穿膜肽介导的新型基因转运载体的功能研究

目的：借助穿膜肽TAT高效跨膜的特性和LacI前头肽突变体（LacI HPM）高亲和力结合DNA的特性,建立-种安全高效、无基因插入片段大小限制的基因转导系统。方法：在TAT-LacI HPM片段C端和N端分别添加GST标签,构建pET-28a（＋）-TAT-LacI HPM-GST和pGEX-GST-TAT-LacI HPM重组表达载体,可溶性表达TAT-LacI HPM-GST及GST-TAT-LacI HPM融合蛋白并纯化,获得TAT-LacI HPM二聚体,免疫荧光检测TAT-LacI HPM融合蛋白穿过HeLa细胞膜的情况,观察EGFP的表达,用免疫印迹检测TAT-LacI HPM融合蛋白介导质粒DNA进入细胞的能力。结果：表达、纯化并获得二聚体融合蛋白,体内实验表明其具有跨膜能力,能介导带有LacI结合序列的DNA质粒进入细胞,并在转染细胞里检测到了目的蛋白。结论：初步证实TAT-LacI HPM融合蛋白作为-种新型通用性非病毒DNA转运载体的可行性,为评价这种新型DNA疫苗载体在提高免疫效果方面的可行性奠定了前期实验基础。     

子宫腺肌病患者血清NGF、PTGFR、β-EP水平和与痛经强度的相关性研究

目的:探讨子宫腺肌病患者血清神经生长因子(NGF)、前列腺素F2α受体(PTGFR)、β-内啡肽(β-EP)水平和与痛经强度的相关性。方法:选择2018年1月至2019年10月我院收治的子宫腺肌病患者80例作为观察组,并选择同期于我院接受健康体检的80例无痛经、月经正常者作为对照组。比较两组一般资料、血清NGF、PTGFR、β-EP水平,及观察组不同痛经强度患者血清NGF、PTGFR、β-EP水平,进一步分析血清NGF、PTGFR、β-EP水平和痛经强度的相关性。结果:两组年龄、身体质量指数(BMI)、孕次、月经周期比较差异无统计学意义(P0.05),观察组经期天数明显长于对照组[(7.16±0.68)d vs.(5.92±0.60)d](P0.05);观察组血清NGF、PTGFR明显高于对照组,β-EP明显低于对照组[(78.24±9.50)ng/L vs.(51.32±5.18)ng/L,(370.69±47.81)ng/mL vs.(95.59±10.42)ng/mL,(130.87±21.26)ng/L vs.(206.63±31.84)ng/L](P0.05);观察组患者随着痛经强度的增加,血清NGF、PTGFR水平逐渐升高,β-EP水平逐渐降低(P0.05);Pearson相关性分析显示血清NGF、PTGFR水平和VAS评分呈显著正相关(P0.05),β-EP和VAS评分呈显著负相关(P0.05),血清NGF和PTGFR水平呈正相关(P0.05),血清NGF、PTGFR水平和β-EP分别呈负相关(P0.05)。结论:子宫腺肌病患者血清NGF、PTGFR的表达明显升高,而β-EP明显降低,和痛经强度之间具有密切相关。     

东山岛海岸带景观破碎化时空梯度分析

运用景观格局指数、缓冲带分析和移动窗口法相结合的方法,分析了福建东山岛18年来从沿海到内陆和海岸地带的景观破碎化梯度变化特征。结果显示:东山岛各缓冲带的景观破碎化程度总体随时间在不断增强,但不同区域有所差异;近海岸地带、西北部及南部的有林地带的破碎化程度持续降低,而中北部和南部城镇农田集中区人为干扰日益强烈,破碎化程度不断增加;采用半变异函数和移动窗口相结合的方法,确定东山岛景观破碎化分析的特征尺度为1000m;在此尺度下,发现景观破碎化指数的变化率随时间存在明显的空间差异,而运用设置样线并提取样点的景观破碎化指数的方法,则发现距离海岸线500m和1000m处的地带破碎化程度不断加剧,是东山岛沿海人为干扰的强烈地带;东山岛人工干扰随时间趋向分散,破碎化指数曲线波动趋向显著;城镇化、旅游和农业发展应该是东山岛景观破碎化的主导驱动因子;采用Pearson相关系数分析景观破碎化与景观格局其他方面特征的相关性,发现它们具有较强相关性,说明运用景观破碎化指数能够反映东山岛景观格局变化的基本特征。     

棉花ms5ms6雄性不育两用系发育过程中POD同工酶分析

为了在生长发育前期简便快速地区分棉花雄性不育A、B两用系的不育株和可育株,采用同工酶分析方法,对POD同工酶进行研究。结果表明,不同器官之间POD同工酶带数及其带的强度存在差异,其中花药的酶带最多、带的强度最高;子房的酶带最少,带的强度最低。同一器官不同发育时期POD同工酶也存在差异,其中在花药发育时期POD同工酶带数及其带的强度差异明显,尤其在单核期和二核期两种不同叶型的两用系A比B分别减少1或2条带。因此,在开花之前根据花药POD同工酶的差异,易于区分A、B两用系中的不育株和可育株。     

腹腔镜胆囊切除术患者手术前、后护理

目的：探讨经腹腔镜下胆囊切除术患者手术前、后的护理方法。方法：回顾分析2004年2月-2004年12月,我科对98例腹腔镜下胆囊切除术患者进行积极心理护理、术前准备、对术后易出现的并发症进行细致观察和护理的临床资料。结果：通过周到细致的护理,98例患者未发生护理并发症,平均4．0天痊愈出院,随访护理满意率94．5％。结论：术前加强各项准备,突出心理护理;术后有针对性地对可能出现的并发症进行预防性处理和监护,有助于病人术后的康复,提高病人的满意度。     

人MEPE/OF45基因的克隆及序列分析

目的：克隆人MEPE/OF45全长基因,为进一步研究MEPE/OF45在DNA损伤应答中的作用及特异的信号通路奠定基础。方法：选取人宫颈癌细胞HeLa为靶细胞,从中提取总RNA,设计扩增人MEPE/OF45基因片段的特异引物,进行RT-PCR分析;用蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（CHX）对细胞进行处理,观察处理前后MEPE/OF45基因的表达情况。结果：在经CHX处理的HeLa细胞中扩增到了MEPE/OF45基因片段,随后利用重叠PCR方法获得了人MEPE/OF45全长基因,并经序列分析确证。结论：获得了人MEPE/OF45基因片段及全长基因,为阐明MEPE/OF45在细胞中复杂的功能提供了线索。     

脆性组氨酸三联体与复制蛋白A相互作用的鉴定

目的：研究脆性组氨酸三联体（Fhit）对ATR／CHKl通路的影响,确定Fhit与复制蛋白A（RPA）存在相互作用,为进一步研究Fhit特异的信号通路奠定基础。方法：将Fhit全长基因插入含GST基因的原核表达载体中,在大肠杆菌中表达纯化GST-Fhit融合蛋白,并用GST沉降技术研究Fhit与RPA是否在体外存在相互作用;在表达Fhit的人细胞中用免疫共沉淀技术分析Fhit与RPA是否在体内存在相互作用,同时用免疫荧光染色方法研究Fhit与RPA在细胞内是否可以共定位。结果：通过免疫共沉淀、免疫荧光染色及GST沉降技术,确定了Fhit与RPA在体内及体外均可以相互作用。结论：确定了Fhit与RPA之间存在相互作用,为阐明Fhit在维持基因组完整性方面的机理提供了线索。     

芦竹内生真菌F0238细胞生长及其代谢调控*

对芦竹内生真菌F0238的细胞生长和代谢产曲酸量进行了代谢调控。结果表明,F0238生长及产曲酸的营养和环境条件为:PDA培养基,8%淀粉为碳源,0.2%蛋白胨为N源,发酵温度28℃,初始pH值为6.5,发酵时间5d/(120h),装液量80mL/500mL三角瓶。在摇瓶试验的基础上,对该菌发酵过程作了初步放大试验(10L全自动发酵罐),得到F0238发酵过程的动态曲线。动态曲线反映了在一个发酵周期内,发酵液的pH值、DO值及残糖的降低趋势和生物量与抗菌产物量的上升趋势。     

中枢神经系统特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠

利用从129sv小鼠基因组文库克隆得到的1．8kb的胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)基因的5′端调控序列,构建了含有2个β—珠蛋白绝缘子、GFAP5′端调控区、Cre基因和人生长激素基因(hGH)polyA的转基因载体pGFAP—Cre—hGH。以显微注射的方法将7．6kb的转基因片段pGFAP—Cre—hGH引入191枚小鼠基因组受精卵,其中176枚分别移植至8只假孕母鼠的输卵管中使其发育,共获得子代小鼠25只。经PCR和Southern杂交鉴定其中7只小鼠基因组上整合有Cre基因,整合率为28％。用整合有Cre基因的转基因小鼠与基因组上整合有LoxP位点和LacZ表达框的ROSA26鼠杂交,以检测Cre酶的活性、组织特异性及其介导的两个LoxP位点间的重组。LacZ染色结果表明,GFAP—Cre转基因小鼠只在中枢神经系统中表达Cre重组酶并能在体内成功介导LoxP位点间的重组。     

CD20F(ab′)2抗体的发酵与纯化

转化了质粒PYZcpp3的 16C9大肠杆菌可高水平地分泌表达可溶性CD2 0F(ab′) 2 抗体 ;采用经优化的培养条件 ,在发酵罐上进行高密度培养OD550 值达 14 0 ;每升湿菌菌重 2 0 0g ;抗体的产量每升为 2 4 1mg ,其中F(ab′) 2 片段达 5 0 % ,F(ab′) 2 可以特异性的识别CD2 0 细胞并与CD2 0相结合 ;F(ab′) 2 对Raji细胞的IC50 值为 2 2 8μg mL ;而Fab′对Raji细胞的IC50 值为 4 5 9μg mL。