显著正相关,异质性程度不同的生境中,微齿眼子菜表现出不同的繁殖对策,在稳定生境中以克隆生长为主,在变动生境中有性生殖率则有所增加,存在着有性生殖与无性繁殖之间的平衡.     

纳升电喷雾串联质谱技术对阻断泛素通路诱导凋亡相关蛋白质的鉴定

应用毛细管液相色谱 电喷雾 四极杆 飞行时间串联质谱和纳升电喷雾 四极杆 飞行时间串联质谱技术 ,对阻断白血病细胞泛素通路诱发的凋亡相关蛋白质进行了鉴定。通过双向电泳发现 ,蛋白质斑点H在阻断Mo7e白血病细胞泛素通路 2h之后 ,表达量明显增加 ,6h达到最高。该斑点经MALDI TOF MS肽质量指纹谱分析未获结果 ,但通过上述 2种串联质谱技术获得其胰蛋白酶水解肽段的串联质谱图和肽段的全长序列 ,经检索均确认为RhoGDIβ蛋白。进一步发现阻断泛素通路还诱发了另 2个斑点出现 ,位于H点附近 ,经鉴定为同一蛋白质 ,可能是不同翻译后修饰所造成