昆虫病原菌(Isaria fumosorosea)查尔酮异构酶基因CHI克隆及生物信息学分析

本研究旨在对昆虫病原菌玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)查尔酮异构酶基因CHI进行克隆、测序及相关生物信息学分析.序列分析结果显示:IfCHI基因编码区全长为1152bp,编码383个氨基酸,理论等电点(pI)D为9.72,属不稳定水溶性蛋白,其二级结构为混合型,蛋白质溶剂可及性主要分为三类,三级结构由α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲组成,同源序列分析及多重序列比对分析存在明显的差异.该昆虫病原菌玫烟色棒束孢IfCHI编码基因的成功克隆及生物信息学分析,为进一步研究病原菌CHI基因的遗传特性和表达机制以及为寻找更多的查尔酮类化合物提供了理论基础.     

基于CRISPR/Cas生物传感原理的病原菌检测技术研究进展*

病原菌的快速准确检测是实现疫情高效防控、疾病精准治疗、污染环境及时处置的关键。而现有的病原菌现场快速检测技术,主要以定性分析为主,假阳性/假阴性受到诟病,检测准确性仍有待提升,亟待发展基于新原理、新方法的病原菌快速检测技术。基于CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)的生物传感技术因具有高灵活性(对不同的基因靶点只需改变crRNA序列)、高特异性(单碱基分辨)、高灵敏(优于10^-18 mol/L浓度)、可编程、可模块化、低成本、可在各种体外介质中高效稳定运行等独特优势,打破了传统分子诊断与检测技术的局限性,正在成为下一代病原菌检测技术的引领者。在该技术中,Cas效应蛋白被用作高特异性的序列识别元件,结合不同的生物传感机制,即可用于病原菌的高特异性快速灵敏检测。在总结CRISPR/Cas生物传感技术原理的基础上,综述了用于病原菌检测的CRISPR/Cas12和CRISPR/Cas13生物传感技术研究进展。通过阐述CRISPR/Cas生物传感技术在实际应用中面临的挑战,展望其未来的发展前景。     

针叶树病原菌异担子菌属的物种多样性及相关检疫建议

异担子菌属Heterobasidion种类是北半球针叶树最严重的森林病原菌,在世界范围内能侵染27种针叶树,对欧洲和北美洲的经营林已造成重大损失。基于传统形态学研究,认为异担子菌属有2个种,即多年异担子菌H. annosum和岛生异担子菌H. insulare,然而单孢交配实验研究证明2个种为复合种。分子系统发育分析研究表明：异担子菌属包括15个种,其中5个种为森林病原菌[冷杉异担子菌H. abietinum、多年异担子菌（狭义）H. annosum s. str.、变孔异担子菌H. irregulare、西方异担子菌H. occidentale和小孔异担子菌H. parviporum];10个种为腐生菌（淀粉孢异担子菌H. amyloideum、南洋杉异担子菌H. araucariae、阿曼德异担子菌H. armandii、南方异担子菌H. australe、岛生异担子菌H. insulare、林芝异担子菌H. linzhiense、东方异担子菌H. orientale、拟岛生异担子菌H. subinsulare、拟小孔异担子菌H. subparviporum和西藏异担子菌H. tibeticum）。多年异担子菌（狭义）H. annosum s. str.、小孔异担子菌H. parviporum和冷杉异担子菌H. abietinum分布于欧洲,分别是松属、云杉属和冷杉属林木的病原菌。变孔异担子菌H. irregulare和西方异担子菌H. occidentale分布于北美洲,前者侵染松属和柏属树木,后者侵染冷杉属、铁杉属、黄杉属和巨杉属树木。虽然广义的多年异担子菌H. annosum sensu lato曾在我国报道,但基于目前研究结果表明该种为拟小孔异担子菌H. subparviporum。目前世界上最具侵染力的5种病原菌即狭义的多年异担子菌H. annosum s. str.、小孔异担子菌H. parviporum、冷杉异担子菌H. abietinum、变孔异担子菌H. irregulare和西方异担子菌H. occidentale还未在我国发现,也未列为对外检疫对象,因此建议将其列为进境植物检疫性有害生物。RNA聚合酶II大亚基序列（RPB1）在异担子菌属种类鉴定中敏感性和特异性最高,研究证明该分子方法可应用于鉴别不同异担子菌种类的有效基因标记,在海关部门进行原木和木质产品的检疫中可运用该分子标记进行林木病原异担子菌的检测。     

胆总管结石患者胆汁病原菌分布特点及耐药性分析

目的:探讨胆总管结石患者胆汁病原菌的分布特点以及耐药性的分析。方法:选择2016年6月-2017年6月期间我院收治的胆总管结石合并胆道感染患者160例为研究对象,所有患者均进行逆行内镜胰胆管造影(ERCP)并抽取胆汁标本,进行细菌培养和耐药性实验,评价分析胆汁病原菌的分布特点及耐药性情况。结果:160例患者中有117例(73.13%)检出病原菌,共培养出病原菌130株,其中有13例患者为两种病原菌同时感染。革兰阴性菌有95株(73.08%)、革兰阳性菌有31株(23.85%)、真菌有4株(3.08%)。比例由高到低的前六位病原菌依次为:大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、屎肠球菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌。革兰阴性菌对亚胺培南、阿米卡星、美罗培南、他唑巴坦、头孢吡肟等三四代头孢菌素耐药率较低,对头孢曲松、环丙沙星、左氧氟沙星、哌拉西林、氨苄西林等耐药率较高。革兰阳性菌对替拉考宁、万古霉素、利奈唑胺等耐药率较低,对四环素、环丙沙星、左氧氟沙星、克林霉素、氨苄西林等耐药率较高。真菌对酮康唑、伊曲康唑、氟康唑等耐药率较低,对两性霉素B耐药率较高。结论:胆总管结石患者胆汁病原菌主要为革兰阴性菌、其次为革兰阳性菌,各病原菌对各种抗菌药物表现出不同的耐药性,因此在临床治疗时应参考药敏试验结果进行合理选择治疗药物。     

82例极低/超低出生体重儿败血症的临床分析

目的:分析极低/超低出生体重儿败血症的临床特征、病原菌及药物敏感情况,为其早期诊断及治疗提供参考。方法:对2014年1月1日至2017年12月31日阜阳市人民医院新生儿重症监护病房(NICU)确诊的82例早产极低/超低出生体重儿败血症的临床表现、实验室检查、病原菌及药敏情况进行回顾性分析。结果:极低/超低出生体重儿败血症以早发型(≤7天)为主,晚发型以院内感染为主,临床表现缺乏特异性,实验室检查中白细胞、血小板出现减低,C反应蛋白和降钙素原增高。病原菌以革兰阴性菌为主,其次为革兰阳性菌和真菌。药敏结果显示革兰阴性菌对三代头孢、氨苄西林类抗生素100%耐药,对加他唑巴坦的抗生素耐药率较低,对碳氢酶烯类抗生素敏感。革兰阳性菌对β-内酰胺类、大环内酯类、氨基糖甙类及克林霉素等耐药率较高,对万古霉素、利奈唑烷敏感。82例败血症患儿中,死亡6例,死亡率为7.3%。结论:早产极低/超低出生体重儿败血症缺乏特异性临床表现,且发病率高,应密切观察患儿临床表现及动态监测其C反应蛋白、血小板等的变化,同时及时完善细菌培养及药敏试验,有效合理使用抗生素,以减少多重耐药菌株产生,改善患儿预后。     

重症肺炎新生儿支气管肺泡灌洗液 病原菌分布及耐药性

目的研究重症肺炎新生儿支气管肺泡灌洗液的病原菌分布和耐药性。方法选择2016年4月至2018年4月在本院呼吸科治疗的新生儿268例,其中符合重症肺炎诊断标准的患儿142例,归为重症肺炎组;不符合重症肺炎诊断标准的患儿126例,归为对照组。检测患儿肺泡灌洗液病原菌分布情况和耐药情况。结果重症肺炎组患儿肺炎克雷伯菌、流感嗜血菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、金黄葡萄球菌、溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、草绿链球菌检出率明显高于对照组。肺炎克雷伯菌对亚胺培南,美罗培南的耐药性为0.0%,大肠埃希菌对亚胺培南,美罗培南,阿米卡星的耐药性为0.0%,阴沟肠杆菌对亚胺培南,美罗培南,左氧氟沙星的耐药性为0.0%,肺炎链球菌对万古霉素的耐药性为0.0%,金黄葡萄球菌对万古霉素的耐药性为0.0%。结论新生儿重症肺炎患者病原菌以革兰阴性菌为主,亚胺培南、美罗培南、万古霉素可以用于治疗新生儿重症肺炎,但由于其毒副作用较大,应严格把握适应症。     

老年气管插管患者下呼吸道感染细菌分布及 耐药性分析

目的研究老年气管插管患者下呼吸道感染的病原菌分布及耐药情况,为临床插管前预防性经验用药提供参考。方法回顾性分析2014-2016年上海市虹口区江湾医院老年气管插管患者的病原菌分布及耐药性情况。结果 560例标本中共检出177株致病菌,其中革兰阴性杆菌121株(68.36%),以肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌为主;除鲍曼不动杆菌/溶血不动杆菌外,其他革兰阴性杆菌对亚胺培南、美罗培南敏感性均较高。革兰阳性球菌检出52株(29.38%),以金黄色葡萄球菌为主(其中MRSA 37株),对万古霉素敏感性较高。另外分离到真菌4株。结论气管插管患者下呼吸道感染致病菌以肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌为主。在临床应用中,应根据本地区、本医院的病原菌分布状况和细菌耐药情况,给予适当药物,预防感染。     

血培养标本中病原菌的分布特征、 耐药性变迁和耐药基因分型

目的分析嘉兴市中医医院血培养标本中病原菌的分布特征、耐药性变迁和耐药基因分型。方法将本院2013年1月至2016年12月送检的血培养标本进行培养、转种、分离鉴定和药敏试验,采用聚合酶链反应(PCR)技术进行产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性菌和革兰阳性菌的耐药基因检测,并对阳性菌株、科室分布、耐药性等相关数据进行分析。结果 2013年1月至2016年12月共送检血培养标本27 003份,共分离出病原菌(剔除重复菌株)978株,阳性率为3.62%,2015-2016年阳性率显著低于2013-2014年,差异有统计学意义(P0.01)。血培养阳性株数前三位为ICU、儿科和肾内科,2015-2016年与2013-2014年相比,ICU的阳性株数构成比显著下降,儿科、呼吸内科和其他科室显著上升,差异有统计学意义(P0.01)。血培养致病菌检出率最高的为大肠埃希菌,占18.51%,其次为表皮葡萄球菌,占10.53%,不可忽视的是真菌,占4.91%。2015-2016年与2013-2014年相比,金黄色葡萄球菌检出率显著上升,粪肠球菌和近平滑假丝酵母菌的检出率显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。血培养分离的大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率最高,肺炎克雷伯菌对呋喃妥因的耐药率最高。2015-2016年与2013-2014年相比,大肠埃希菌对氨苄西林/舒巴坦和庆大霉素的耐药率显著下降(P0.01),肺炎克雷伯菌对庆大霉素的耐药率显著上升(P0.01)。分离的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率最高,2015-2016年与2013-2014年相比,表皮葡萄球菌对红霉素和氯洁霉素的耐药率显著下降(P0.01),金黄色葡萄球菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率显著下降(P0.01)。大肠埃希菌ESBLs(+)菌株对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉等的耐药率以及所有基因型表达率均显著高于ESBLs(-)菌株(P0.05或P0.01);肺炎克雷伯菌ESBLs(+)菌株对头孢唑啉、头孢曲松、庆大霉素等的耐药率以及TEM、SHV、CTX-MⅡ基因型表达率均显著高于ESBLs(-)菌株(P0.05或P0.01)。表皮葡萄球菌检出mecA基因(+)72株,金黄色葡萄球菌检出mecA基因(+)53株。屎肠球菌和粪肠球菌分离株中,未发现有vanA(+)、vanB(+)和vanM(+)万古霉素耐药株。结论了解本院血培养致病菌整体变化趋势、病区分布特点及耐药性变迁和耐药基因分型,对临床合理使用抗生素和院内感染的控制有重要意义。     

425例皮肤浅部真菌病的病原菌分析

目的探讨杭州地区皮肤浅部真菌病的病原菌分布及各年龄段发病情况。方法对2011年1月至2014年12月来杭州市西湖区第二人民医院皮肤科就诊的425例皮肤浅部真菌病患者的病原菌进行回顾性统计分析。结果皮肤浅部真菌病病原菌前三位为红色毛癣菌、酵母菌和须癣毛癣菌,发病部位前三位为足癣、甲癣和体癣。体癣和皮肤念珠菌病以7岁(不含7岁)婴幼儿为主,手癣、足癣和甲癣以18(含18岁)~65岁(含65岁)中青年人群为主,股癣以18(含18岁)~40岁(含40岁)青年人和65岁(不含65岁)老年人为主。结论杭州地区皮肤浅部真菌病以红色毛癣菌和酵母菌为主,患者以18(含18岁)~65岁(含65岁)中青年为主要人群。要坚持开展皮肤浅部真菌病的流行病学监测,对皮肤浅部真菌病的防治有重要意义。