HCV丝氨酸蛋白酶小分子底物构建及GST融合表达

丝氨酸蛋白酶是丙型肝炎病毒重要的功能蛋白和药物作用靶点,其通过分子内（cis）和分子间（trans）方式催化水解前体蛋白,释放病毒功能蛋白。目的：为深入研究病毒蛋白酶活性和抑制剂鉴定需要,实验研究参照丙型肝炎病毒1a亚型菌株蛋白酶天然底物的氨基酸序列特点,设计了一段包含两个天然底物酶切位点的小分子多肽2S,并进行了原核表达。方法：利用PCR方法,合成2S小分子多肽基因,目的基因两端引入BamH I和EcoR I两个限制性酶切位点,双酶切后将基因与表达载体pGEX-4T-2重组,转化大肠杆菌DH5α,经化学诱导进行GST融合蛋白表达,通过亲和层析柱纯化目的蛋白。纯化的GST 2S融合蛋白在体外反应系统进行酶切鉴定,SDS-PAGE和ELISA鉴定酶切结果。结果：PCR合成的小分子底物多肽2S基因,经与表达载体重组后测序,证实基因序列正确。采用0.5mmol/L浓度的IPTG诱导工程菌过夜,获得表达的目的蛋白,经分离纯化得到融合蛋白GST-2S。GST-2S在体外磷酸盐缓冲系统中与丝氨酸蛋白酶反应,15%SDS-PAGE鉴定酶切产物,证实融合蛋白底物条带明显消失,ELISA结果同样说明融合蛋白的底物活性。结论：含有两个天然底物酶切位点的小分子多肽可以替代病毒天然底物,实验结果为丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶活性研究和酶抑制剂研究奠定了方法学基础。     

四川大熊猫繁育基地基本建成大熊猫细胞库

德国汉堡大学实验微生物学和免疫学学院目前开发出一种新抑制剂,它通过干扰和破坏人体内一种对艾滋病病毒复制有重要影响的酶,间接抑制病毒在体内扩散。目前用于治疗艾滋病的抑制剂大多数是破坏病毒本身产生的酶,这项研究开发出的新抑制剂可以阻碍人体内自然存在的一种酶发挥作用,而这种酶对艾滋病病毒复制很重要。试验发现,     

低心血管疾病风险选择性环氧合酶-2抑制剂的虚拟筛选

摘要 目的：寻找具有血栓素A2受体（Thromboxane A2 receptor,TP）抑制作用的选择性环氧合酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂,以期降低其心血管疾病风险。方法：本研究从公开数据库中获取了512种TP抑制剂,通过分子对接、分子动力学模拟和ADMET预测,筛选出化合物TP84。结果：分子对接结果显示,与先前获批的选择性COX-2抑制剂罗非昔布相比,TP84对COX-2的亲和力更高,对环氧合酶-1（Cyclooxygenase-1,COX-1）的亲和力更低;分子动力学模拟进一步表明,模拟过程中TP84与COX-1的结合不稳定,而TP84能稳定结合COX-2,与COX-2的结合自由能是COX-1的3倍;此外,根据ADMET预测,TP84的药物化学、吸收、分布、代谢、排泄和毒性处于类药物候选物的可接受范围内。结论：TP84是一种潜在的低心血管疾病风险选择性COX-2抑制剂。     

华北平原冬小麦农田蒸散量

以华北平原冬小麦农田为研究对象,采用涡度相关技术和热红外遥感技术,研究了不同环境条件下土壤含水量与农田蒸散量及作物冠层温度的关系.结果表明,冬小麦在农田郁闭(LAI≥3)、晴天和土壤相对含水量低于田间持水量65%的情况下,蒸发比值日变化正午前后出现相对较低且平稳的变化趋势.在晴天情况下,农田潜热通量与作物冠层温度日变化和季节变化均呈极显著的非线性相关关系,而冠气温差、农田相对蒸散量则与0～100 cm土层的土壤相对含水量密切相关.以13:30～14:00的平均冠层温度值T_c、日最高气温T_{a max}和日净辐射总量Rn_d为统计数据,确立了冬小麦农田日蒸散量ET_d （mm）估算简化模式参数.     

刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和填料的制备及纯化瑞替普酶

刺桐属胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,能特异性的抑制胰蛋白酶、组织纤溶酶原激活剂(tPA)、瑞替普酶(rPA)等丝氨酸蛋白酶。实验利用ETI工程菌,经诱导表达、体外复性及纯化获得ETI蛋白,并将该蛋白键合到CNBr活化的琼脂糖凝胶,制备ETI亲和填料,纯化瑞替普酶 。     

枇杷种质资源的离体保存研究Ⅱ生长抑制剂的影响

在枇杷种质资源离体保存中,加入植物生长抑制剂可以延缓枇杷试管苗的生长速度,延长保存时间。实验结果表明,有利于枇杷种质保存的3种生长抑制剂浓度分别是:多效唑(PP₃₃₃)2~5mg/L、矮壮素(CCC)25mg/L、脱落酸(ABA)10mg/L;其中浓度为5mg/L的多效唑效果最为理想。高浓度的甘露醇(>5g/L)对试管苗会造成毒害,不利于枇杷种质的保存;5g/L甘露醇保存效果较好     

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂的酵母表达及其对B16细胞体外侵袭的抑制作用*

目的：建立毕赤酵母表达质粒pPICZαA-cystatin,转化酵母细胞生产重组蛋白,探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂（sv-cystatin）对肿瘤侵袭的生物学作用。方法：利用PCR扩增技术从pUC18/sv-cystatin质粒中扩增sv-cystatin cDNA并克隆至酵母表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-cystatin电激转化Pichia pastori酵母细胞GS115,经1%甲醇诱导获得稳定表达的重组蛋白,改良Boyden小室分析重组sv-cystatin蛋白处理对B16F1细胞体外侵袭力的影响。结果：SDS-PAGE检测和Western blot分析显示分泌表达的sv-cystatin重组蛋白相对分子量约为14 kD,摇瓶发酵每升发酵培养上清可获得16 mg的重组蛋白,经亲和层析纯化获得的sv-cystatin重组蛋白具有抑制木瓜蛋白酶的活性。改良Boyden小室实验结果显示：经0.5mg/ml浓度的重组蛋白处理的B16F1细胞穿过Matrigel的细胞数明显低于对照组(52.60±4.58,106±5.9,P<0.01) ,抑制率为50%。结论：成功实现sv-cystatin的酵母表达,初步证明sv-cystatin重组蛋白可抑制小鼠B16F1细胞体外侵袭作用。     

羧基化介孔二氧化硅纳米颗粒递送PD-L1抑制剂治疗膀胱癌的作用研究

摘要 目的：构建羧基化介孔二氧化硅纳米颗粒（COOH-MSN）递送PD-L1抑制剂治疗膀胱癌。方法：构建负载PD-L1抑制剂的COOH-MSNs，透射电镜检测纳米颗粒的特征，zeta电位分析仪检测纳米颗粒的电位变化；流式细胞术检测血液中T细胞和CD8⁺T细胞的比例；MTT实验检测细胞增殖；构建小鼠荷瘤模型，HE染色检测基本的病理学变化，免疫组化检测ki-67的表达。结果：透射电镜结果显示纳米颗粒呈圆形，直径约为100 nm；COOH-MSNs表面带负电荷，BSA呈强负电性，BSA包封后纳米材料整体负电荷增强；纳米材料可显著提高T细胞和CD8⁺T细胞的比例，并进一步抑制膀胱癌细胞的增殖；动物实验结果显示纳米材料可抑制移植瘤的生长，且移植瘤内淋巴细胞的数量显著升高；免疫组化结果显示相对于PD-L1抑制剂组，纳米材料组ki-67增殖指数显著减低；HE染色结果显示PD-L1抑制剂组肾组织内可观察到血管充血、扩张和较多炎细胞浸润，而纳米材料组肾组织损伤程度显著降低。结论：我们构建了一种负载有PD-L1抑制剂的COOH-MSNs，可有效激活抗肿瘤免疫反应，并降低对正常器官的损伤。     

前途无量

当生物科学进入后基因组时代,在始于靶标鉴别和验证的药物设计过程中,人类DNA测序数据的合理使用便占据前所未有的重要地位。十多年来,制药工业已经设计了不计其数的小分子、肽和抗体,用于抑制临床相关的人类蛋白质靶,其中,多数是在前基因组时代鉴别和验证的。然而,出干各种原因,许多临床相关的人类蛋白质是完全不可药化的。     

《神经病学》：三环类药能更好治疗帕金森抑郁

美国新泽西医学和牙医大学的门扎（Menza）等研究发现,三环类药物治疗帕金森病（PD）伴发抑郁的疗效可能优于选择性5-羟色胺再摄取抑制剂（SSRI）类药物。相关论文2008年12月17日在线发表于《神经病学》（Neurology）。