人血管生成素cDNA的克隆与表达

血管生成素 ( angiogenin,ANG)广泛存在于多种肿瘤组织中 ,在肿瘤发生的不同阶段刺激新生血管的形成 .利用 RT- PCR方法从培养的人肺癌细胞系 A549扩增得到了 ANG c DNA片段 ,测序正确后克隆入融合表达载体 p RSETB中 ,构建了原核表达菌株 .经 IPTG诱导 ,表达了 N端融合His6的 ANG融合蛋白 ,表达量占菌体总蛋白的 1 0 % ,纯化后的血管生成素体外能够有效地刺激鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成 .     

抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体与其配体的相互作用

为了在大肠杆菌中表达纯化抗人 TNF- α单链抗体并检测其结合活性与中和活性 .利用GST融合蛋白系统在大肠杆菌中表达抗人 TNF- α单链抗体 E6Sc Fv;分离包含体后进行变性和复性 ,再用亲和层析法进行纯化 ;用 ELISA法和酵母双杂交系统检测 E6Sc Fv与配体的结合 ;用 L92 9细胞检测 E6Sc Fv对人 TNF- α细胞毒作用的中和活性 .经变性 ,复性与亲和层析 ,E6Sc Fv被纯化 ,在 SDS- PAGE上为单一蛋白带 ;体外结合与中和实验表明 ,表达纯化的 E6Sc Fv可与人 TNF-α结合并中和其细胞毒活性 ;进一步用酵母双杂交系统证明当表达于细胞内时 ,E6Sc Fv仍保持了与TNF-α相结合的能力 .     

一步法从人血浆中制备天然血管生成抑制素

血管生成抑制素（angiostatin）能特异地抑制新生血管生成,有潜在的临床应用价值.利用亲和层析从人血浆中纯化纤溶酶原,并在原位进行弹性蛋白酶有限消化产生angiostatin片段,经过洗涤,然后用0.2 mol/L 6-氨基己酸溶液将angiostatin特异性洗脱.此改进使整个制备过程变得简单、快速和高效.体外对牛主动脉内皮细胞的生长抑制实验以及体内鸡胚尿囊膜血管生成抑制分析结果证实所制备的angiostatin有较强的抑制血管生成活性.     

生活垃圾生产地毯式草皮环境生态工程基质选配研究

以生活垃圾为基质,选用几种可行性强的材料为配材,进行了生活垃圾生产地毯式草皮基质的选配,通过几种草坪草在各选配基质上的生长效应,及对选配基质的ｐＨ值及水分胁迫性能进行了研究。结果表明,不同选配基质对草坪草的生长效应差异较大,锯木屑可通过增强基质的保水性能而提高草坪草的抗干旱胁迫能力,并能促进草坪草的生长,草木灰显较强的碱性,当其占基质２５％时,则ｐＨ值可达９以上,细河沙可改善基质的通透性,但配施量     

不同岩蔷薇浸膏挥发性致香成分的SED-GC-MS分析研究

采用同时蒸馏-萃取装置分别提取国产及进口岩蔷薇浸膏中挥发性物质,将其进行GC-MS分析。结果显示：国产岩蔷薇浸膏中挥发油含量为10．52％,进口岩蔷薇浸膏中挥发油含量为21．80％。分别从国产及进口岩蔷薇浸膏中鉴定了48种和38种挥发性成分。对比进行感官评价表明：国产岩蔷薇浸膏香气特征明显,具有典型的龙涎香-琥珀膏香香气,但余味欠干净需控制用量谨慎使用。进口岩蔷薇浸膏似经过人工复配,特征明显,与烟草的配伍性表现良好。     

矿质营养缺乏对黄瓜生理生化特性的影响

通过营养液栽培,研究不同矿质营养的缺乏对黄瓜叶片组织生理生化特性的影响。结果表明,缺铜对植株生理影响最大,在各处理中,叶片组织的可溶性糖含量最低,木质素含量也处于较低水平,而相对电导度则最高,所测定的4种保护酶(POD、PPO、PAL、SOD)活性也最低。其次是锌,缺锌造成了相对电导度的增加,可溶性糖含量和木质素含量的下降,除PAL活性外,其余3种酶活性也处于次低的位置。缺锰主要导致了叶片组织可溶性糖含量、木质素含量以及PAL活性的较大幅度的下降。缺钙主要降低了叶片组织中可溶性糖含量和SOD活性。比较而言,硼和铁的缺乏影响较小。     

截短型细胞毒素Gelonin的分子构象和生物活性

为了探索免疫络合物中具杀伤靶细胞的毒素,gelonin的结构与功能的关系,根据化学合成的gelonin基因序列和3维分子构象设计了N端区Gly,Leu,Asp和/或C端区Asp,Lys,Asp,Pro,Lys缺失的gelonin. 以重组质粒pE gel为模板,在相应引物存在下,用PCR法获得5′端区和/或3′端区碱基序列缺失的gelonin基因片段. 经克隆、表达和纯化得到3种截短型gelonin（G-N3、G-C5、G-N3C5）. CD谱和荧光谱表明,完整型gelonin（G-O）与截短型gelonin的分子构象有明显的差异.它们的构象变化与类DNase活性和抑制肿瘤细胞生长的能力均为G-O≥ G-N3＞G C5＞G-N3C5. 结果再一次证明了具有α+β型结构蛋白,gelonin的构象与生物活性的一致性.     

Cu2+对喜树愈伤细胞中喜树碱合成的影响

喜树碱是一种从木本植物喜树(Camptotheca acuminata)中分离得到的抗癌活性物质,通过细胞培养合成喜树碱是喜树碱生产的一条重要途径。研究Cu²⁺对喜树愈伤细胞培养中喜树碱积累的影响,结果表明,在B5培养基中添加0.008mg/mL Cu-Cl²时,对喜树愈伤细胞的生长没有明显影响,但是对喜树愈伤细胞合成喜树碱的促进作用最强,喜树碱含量比未诱导前增加了约30倍。Cu²⁺阻止培养细胞后期过氧化物酶活力的下降,并抑制花青素的生成。与黑暗培养相比,光照条件下添加Cu²⁺更利于喜树愈伤细胞诱导合成喜树碱。     

盐胁迫下珠眉海棠与山定子叶片Na+区域化的研究

以盐敏感型山定子实生苗和耐盐型珠眉海棠组培苗为材料,采用灌注离心技术研究了叶片质外体和共质体中Na^＋和Ca^2＋浓度的变化。结果表明：随盐胁迫强度的加强,叶片水势下降;叶片Na^＋含量、质外体和共质体中Na^＋浓度升高,珠眉海棠明显低于山定子;叶片Ca^2＋含量、共质体Ca^2＋浓度随盐胁迫的增加而升高,但珠眉海棠高于山定子,50mmol／L NaCl胁迫对质外体Ca^2＋没有明显影响,100mmol／LNaCl胁迫下增加,珠眉海棠低于山定子;叶片共质体与质外体中Na^＋浓度的比值,珠眉海棠明显高于山定子,说明在盐胁迫下珠眉海棠具有较强的离子区域化能力,离子区域化是珠眉海棠的主要耐盐机制。     

利用固定化金属亲和层析和质谱技术鉴定化脓性链球菌铜结合蛋白

化脓性链球菌是一种常见的高致病性革兰氏阳性菌,每年都在全球范围内引发大量的感染现象与病死案例。金属蛋白在微生物的代谢以及毒性构成中的作用已经逐渐得到重视。通过固定化金属离子亲合层析技术对化脓性链球菌中铜结合蛋白进行分离,配合质谱技术的使用,共鉴定出21个铜结合蛋白,这些蛋白分别在翻译、代谢、离子通道等各个生理进程中发挥相应作用。