改良K-B法用于副溶血性弧菌耐药性检测

K-B纸片法是最为广泛的细菌药敏测定方法之一,针对常见的食源性致病菌副溶血性弧菌,对K-B纸片法进行优化和改良。通过建立OD-菌数对应公式以代替传统的麦氏比浊方法,并根据抑菌圈判别结果的差异,选择了标准一次性平皿(9 cm×9 cm),同时对比3种不同的涂布方法,得出定量300μL棉拭子涂布方法变异系数(CV)最小,最后通过8株野生副溶血性弧菌的耐药性检测,表明改良K-B法与传统方法的实验结果基本保持一致。从而建立了一种更高效、更快捷的细菌耐药性测量方法,可应用于副溶血性弧菌的耐药性检测。     

计算机辅助药物筛选平台及应用

先导化合物发现是创新药物研发的最重要环节之一。针对目前海量功能不明确的小分子化合物,本文构建了一个用来实现快速发现先导化合物,有效降低药物研发成本的计算机辅助药物筛选平台。该平台采用分布式架构思想,集成了Auto Dock Vina和多个小分子库,具有数据安全、计算与存储的负载均衡以及实时监控的特点。应用平台进行先导化合物筛选,在较短时间发现了有针对性的活性小分子化合物,命中率高,大大缩短先导化合物发现周期。该平台具有很好的实用性和良好的扩展性。     

酯酶同工酶及RAPD技术在香菇杂种优势研究中的应用

采用酯酶同工酶及RAPD技术对香菇3个亲本双核体(苏香、野生46#、野生80#)及其10个单核体、以及它们的10个杂交后代进行了遗传差异和亲缘关系的研究,同时针对亲本单核体酯酶同工酶标记和RAPD标记遗传距离、以及杂交子和亲本单核体RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势进行了相关性分析。结果表明,酯酶同工酶和RAPD技术都可进行香菇杂种优势群的划分研究,但RAPD标记检测的多态性要远远高于酯酶同工酶标记。相关分析结果表明,亲本单核体酯酶同工酶标记遗传距离与香菇产量超亲优势无相关性,而RAPD标记遗传距离与其存在极显著正相关;杂交子和以苏香为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与香菇产量超亲优势也存在极显著正相关,而杂交子和以野生46#、野生80#为来源的单核体亲本之间RAPD标记遗传距离与其相关不显著。     

ILK—整合素信号传导通路中的关键激酶

胸外基质与细胞的相互作用主要由整合素介导。由整合素介导的机械和生化信号调控胞浆激酶、生长因子受体、离子通道的活性并掏胞内肌动蛋白细胞骨架的组装。众多由整合素介导的信号传导通路最后可归于对细胞周期的调节、决定细胞存活或死亡、增殖或者退出细胞周期和分化。近年的研究发现,整合素连接激酶（inte-grin-linked kinase,ILK）在这些信号传导通路中具有关键作用。     

中国黄杨属植物数量分类的研究

本文采用系统聚类分析方法对中国黄杨属植物20种、3亚种和2变种进行了分类学研究,研究结果表明：营养器官的32个特征性状、繁殖器官的35个特征性状和总的67个特征性状的系统聚类结果与该属植物形态分类结果相吻合,从而为该属植物新分类群的建立,种、亚种和变种的鉴定以及某些划分不合理的种群纠正提供了一种新的科学依据和手段。     

外源化学物质对副溶血性弧菌药物敏感性的影响

【目的】细菌对抗生素的耐药性已成为全球公共卫生问题关注的热点。有研究表明外源添加化学物质可以增强耐药细菌对抗生素的敏感性。本研究比较了3种化学物质葡萄糖、丙氨酸、甘油对增强副溶血性弧菌抗生素敏感性的作用效果。【方法】在亚抑菌浓度抗生素胁迫条件下,通过比较副溶血性弧菌在添加终浓度为10 mmol/L葡萄糖、丙氨酸、甘油后细菌存活率随时间的变化水平,来观察弧菌对亚抑菌浓度抗生素敏感性作用效果的改变,并采用氧化磷酸化解偶联剂CCCP对实验结果进行验证。【结果】发现3种外源化学物质均能增强亚抑菌浓度氨基糖苷类抗生素对副溶血性弧菌的杀菌能力,其中外源添加葡萄糖对增强亚抑菌浓度卡那霉素的杀菌能力最为显著,而对其他种类抗生素的杀菌能力则无明显增强作用。加入氧化磷酸化解偶联剂CCCP后可消除由外源化学物质引发的弧菌抗生素敏感性作用增强的现象。【结论】通过调节细菌细胞代谢水平可提高耐药副溶血性弧菌对氨基糖苷类抗生素的敏感性,对多重耐药副溶血性弧菌的防控具有一定的实际应用价值。     

Autodock Vina与Discovery Studio在虚拟筛选耐药蛋白抑制剂中的比较

随着大量与细菌耐药相关的基因的发现和其表达蛋白结构的成功测定,从已有的化合物中通过计算机模拟方法筛选对耐药蛋白靶点有作用的候选化合物,成为了药物发现的一个标准途径。虚拟筛选在耐药基因抑制剂的发现中可以提高效率、降低实验成本。本文介绍了Autodock Vina和Discovery Studio在基于分子对接法的虚拟筛选中的使用,并对比分析其对β-内酰胺酶活性位点的筛选结果。希望通过这种比较促进虚拟筛选在药物设计领域中的应用,提高耐药基因抑制剂的发现速度。     

利用入境人员血清盘评价西尼罗病毒IgG抗体检测试剂盒北大核心CSCD

鉴于国内尚无明确的西尼罗病毒(West nile virus,WNV)感染病例报道,通过建立入境人员血清样品盘来评价自行研制西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA检测试剂盒。选择来自WNV感染区的入境人员血清286份,通过美国食品药物管理局(Food and drug administration,FDA)认证的FOCUS公司的West Nile Virus IgG Dxselect试剂盒以及Panbio公司的Dengue IgG Capture ELISA试剂盒筛选出评价用血清样品盘,平行比较评估自行研制的WNV IgG检测试剂盒结果,进一步对试剂盒的特异性,重复性和稳定性进行评价研究。结果显示,自行研制的试剂盒阳性检出率为35.6%,FOCUS West Nile Virus IgG Dxselect检测试剂盒则为32.5%,两者之间无统计学差异(χ2=3.05,P=0.078>0.05),并具有良好的一致性(Kappa=0.837 2);其中两者的阳性检出符合率为91.18%,阴性符合率为95.34%,总符合率为92.66%。研制的间接ELISA方法诊断试剂盒具有良好的特异性,稳定性和敏感性,检测效果与境外权威认证的商品化试剂盒基本一致,为我国防控西尼罗病毒等外来传染病入境提供技术储备,也为尚未传入的传染病免疫试剂盒评价方法提供了参考依据。     

结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响

目的研究结核分枝杆菌（MTB）ESAT6-CFP10融合蛋白对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。方法H37Rv菌株感染小鼠巨噬细胞后加入纯化的重组ESAT6-CFP10融合蛋白,通过透射电镜检测自噬体的形成。提取细胞总RNA和蛋白,以实时定量RT-PCR及Western blot方法检测自噬相关基因（atg）分子水平和蛋白表达水平。结果ESAT6-CFP10融合蛋白可抑制小鼠巨噬细胞自噬体的形成,并导致atg分子表达水平下降,其中atg8表达量下降最为明显。结论MTB ESAT6-CFP10融合蛋白通过调控atg分子表达水平影响小鼠巨噬细胞自噬功能。     

Smad3基因剔除的骨髓细胞移植对小鼠的影响

目的通过小鼠骨髓细胞剔除Smad3基因,观察小鼠病理变化以及免疫T细胞状态。方法将Smad3基因剔除Smad3-/-)的小鼠骨髓细胞和野生型(Smad3+/+)小鼠骨髓细胞分别移植给60Co射线照射GFP小鼠。观察骨髓移植后GFP小鼠体征变化,第6周处死小鼠,取肠道固定,HE染色观察其病理变化,流式细胞技术检测淋巴结中T细胞变化。结果移植Smad3-/-骨髓细胞的GFP小鼠逐渐消瘦,大肠出现炎症;淋巴结中活化型的CD4+CD62LloT细胞增多。结论骨髓细胞TGF-β信号受阻,可导致小鼠患炎症疾病,引起免疫T细胞活化。