结肠造口手术的改进

我院近十年来行直肠癌Miles术式100余例;腹膜外人工肛门30例;腹膜内人工肛门67例;描述不清10例;狭窄6例,扩肛后改善。近三年来,由于采用改进的造口术腹膜外人工肛门及造口处皮肤切除严格掌握在3——3.5cm直径(30例),使人工肛门既有一定的控便功能,又无肛门狭窄现象,均较老术式有较大进步。     

大鼠结肠平滑肌细胞的钙库操纵性通道

目的:探讨大鼠结肠平滑肌细胞是否存在钙库操纵性通道(SOC)。方法:荧光探针Fura-2/AM标记细胞内游离Ca2+后,用荧光分光光度计检测毒胡萝卜素(thapsigargin)和咖啡因(caffeine)耗竭胞内钙库后激活的SOC通道对酶解分离的大鼠结肠平滑肌细胞[Ca2+]i的影响。结果:在无Ca2+缓冲液中,thapsigargin(1μmol/L)以及caf-feine(10 mmol/L)分别使[Ca2+]i由静息时(68.32±3.43)nmol/L升高至(240.85±12.65)nmol/L(、481.25±34.77)nmol/L,继之,向细胞外液中引入两种浓度的Ca2+(1.5 mmol/L和3.0 mmol/L),导致[Ca2+]i进一步升高,分别为(457.55±19.80)nmol/L、(1005.93±54.62)nmol/L;(643.88±34.65)nmol/L、(920.16±43.25)nmol/L。且上述升高效应对维拉帕米(verapamil,5μmol/L)以及KCl引起的细胞膜去极化不敏感,但可被La3+(1 mmol/L)抑制。结论:在酶解分离的大鼠结肠平滑肌细胞上,存在胞内钙库耗竭激活的SOC通道,为支持在电兴奋性细胞上存在库容性Ca2+内流提供了实验和理论依据。     

小檗碱对豚鼠结肠平滑肌细胞内游离钙浓度的影响

采用Ca2 荧光示踪剂Fura 2 AM和双波长荧光分光光度法 ,观察小檗碱 (berberine ,Ber)对酶法分离的豚鼠结肠平滑肌细胞内游离钙 ([Ca2 ]i)的影响并探讨其机制。在含 1 5mmol/LCaCl2 的HEPES Ringer缓冲液中 ,豚鼠结肠平滑肌细胞 [Ca2 ]i为 10 8± 9 4nmol/L (n =7) ,Ber对静息 [Ca2 ]i 无明显影响 ,Ber呈浓度依赖性抑制 ,6 0mmol/LKCl引起的 [Ca2 ]i 增高 ,IC50 值为 34 0 9μmol/L。在含 1 5mmol/LCa2 和无Ca2 的缓冲液中 ,30、10 0μmol/LBer均显著抑制 10 μmol/LACh所诱发的 [Ca2 ]i 的增高 ,且有浓度依赖性 ;同样Ber对环匹阿尼酸 (CPA)所致的 [Ca2 ]i 增高也有浓度依赖性抑制作用 ,有钙和无钙条件下IC50 分别为 37 97μmol/L和 49 70 μmol/L。结果提示 ,Ber对结肠平滑肌细胞外Ca2 内流和细胞内钙释放均有抑制作用。     

腔镜下Soave根治术与开腹改良Soave术治疗长段型先天性巨结肠患儿的疗效比较及对应激反应和控便功能的影响

摘要 目的：比较腔镜下Soave根治术与开腹改良Soave术治疗长段型先天性巨结肠（HD）患儿的疗效,观察两种术式对应激反应和控便功能的影响。方法：选取我院2017年4月～2020年9月期间收治的长段型HD患儿88例,根据手术方式的不同分为开腹组和微创组,例数分别为43例和45例。对比两组围术期指标、应激反应指标、控便功能和并发症发生情况。结果：微创组的术中失血量少于开腹组,手术时间、胃肠功能恢复时间、禁食时间、住院时间短于开腹组（P<0.05）,两组肠管切除长度组间对比无统计学差异（P>0.05）。两组患儿术后1 d心率（HR）、平均动脉压（MAP）较术前升高,血氧饱和度（SpO₂）较术前下降,但微创组HR、MAP低于开腹组,SpO₂高于开腹组（P<0.05）。两组患儿术后1年大便性状、排便次数、污粪、需要治疗（灌肠、药物、尿布）评分及Heikkinen总分均较术前升高,且微创组高于开腹组（P<0.05）。微创组的近期并发症总发生率和远期并发症总发生率均低于开腹组（P<0.05）。结论：与开腹改良Soave术相比,采用腔镜下Soave根治术治疗长段型HD患儿可缩短手术时间、禁食时间、住院时间、胃肠功能恢复时间,减少手术创伤,减轻机体应激反应,改善患儿控便功能,同时还可降低并发症发生率,效果较好。     

基于ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列的猪源结肠小袋纤毛虫种群特征分析

【目的】为了揭示结肠小袋纤毛虫病在环境中的分子传播机制,研究了猪源结肠小袋纤毛虫的种群特征。【方法】用粪便涂片镜检和改进型DMEM培养基从病猪结肠内容物分离结肠小袋纤毛虫滋养体,然后用显微观察、吖啶橙荧光染色法和基于ITS1-5.8S rRNA-ITS2序列的分子标记技术分析了豫西地区猪群中结肠小袋纤毛虫的种群特征。【结果】结果显示,从来自豫西地区8个县市的病猪中共分离了15株小袋纤毛虫,5.8S rRNA序列相似性高达99.4%以上,同属于结肠小袋纤毛虫,根据ITS1/2序列分析结果,MJ-2和SX-1株属于结肠小袋纤毛虫基因型A,其余13株均属于结肠小袋纤毛虫基因型B。MJ-2和SX-1株滋养体形态特征明显区别其他13株,绝大多数呈球形,运动缓慢,粪便中和体外培养的虫体密度较低;而其他13株的滋养体均呈多形性,运动快速活跃,虫体密度较大。吖啶橙荧光染色显示,2种基因型滋养体的核结构没明显差别。【结论】首次报道中国猪源结肠小袋纤毛虫存在2个基因型,其中基因型B为优势种群,为防控人和动物结肠小袋纤毛虫病提供重要参考。     

GSTP1、E-cadherin在垂体腺瘤中的表达及临床意义

目的：研究谷胱甘肽S-转移酶P1（GSTP1）、上皮钙粘蛋白（E-cadherin）在垂体腺瘤中的表达及临床意义。方法：应用免疫组化SP染色法检测30例侵袭性垂体腺瘤与30例非侵袭性垂体腺瘤中GSTP1、E-cadherin的表达。结果：GSTP1在侵袭性垂体腺瘤中的表达较非侵袭性垂体腺瘤显著降低（P〈0.05）;E-cadherin在侵袭性垂体腺瘤中的表达较非侵袭性垂体腺瘤显著降低（P〈0.05）;GSTP1、E-cadherin在垂体腺瘤中的表达呈正相关（r=0.82,P〈0.05）。结论：GSTP1、E-cadherin在垂体腺瘤中的表达与肿瘤侵袭程度显著相关,两者联合检测有助于判断垂体腺瘤侵袭性及预后。     

血管生成素-1在甲状腺腺瘤中的表达及其与超声造影的相关性分析

目的:以瘤旁正常组织为对照,研究甲状腺腺瘤中血管生成素-1(Ang-1)的表达情况,并分析其与超声造影的相关性,为超声诊断及预后判断提供依据。方法:回顾性分析甲状腺腺瘤患者15例的超声造影检查结果,根据时间强度曲线获得造影参数。用Western印迹检测术后肿瘤及瘤旁标本的Ang-1表达情况,并与超声造影结果进行相关性分析。结果:15例甲状腺腺瘤中,13例造影后肿块与周围甲状腺表现为高回声(86.7%,13/15),2例出现等回声(13.3%,2/15),12例肿块内部均匀增强(80%,12/15);甲状腺腺瘤组平均渡越时间(m TT)、峰值强度(Imax)大于瘤旁组(P0.05);甲状腺腺瘤较瘤旁组织Ang-1表达明显升高(P0.05);相关性比较可见Ang-1表达水平与始增时间(RT)、达峰时间(TTP)、m TT的表达呈负相关(P0.01),与Imax的表达呈正相关(P0.01)。结论:甲状腺腺瘤中Ang-1较瘤旁组织明显升高,其超声造影指标与Ang-1的表达水平存在相关性,通过甲状腺腺瘤的超声造影,可以为Ang-1的表达水平提供依据,并可能为预后提供参考。     

JSRV衣壳蛋白单克隆抗体的制备及免疫学鉴定

经纯化的JSRV-CA融合蛋白乳化后免疫Balb/c小鼠,四免后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞经杂交瘤技术进行融合．最终获得了三株稳定分泌单克隆抗体的细胞系．同时,分段克隆绵羊肺腺瘤病毒ca基因并构建原核表达质粒,在E． coli BL21中诱导表达．以获得的三株抗JSRV-CA蛋白的单克隆细胞分泌的McAb为一抗,应用Western blot对分段表达的CA蛋白进行肽探针扫描,初步鉴定了三株单抗识别的线性表位,并应用非竞争性ELISA法测定了三株单抗的功能性亲和常数．为建立特异性的病原诊断方法、分析CA蛋白的功能及疫苗设计奠定了基础．     

β3肾上腺素受体介导多巴胺对大鼠远端结肠运动的抑制作用

目的研究多巴胺（DA）对大鼠结肠运动影响的机制。方法采用离体组织灌流方法记录大鼠远端结肠自发性节律运动,观察DA的作用以及阻断剂的影响,再用反转录实时多聚酶链反应（real time RT-PCR）检测受体基因的表达。结果DA（≥1.0×10-5mol/L）对结肠远端（紧接肛门淋巴结近端）离体纵行肌条（2.0 mm×10 mm）的运动具有抑制作用,多巴胺受体阻断剂（D1受体阻断剂SCH23390,1.0×10-7mol/L,D2受体阻断剂Sulpide,1.0×10-7mol/L）不能阻断多巴胺的抑制效应,但加入β3受体抑制剂cyanopindolol（7.5×10-7mol/L）,DA的抑制作用显著减弱。real time RT-PCR检测发现β1、β2、β3受体mRNA在远端结肠均有表达。结论DA可通过β3受体发挥对远端结肠运动的抑制作用。     

表达血管抑制因子的腺相关病毒载体的构建及其体内外活性

血管抑制因子(Vasostatin,VAS),为集钙蛋白N-末端180个氨基酸大小的蛋白,是一种内源性血管生成抑制因子,对多种肿瘤的生长具有很强的抑制作用.近期有研究显示,VAS可以促进神经内分泌肿瘤的恶化,提醒研究人员在开发该抗肿瘤药物时必须非常谨慎.将VAS cDNA插入腺相关病毒-2表达质粒pAAV-2,采用无辅助病毒参与的三质粒共转染法制备rAAV-VAS病毒.体外分别转染小鼠胰内皮细胞MS1和结肠癌细胞HCT-116,MTT法测定对细胞生长的影响,Western blotting方法检测VAS的表述.采用小鼠皮下移植瘤模型,验证VAS的表达对肿瘤生长、新生血管密度、以及细胞增殖的作用.结果证明构建的rAAV-VAS病毒载体,能抑制小鼠胰内皮细胞的生长,转染HCT-116后能有效表达VAS蛋白,但HCT-116的体外生长不受影响.瘤体注射rAAV-VAS后,HCT-116移植瘤在小鼠体内的生长速度明显减缓,肿瘤新生血管密度明显降低.结果显示,rAAV-VAS可以抑制HCT-116移植瘤的新生血管形成,但对其细胞增殖无明显作用.