瑞香狼毒化学成分的研究北大核心CSCD

采用硅胶、反相RP．18、SephadexLH-20凝胶和制备HPLC色谱技术对瑞香狼毒（StellerachamaejasmeL．）根的化学成分进行分离和纯化。通过核磁、质谱等方法鉴定了其中18个化合物：去甲络石苷元（1）,异落叶松脂素（2）,（＋）-开环异落叶松树脂酚（3）,豆甾4．烯-3,6-二酮（4）,rel-（-）-（3R,3’R,4R,4’R）-6,6＇-dimethoxy-[3,3＇-blchroman]-4,4＇-diol（5）,methyl3-（2-hydroxy-4-（（7-hydmxy-6-methoxy-2-oxo-2H—ehromen-3-y1）oxy）phen-y1）pmpanoate（6）,狼毒素A（7）,异狼毒素B（8）,狼毒素B（9）,雁皮素A（10）,异雁皮素A（11）,狼毒色原酮（12）,mohsenone（13）,丁香酸（14）,二氢瑞香素乙（15）,西瑞香索（16）,β-谷甾醇（17）,3,4,5-三甲氧基苯甲酸（18）。其中化合物1—6均为首次从该植物中分离得到。     

不同程度内质网应激对巨噬细胞自噬的影响*

摘要目的：采用ox-LDL诱导巨噬细胞泡沫化模型,通过不同剂量衣霉素诱导巨噬细胞不同程度内质网应激,观察对其自噬的影 响。方法：不同剂量衣霉素作用于小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过TUNEL染色检测其凋亡率,Western blot检测内质网应激蛋白 GRP78,以及自噬标志蛋白P62 的表达水平。结果：与ox-LDL组和大剂量衣霉素组相比,小剂量衣霉素组可以显著减少巨噬细胞 的凋亡（P<0.01）;与ox-LDL 组相比,小剂量衣霉素组上调内质网应激蛋白GRP78表达的同时,自噬标志蛋白P62 适度下降（P< 0.01）;大剂量衣霉素组更为显著地上调了内质网应激蛋白GRP78 表达,但同时自噬标志蛋白P62 也显著增加（P<0.01）。结论：小 剂量衣霉素引起一定程度的内质网应激,可以激活适度的自噬,从而减少巨噬细胞的凋亡,可能有助于降低动脉粥样硬化的程 度。     

Exocyst复合体的结构与功能研究进展

囊泡运输是真核细胞内细胞器间物质交流的重要手段,主要包括出芽、转运、拴系及膜融合四个环节.拴系因子调控运输囊泡与靶膜的初始接触,建立两者间的连接,并能够促进SNARE介导的膜融合过程.Exocyst是一个保守的八亚基拴系复合体,主要在胞吐过程中介导囊泡与细胞质膜的拴系过程.本文主要介绍exocyst复合体的结构和组装机...     

肿瘤睾丸抗原 CT45-5在 DNA 损伤应答中的作用

目的:用建立的 CT45-5-siRNA 研究肿瘤睾丸抗 CT45-5在 DNA 损伤应答中的作用.方法:通过靶向CT45-5基小干扰 RNA(siRNA)下调 CT45-5的表达,用 MTT 比色法检测经喜树碱和托泊苷处理后细胞对 DNA 损伤诱导剂的敏感性,用流式细胞技术检测电离辐射后细胞周期的变化.结果:在 DNA 损伤诱导剂处理后,在脆性组氨酸三联体(Fhit)高表达细胞中下调 CT45-5的表达可以使细胞表现出更强的 G2期阻滞及对 DNA 损伤诱导剂更耐受,而在 Fhit 缺失表达的细胞中却没有此现象.结论:CT45-5可能是以 Fhit 赖的途径参与了 DNA 损伤应答.     

亚心型四爿藻在CCCP作用下的光生物产氢的代谢途径

以添加CCCP(羰基氰化物间氯苯腙,Carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone)的海洋绿藻亚心型四爿藻光生物制氢为研究体系,使用作用于光合系统不同位点的抑制剂研究该藻产氢过程不同时段的代谢途径。结果表明:四爿藻光生物产氢前期电子主要来自PS Ⅱ光解水以及胞内分解代谢,电子经由光合电子传递链传递至氢酶产生氢气;而后期释放的氢气则是通过不依赖光合电子传递链的发酵途径产生。产氢过程厌氧发酵代谢途径主要产物是乙酸、乙醇,其中乙醇代谢途径和氢酶竞争NAD(P)H,不利于氢气的积累。     

脐血间充质干细胞治疗严重性系统性红斑狼疮的临床疗效初探

目的探讨脐血间充质干细胞对严重性系统性红斑狼疮（SLE）的治疗效果。方法从健康产妇足月分娩的脐带血（UCB）中分离单个核细胞、培养制备间充质干细胞（MSCs）。MSCs培养到第三代时,取样UCB-MSCs,用流式细胞术进行性质鉴定显示：UCB-MSCs高表达CD29,CD90;不表达CD34和CD45。收集生长良好的第三代UCBMSCs。（5.0-6.0）×10^7个细胞加入100ml含1﹪人血白蛋白的生理盐水中,静脉滴注;每天1次,6-10d,一疗程;3-6个月后再用第2疗程。结果通过UCB-MSCs输注,使现有方法治疗无效的2例严重性系统性红斑狼疮患者的症状完全恢复。第1例SLE伴严重狼疮肾,狼疮脑10年,双下肢水肿,皮肤坏疽,溃疡深达骨面,剧痛难眠1年。经治医生动员她截肢保命。UCB-MSCs治疗后10d,病情明显好转,双下肢水肿几乎全部消退。治疗6个月后,11处坏疽、溃疡的疮面10个疮面基本愈合。10个月后患者的坏疽,溃疡的疮面全部愈合,能自由活动,进入正常生活。第2例SLE伴狼疮肾,狼疮脑4年,一年来贫血严重,靠每周输血维持生命。UCB-MSCs治疗二个疗程后,咳嗽,呕吐症状明显好转,浮肿和双侧胸腔积液消失,各项检查指标基本正常,不需要输血治疗。恢复休学多年的学习生活。二者均随访8年,病情稳定,没发现复发症状。结论 UCB-MSCs治疗2例严重性红斑狼疮,取得一定的疗效;这种新的技术可望成为治疗严重性系统性红斑狼疮的辅助疗法。     

Nanog 基因在卵巢癌和卵巢肿瘤干细胞中的表达及意义

目的:探讨胚胎干细胞关键因子Nanog基因mRNA及其蛋白在卵巢癌和卵巢癌肿瘤干细胞中的表达及意义。方法:选取10例正常卵巢上皮组织、10例卵巢良性肿瘤及60例卵巢癌组织,采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学PV-6000两步法检测Nanog mRNA和蛋白表达水平;采用无血清悬浮培养法从SKOV-3卵巢癌细胞株中分离培养肿瘤干细胞,流式细胞术鉴定肿瘤干细胞CD117表达,采用RT-PCR和Western Blot方法检测SKOV-3卵巢癌细胞及肿瘤干细胞中NanogmRNA及其蛋白的表达水平。结果:Nanog mRNA在卵巢癌组织中的表达水平均高于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);Nanog mRNA在不同分化程度及临床分期的卵巢癌组织中表达水平不同,低分化组高于高分化组(P<0.05);III-IV期高于I-II期(P<0.05);免疫组化结果同RT-PCR。从SKOV-3卵巢癌细胞株中成功分离出肿瘤干细胞,SKOV-3卵巢癌细胞和肿瘤干细胞Nanog mRNA相对含量分别为0.6044±0.0368,0.8736±0.0537,差异具有统计学意义(P<0.05),两种细胞Nanog蛋白相对含量分别为0.6364±0.0169 1.2788±0.0314,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:Nanog基因在卵巢癌组织和SKOV-3细胞系中均高表达,其在组织中的表达强度与临床分期及病理分级关系密切,且在肿瘤干细胞中表达高于一般卵巢癌细胞,其与卵巢癌的发生发展关系密切,可能是卵巢癌干细胞的表面标志物,有望成为新的标志物。     

MicroRNA 与肿瘤的相关研究进展

微小RNA(microRNAs,miRNA)是一类22个核苷酸左右的非编码调控RNA。可以通过切割mRNA或者是抑制翻译两种机制,在转录后水平发挥调控生物生长发育的重要作用。目前的研究已经发现microRNA参与调控发育、细胞分化、细胞凋亡等多种生理过程。目前已证实miRNA参与肿瘤发生和进展,miRNA表达谱是肿瘤诊断和预后的指标,miRNA突变、缺失或表达水平的异常与人类肿瘤密切相关,它发挥类似于癌基因或抑癌基因的作用,参与肿瘤细胞的增殖、分化和细胞凋亡过程。本文就miRNA在肿瘤发生发展以及诊断治疗方面的研究进展作一综述。     

DNA损伤检查点蛋白调节子1片段的表达纯化及抗体制备

目的：原核表达、纯化DNA损伤检查点蛋白调节子1（MDC1）片段,并制备其多克隆抗体。方法：设计特异引物,通过RT-PCR扩增编码MDC1 N端194个氨基酸残基的基因片段,测序正确后插入含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果：原核表达并纯化了MDC1 N端片段,并获得了抗MDC1的多克隆抗体,抗体效价达到1∶12800,Western印迹显示该抗血清能特异识别原核及真核细胞表达的MDC1。结论：MDC1 N端片段能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MDC1在Fhit特异信号通路中的作用奠定了基础。