判断基因中点突变使用的寡聚核苷酸探针

本文简明扼要地介绍了人工合成寡聚核苷酸探针的设计原则,以及用 ³²P标记等方法。同时还从理论上阐述了19聚体探针在生物实验使用中的合理性,并强调在检测基因的点突变时,设计人工合成的寡聚核苷酸探针应将点突变位点置于探针序列的中间为宜。在选择序列时,要注意避免发生G-T错配,这样有利于鉴别基因的点突变。     

应用寡聚核苷酸检测c-Ha-ras癌基因点突变

人工合成的寡聚核苷酸探针能够准确地检测出克隆的c-Ha-ras癌基因第12位密码子是否发生点突变。将多聚酶DNA链延伸反应(PCR)与寡聚核苷酸探针结合起来测定组织或细胞株中的单拷贝基因c-Ha-ras第12位密码子的点突变,获得满意的结果。此方法的建立,有助于肿瘤的早期诊断、分型等方面的研究。     

以寡聚核苷酸为探针对癌基因Ha-ras点突变的测定

<正> 基因中一个核苷酸的改变(点突变)是原癌基因活化的途径之一。核苷酸序列分析表明,我们从胃癌细胞系中克隆出的癌基因Ha-ras,就是由于其编码区第35位核苷酸从鸟嘌呤(G)变为胸腺嘧啶(T)而被激活的。测定基因的点突变除了序列分析方法之外,还有比较简单、经济的寡聚核苷酸探针分子杂交等方法。我们按照正常的原癌基因c-Ha-ras和胃癌     

截短型细胞毒素Gelonin的分子构象和生物活性

为了探索免疫络合物中具杀伤靶细胞的毒素,gelonin的结构与功能的关系,根据化学合成的gelonin基因序列和3维分子构象设计了N端区Gly,Leu,Asp和/或C端区Asp,Lys,Asp,Pro,Lys缺失的gelonin. 以重组质粒pE gel为模板,在相应引物存在下,用PCR法获得5′端区和/或3′端区碱基序列缺失的gelonin基因片段. 经克隆、表达和纯化得到3种截短型gelonin（G-N3、G-C5、G-N3C5）. CD谱和荧光谱表明,完整型gelonin（G-O）与截短型gelonin的分子构象有明显的差异.它们的构象变化与类DNase活性和抑制肿瘤细胞生长的能力均为G-O≥ G-N3＞G C5＞G-N3C5. 结果再一次证明了具有α+β型结构蛋白,gelonin的构象与生物活性的一致性.