肠道病毒71型安徽、河南株的分离与VP1序列进化分析

旨在研究手足口病患者中肠道病毒71型分离株的病毒基因型特征。采集手足口病患者的粪便标本,进行病毒分离和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)特异性扩增进行鉴定,同时选取其中9株EV71分离株,对其抗原决定簇部位VP1区进行核酸序列测定,并参考EV71 A、B、C各基因型的参考株和以往中国EV71的分离株进行同源分析和构建系统发生树。结果显示,所分析的9株病毒株均为C4亚型,3株安徽株H7、H8和H9的VP1序列相似度很高(≥98.8%,其中H7、H9的相似度为100.0%),4株河南株H3、H4、H5和H6相似度较高(≥98.4%,H3、H4和H5≥99.6%,其中H3、H4的相似度为100.0%),它们同河南株H1、H5的相似度也较高(≥97.2%),河南株H2虽然与其他河南株具有较高的序列相似度,但进化分析表明,其与安徽株同源性较高。结果表明,安徽株H7、H8和H9株变异速率明显加快,这可能导致了手足口病在安徽省的率先爆发与大流行,河南株H2最初可能由安徽传入河南。     

荧光定量PCR法检测重组汉逊酵母中HBsAg基因的拷贝数

重组汉逊酵母基因中外源基因拷贝数是影响目的基因表达水平和检测传代稳定性的重要因素,因此外源基因拷贝数的检测成为研究和分析重组基因的重要内容.利用快速、灵敏的荧光定量PCR法检测外源基因HBsAg拷贝数,以Mox基因为内源参照基因,通过梯度稀释法,建立了Mox基因和HBsAg基因的循环数(Ct值)与起始模板数的相关标准曲线,其相关系数分别达到0.9996和0.9982.通过比较目的基因HBsAg和内源参照基因Mox在同一荧光强度下出峰的循环数,获得了目的基因HBsAg在重组汉逊酵母中的拷贝数为39.发酵前后HBsAg基因在重组汉逊酵母中稳定存在,发酵前后拷贝数相差均小于6.2%.本方法快速、简便、准确,可以满足基因拷贝数检测的需要.     

利用入境人员血清盘评价西尼罗病毒IgG抗体检测试剂盒北大核心CSCD

鉴于国内尚无明确的西尼罗病毒(West nile virus,WNV)感染病例报道,通过建立入境人员血清样品盘来评价自行研制西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA检测试剂盒。选择来自WNV感染区的入境人员血清286份,通过美国食品药物管理局(Food and drug administration,FDA)认证的FOCUS公司的West Nile Virus IgG Dxselect试剂盒以及Panbio公司的Dengue IgG Capture ELISA试剂盒筛选出评价用血清样品盘,平行比较评估自行研制的WNV IgG检测试剂盒结果,进一步对试剂盒的特异性,重复性和稳定性进行评价研究。结果显示,自行研制的试剂盒阳性检出率为35.6%,FOCUS West Nile Virus IgG Dxselect检测试剂盒则为32.5%,两者之间无统计学差异(χ2=3.05,P=0.078>0.05),并具有良好的一致性(Kappa=0.837 2);其中两者的阳性检出符合率为91.18%,阴性符合率为95.34%,总符合率为92.66%。研制的间接ELISA方法诊断试剂盒具有良好的特异性,稳定性和敏感性,检测效果与境外权威认证的商品化试剂盒基本一致,为我国防控西尼罗病毒等外来传染病入境提供技术储备,也为尚未传入的传染病免疫试剂盒评价方法提供了参考依据。     

硬脂酸修饰辣根过氧化物酶的制备及其主要特性研究

一种修饰ＨＲＰ的方法。用硬脂酸修饰的ＨＲＰ对温度、ｐＨ、蛋白质变性剂及蛋白酶水解的稳定性比天然的ＨＲＰ有不同程度的增强     

人肝金属硫蛋白-I_A基因在鱼腥藻中的克隆与表达

将人工合成的人肝金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ,简称ＭＴ）－ＩＡ基因插入至中间载体ｐＲＬ－４３９上强启动子ｐｓｂＡ后,再将其与穿梭载体ｐＫＴ－２１０相连,得到大肠杆菌－蓝藻穿梭表达载体ｐＫＴ－ＭＴ,用三亲接合转移法将ｐＫＴ－ＭＴ转入丝状体蓝藻－鱼腥藻７１２０,经链霉素筛选,得到了稳定的转人肝ＭＴ－ＩＡ基因鱼腥藻．纯化单藻落,液体扩大培养．从鱼腥藻中提取的质粒经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析,确定人肝ＭＴ－ＩＡ基因已转入鱼腥藻７１２０中,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析表明,金属硫蛋白在转人肝ＭＴ－ＩＡ基因鱼腥藻中得到了表达．经原子吸收光谱法测定表达量约为７００μｇＭＴ／ｇ鲜藻,重金属耐受性实验表明,得到了能耐受重金属－镉的转人肝ＭＴ－ＩＡ基因鱼腥藻,它将在清除水域中重金属污染和医药研究方面发挥重要作用．     

不同高梁品系的淀粉糊化特征

利用差示扫描量热分析仪（DSC）和淀粉快速黏度分析仪（RVA）测定了14个高粱（Sorghumbicolor）品系的直链淀粉含量和淀粉糊化特性参数,并分析了各特征参数的变化规律及其相互关系。研究结果表明,高粱品系间直链淀粉含量存在较大差异,变幅为0．29％-29．45％;DSC分析所得糊化特性也表现出一定的差异,直链淀粉含量低的高粱品系的起始温度（To）、峰值温度（Tp）、终止温度（Tc）和热焓变化（△H）都较高：而直链淀粉含量高的高粱品系的To、Tp、Tc和△H都相对较低。不同品系的RVA谱差异主要表现在各个黏滞性特征值上,直链淀粉含量低的高粱品系的RVA谱具有较高的峰值黏度和最高的消减值：而直链淀粉含量高的高粱品系具有较低的峰值黏度。相关分析表明,直链淀粉含量和膨胀势与其它特征值间的相关性均达显著水平：峰值黏度（PV）与最终黏度（FV）、回冷恢复值、糊化时间和糊化温度间呈极显著负相关,与崩解值和消减值则呈极显著正相关。将直链淀粉含量的选择与RVA谱测定相结合,有助于提高选择的准确率,进而为高粱品质改良和育种提供理论依据。     

利用入境人员血清盘评价西尼罗病毒IgG抗体检测试剂盒

鉴于国内尚无明确的西尼罗病毒(West nile virus,WNV)感染病例报道,通过建立入境人员血清样品盘来评价自行研制西尼罗病毒IgG抗体的间接ELISA检测试剂盒。选择来自WNV感染区的入境人员血清286份,通过美国食品药物管理局(Food and drug administration,FDA)认证的FOCUS公司的West Nile Virus IgG Dxselect试剂盒以及Panbio公司的Dengue IgG Capture ELISA试剂盒筛选出评价用血清样品盘,平行比较评估自行研制的WNV IgG检测试剂盒结果,进一步对试剂盒的特异性,重复性和稳定性进行评价研究。结果显示,自行研制的试剂盒阳性检出率为35.6%,FOCUS West Nile Virus IgG Dxselect检测试剂盒则为32.5%,两者之间无统计学差异(χ2=3.05,P=0.0780.05),并具有良好的一致性(Kappa=0.837 2);其中两者的阳性检出符合率为91.18%,阴性符合率为95.34%,总符合率为92.66%。研制的间接ELISA方法诊断试剂盒具有良好的特异性,稳定性和敏感性,检测效果与境外权威认证的商品化试剂盒基本一致,为我国防控西尼罗病毒等外来传染病入境提供技术储备,也为尚未传入的传染病免疫试剂盒评价方法提供了参考依据。     

不同高粱品系的淀粉糊化特征

利用差示扫描量热分析仪(DSC)和淀粉快速黏度分析仪(RVA)测定了14个高粱(Sorghum bicolor)品系的直链淀粉含量和淀粉糊化特性参数, 并分析了各特征参数的变化规律及其相互关系。研究结果表明, 高粱品系间直链淀粉含量存在较大差异, 变幅为0.29%–29.45%; DSC分析所得糊化特性也表现出一定的差异, 直链淀粉含量低的高粱品系的起始温度(T_o)、峰值温度(T_p)、终止温度(T_c)和热焓变化(ΔH)都较高; 而直链淀粉含量高的高粱品系的T_o、T_p、T_c和ΔH都相对较低。不同品系的RVA谱差异主要表现在各个黏滞性特征值上, 直链淀粉含量低的高粱品系的RVA谱具有较高的峰值黏度和最高的消减值; 而直链淀粉含量高的高粱品系具有较低的峰值黏度。相关分析表明, 直链淀粉含量和膨胀势与其它特征值间的相关性均达显著水平; 峰值黏度(PV)与最终黏度(FV)、回冷恢复值、糊化时间和糊化温度间呈极显著负相关, 与崩解值和消减值则呈极显著正相关。将直链淀粉含量的选择与RVA谱测定相结合, 有助于提高选择的准确率,进而为高粱品质改良和育种提供理论依据。     

豆甾醇与琥珀酸酐单酯化反应工艺及动力学研究

研究了甲苯为溶剂,吡啶为催化剂,豆甾醇与琥珀酸酐的酯化反应工艺和反应动力学。探讨了反应温度、催化剂吡啶用量、反应物的摩尔配比和反应时间对酯化反应结果的影响。实验结果表明:豆甾醇与琥珀酸酐的反应产物为豆甾醇琥珀酸单酯;当吡啶的体积分数为1.5%,反应物的摩尔比为1.0∶1.6,回流下反应20 h后,豆甾醇的酯化率大于97%,反应后的溶液经蒸发回收溶剂甲苯,固体产物分别经乙醇和水洗涤除杂,所得固体在60℃下真空干燥至恒重,得到的豆甾醇琥珀酸单酯的单程收率大于86%。单酯化反应满足二级不可逆反应动力学规律,反应的活化能为85 kJ/mol。     

昆虫抗冻蛋白: 规则结构适应功能

抗冻蛋白在环境温度低于体液熔点时能够结合到生物体内的冰核表面,通过限制冰核生长和抑制冰晶重结晶而保护有机体免受结冰引起的伤害。与其他生物抗冻蛋白比较,昆虫抗冻蛋白有很强的活性,结构上具有显著特征,如一级结构规律重复,超二级结构为β-螺旋,可与冰晶发生相互作用,具有TXT基序等。该文综述了近年来关于昆虫抗冻蛋白的结构以及分子生物学等方面研究的新进展,讨论了其结构与功能的关系。