激光联合康柏西普治疗糖尿病视网膜病变伴黄斑水肿的临床效果及机制研究

目的:探讨激光联合康柏西普治疗糖尿病视网膜病变伴黄斑水肿的临床效果及可能机制。方法:选取2017年1月至2017年12月我院收治的糖尿病视网膜病变伴黄斑水肿患者92例作为研究对象,随机分为观察组46例(46眼)及对照组46例(46眼)。对照组患者实施激光治疗,观察组在注射康柏西普1周后再进行激光治疗。比较两组患者治疗后的临床疗效,治疗前后最佳矫正视力(BCVA)、黄斑中心厚度(CMT)、血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及红细胞生成素(EPO)水平的变化。结果:治疗后,观察组的总有效率为91.30%,显著高于对照组(69.57%,P0.05);两组患者的BCVA均较治疗前明显提高(P0.05),CMT均低于治疗前(P0.05),但观察组BCVA较对照组更高(P0.05);CMT较对照组更低(P0.05)。治疗后,两组患者的VEGF、IGF-1、EPO均较治疗前明显降低,且观察组的VEGF、IGF-1、EPO均显著低于对照组(P0.05)。结论:激光联合康柏西普治疗糖尿病视网膜病变伴黄斑水肿的临床疗效显著优于单用激光治疗,并可有效改善VEGF、IGF-1、EPO水平,这可能对抑制血管新生产生积极作用。     

Rpf结构域及其突变体对MTB感染小鼠的免疫治疗作用

目的:观察复苏促生长因子Rpf结构域(Rpfd)及其突变体E54K (Rpfd1),E54A (Rpfd2)和E54K+ D48A (Rpfd3)对MTB感染小鼠的免疫治疗作用.方法:表达、纯化Rpfd及其突变体Rpfd1,Rpfd2和Rpfd3.结核毒株H37RV从尾静脉感染BALB/c小鼠,剂量为1× 105C F U.感染4w后,随机分为6组,在感染后4w、6w和8周分别腹部皮下注射含50 μg/ml相应蛋白Rpfd、Rpfd1、Rpfd2、Rpfd3的生理盐水,同时设异烟肼(INH,54.25 mg/L)联合利福平(RFP,52.5 mg/L)治疗组.在感染后11w和13w,分别取一侧肺脏计数荷菌数.将各时间点的感染小鼠另一侧肺脏固定后进行组织学观察.结果:表达产物均可与抗-Rpf结构域单抗特异性结合,相对分子量约为32 kDa.感染后11w和13w,Rpfd、Rp fd1、Rpfd2治疗组肺部荷菌量明显少于Rpfd3治疗组和生理盐水组(P＜0.05),但其对肺部MTB的控制未达到INH+RFP联合治疗的效果(P＜0.05).结论:MTB感染小鼠后,利用Rpfd蛋白进行免疫治疗,发现Rpfd及其突变体Rpfd1和Rpfd2蛋白能够显著的降低肺脏荷菌数,并且诱导淋巴细胞的增值.为利用Rpf结构域突变体制备MTB的免疫治疗疫苗提供了理论依据和实验基础.     

基于16S rDNA测序的自身免疫性甲状腺疾病患者肠道菌群研究CSCD

目的 探讨Graves病患者、桥本甲状腺炎患者及健康人的肠道菌群结构、多样性和丰度差异。方法 选取2020年8月至2020年12月于湖北省中医院甲状腺疾病诊疗中心就诊的新诊断且未经治疗的Graves病患者(GD组)、桥本甲状腺炎患者(HT组)各15例以及15例年龄、性别相匹配的健康受试者(健康对照组)。采集参与者粪便样本,采用16S rDNA高通量测序法分析肠道菌群,比较各组对象肠道菌群物种组成及丰度差异。结果 与健康对照组相比,GD组患者肠道菌群Sobs指数、Ace指数、Chao指数偏低,Coverage指数偏高(均P<0.05)。GD组与HT组以及HT组与健康对照组比较,其肠道菌群Sobs指数、Ace指数、Chao指数、Coverage指数差异均无统计学意义(均P>0.05)。3组对象肠道优势菌门为拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门、梭杆菌门。瘤胃球菌属、罗斯伯里菌属、罗姆布茨菌属、链球菌属等在3组对象中差异均有统计学意义(均P<0.05),其中GD组患者肠道乳杆菌目、链球菌属、链球菌科的相对丰度较高;HT组患者肠道瘤胃球菌属、消化链球菌科、消化链球菌—蒂氏菌目、罗姆布茨菌、梭菌科、严格厌氧梭状芽胞杆菌1、梭菌目的相对丰度较高;而罗斯伯里菌属、光冈菌属在健康对照组中丰度较高。GD组患者肠道中严格厌氧梭状芽胞杆菌1、Odoribacter、Phocea丰度低于HT组,而Streptococcus的丰度高于HT组(均P<0.05)。结论 Graves病患者、桥本甲状腺炎患者的肠道菌群与健康人群有显著差异,促进脂肪累积与能量吸收的菌群在Graves病患者中降低,而条件致病菌在自身免疫性甲状腺疾病患者中丰度增加,这些菌种变化可能通过破坏肠道稳态,干预免疫调节,促进炎症反应介导自身免疫性甲状腺疾病的发病。严格厌氧梭状芽胞杆菌1、Odoribacter、Phocea、链球菌属可能是Graves病和桥本甲状腺炎的关键差异菌属,但还需要进一步的研究以明确这些菌株介导疾病的机制。     

葛根中总黄酮的提取条件优化及含量测定

采用乙醇浸提法对葛根黄酮提取工艺进行研究,考察了提取温度、时间、乙醇浓度及固液比对葛根黄酮收率的影响,通过正交试验确定了葛根黄酮提取的最佳工艺条件,并采用紫外分光光光度法,以葛根素标准溶液为标样,测定了葛根中总黄酮的含量。实验结果表明,提取温度为70℃,固液比控制在1∶20,乙醇体积分数为80%,提取120min,葛根黄酮得率高达3.3%。在葛根黄酮检测方法的方法学考察中,平均回收率为97.5%,标准差与变异系数均较小,表明该测定方法精密度高,重现性好,可作为检测葛根中总黄酮含量的一种有效手段。     

结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6 和分泌蛋白 Hsp16.3 体外对人肝癌细胞HepG-2 的作用*

目的:探讨结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6及分泌蛋白Hsp16.3对人肝癌细胞HepG-2的作用。方法:将已构建的含3种目的基因的表达载体pProEXHTa-Ag85B-Hsp16.3、pProEXHTa-Ag85B-ESAT6和pProEXHTb-Hsp16.3,分别转入宿主菌E.coliDH5α中,诱导表达后分别获得Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6和Hsp16.3三种蛋白,采用Ni2+亲和层析柱进行纯化,并用透析方法进行目的蛋白的复性。复性的蛋白按照不同浓度和作用时间分别与肝癌细胞HepG-2反应,用MTT法检测细胞生长情况。结果:三种蛋白被成功纯化并复性。MTT数据统计分析显示,终浓度10μg/ml的三种蛋白对HepG-2细胞生长没有明显作用,当三种蛋白的终浓度分别为20、40、80μg/ml时均能够抑制HepG-2细胞的生长,并且抑制作用随着蛋白终浓度的增大以及作用时间的延长而增强。不同类别的蛋白抑制作用没有明显差别。结论:结核分枝杆菌的部分分泌蛋白能够抑制肝癌细胞HepG-2的生长。     

结核分枝杆菌肝素结合血凝素蛋白的表达、纯化及免疫学特性的初步研究

目的:克隆肝素结合血凝素(HBHA)基因,并在大肠杆菌中进行表达和纯化,利用获得的蛋白进行免疫学特性的初步研究.方法:用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增出HBHA基因片段,克隆至pMDI8-T载体中,序列测定正确后,将其亚克隆到表达载体pQE80L并在大肠杆菌DH5α中表达,表达蛋白经SDS-PAG及Western-blot分析后,亲和层析法纯化蛋白.获得的蛋白免疫BALB/c小鼠,测定血清抗体水平及IgG2a/IgG1比例.结果:克隆了HBHA基因,并成功表达该蛋白,SDS-PAGE及Western-blot分析表明表达产物正确.通过亲和层析法得到28kD纯化蛋白,与文献报道相符,诱导小鼠可使CD4+和CD8+细胞数明显增加.结论:成功获得了纯化的HBHA蛋白,明确了HBHA蛋白的免疫学特性,为进一步研究HBHA蛋白的致病机理及新型疫苗的开发提供了实验依据.     

结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16．3、Ag85B-ESAT6和分泌蛋白Hspl6．3体外对人肝癌细胞HepG-2的作用

目的：探讨结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hspl6．3、Ag85B-ESAT6及分泌蛋白Hspl6-3对人肝癌细胞HepG-2的作用。方法：将已构建的含3种目的基因的表达载体pProEXHTa-Ag85B-Hspl6．3、pProEXHTa-Ag85B-ESAT6和pProEXHTb-Hspl6．3,分别转入宿主菌EcoliDH5α中,诱导表达后分别获得Ag85B-Hspl6．3、Ag85B-ESAT6和Hspl6．3三种蛋白,采用Ni^2＋亲和层析柱进行纯化,并用透析方法进行目的蛋白的复性。复性的蛋白按照不同浓度和作用时间分别与肝癌细胞HepG-2反应,用MTT法检测细胞生长情况。结果：三种蛋白被成功纯化并复性。MTT数据统计分析显示,终浓度101xg／ml的三种蛋白对HepG-2细胞生长没有明显作用,当三种蛋白的终浓度分别为20、40、801μg／ml时均能够抑制HepG-2细胞的生长,并且抑制作用随着蛋白终浓度的增大以及作用时间的延长而增强。不同类别的蛋白抑制作用没有明显差别。结论：结核分枝杆菌的部分分泌蛋白能够抑制肝癌细胞HepG-2的生长。     

Hsp65与IL-2融合蛋白诱导小鼠细胞免疫应答及保护力

目的研究Hsp65与hIL-2的融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法在大肠杆菌中诱导表达Hsp65与hIL-2的融合蛋白,通过Ni-NTA亲合柱纯化后的蛋白经鉴定后,与佐剂DDA和MPL联合免疫小鼠,连续免疫3次,每次间隔2周,最后一次免疫结束后两周,分离5只小鼠脾淋巴细胞,测定淋巴细胞增殖指数,IFN-γ和IL-2水平,以及特异性淋巴细胞杀伤功能,其余5只免疫小鼠用于MTB毒株攻击实验。结果获得融合蛋白可分别与抗Hsp65和抗hIL-2的单抗发生特异性反应。融合蛋白免疫小鼠后,小鼠脾淋巴细胞被有效活化,诱导产生的-γIFN和IL-2的水平以及CTL杀伤功能均显著高于BCG和单纯Hsp65免疫组（P〈0.05）。融合蛋白免疫组可有效抵抗MTB毒株攻击,脾脏细菌数显著减少（4.36±0.48）,提供的保护力与BCG相当（4.30±0.53）。结论Hsp65与hIL-2的融合蛋白是一种有效的亚单位疫苗,可用于TB的预防。     

三峡库区松材线虫病扩张速度对人为活动的响应

松材线虫病是我国森林重要的检疫性病害,除自然媒介天牛传播,人为因素介导的传播在松材线虫病扩散和蔓延中起着至关重要的作用。选择在我国松材线虫病的重点发生区域三峡库区,研究马尾松林景观格局和以人为活动强度为主要因子的松材线虫病扩散规律,尝试揭示松材线虫病扩散机制。结果显示三峡库区的疫点数在近年有上升趋势,各地区发病率得到一定控制;在疫区和非疫区,马尾松林斑块聚合度最大的是非疫区的大渡口,为98.6406;斑块分离度最大的是非疫区的秭归,为0.9318;方差分析结果显示马尾松林景观格局和松材线虫病之间没有相关性。进一步研究了松材线虫病和人为活动强度的联系,结果显示松材线虫病发病率和地区路网密度、人口总量具有较强的相关性,和地区GDP、货运周转量相关性小。宜昌的松材线虫病发病率和路网密度的相关系数为0.985,和人口总数的相关系数为0.866;重庆的松材线虫病发病率和路网密度相关系数为0.924,和人口总数相关系数为0.999;其次基于路网密度和人口总数,对三峡库区松材线虫病疫情在未来十年进行了预测,结果显示随着路网密度和人口总数的扩增,宜昌松材线虫病也将呈现逐步增大的趋势,R~2值为0.919和0.637;重庆发生趋势一致,R~2值为0.976和0.992。     

化合物ADMET性质预测平台的构建

在药物研发早期阶段对化合物成药性和安全性进行评估,对于提高药物研发成功率、降低研发成本具有十分重要的意义。为了能够帮助药物研究工作者快速准确地判断候选化合物的成药性与安全性,开发了一个基于计算机方法的化合物ADMET性质预测平台。首先,通过文本挖掘的方法收集了化合物药代动力学性质和毒性(ADMET)的高质量实验数据。然后,根据原始文献复原了13个预测模型,同时采用支持向量机方法自建了15个具有较高预测能力的计算模型。最后,基于分布式架构,结合高性能计算集群优势,开发了化合物ADMET性质预测平台(http://www.vslead.com/?r=admet/index),用于预测28种重要的化合物ADMET性质。研究者可以使用这一平台快捷方便地对药物研究中比较重要的ADMET性质进行预测,在药物研发早期对候选化合物进行成药性评价和风险评估,有助于提高药物研的成功率,节省研发时间和经费的投入。