Tw近交系小鼠的遗传鉴定和罕见基因分析

目的通过等位基因酶的生化多态性可以发现小鼠DNA的序列多态性,为人类疾病基因鉴定和动物实验的研究提供丰富的动物基因库,为科研工作提供宝贵资源。方法应用国产生化标记检测试剂盒,采用遗传生化检测方法,对天津市卫生防病中心自主培育的近交系小鼠进行Akp-1(碱性磷酸酶-1)等二十五个生化位点标记基因检测。结果经检测发现TW(Tianjin wild)小鼠在Amy1(淀粉酶-1),Es2(酯酶-2),Es3(酯酶-3),Es10(酯酶-10),Gpd1(葡萄糖磷酸脱氢酶-1),Hbb(血红蛋白β链),Np1(核苷酸磷酸化酶-1),Pgm2(磷酸葡萄糖变位酶-2)共八个生化位点发现罕见基因。结论检测国内新品系的遗传生化基因位点,发现罕见基因型。     

犬用钩端螺旋体抗体ELISA检测实验研究

通过对犬用钩端螺旋体病(钩体)ELISA检测方法的研究,建立了犬用ELISA钩体抗体检测方法。实验的最佳方案:包被抗原蛋白质含量为20μg/mL,酶结合物稀释度为1∶10 000,检测血清稀释度为1∶160。经10份犬免疫血清验证,均为阳性。此研究为犬用钩体抗体检测提供了一种简便快速的方法,具有重要的实用价值。     

长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒（MHV）S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果建立的MHVRT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHVRNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3．1pg／μL,可检测病毒最小滴度为10^-3／mL。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT．PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97％。结论建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。     

利用荧光定量PCR分析c-Ha-ras基因在C57-ras转基因小鼠中的拷贝数

目的:利用real-time PCR建立检测C57-ras转基因小鼠中外源c-Ha-ras基因拷贝数的简便方法,为药物安全性评价C57-ras转基因小鼠模型的繁殖和筛选提供数据支持。方法:以自建的人原癌基因c-Ha-ras转基因小鼠为研究对象,利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR的绝对定量法测定3个C57-ras转基因小鼠系的c-Ha-ras基因Ct值,通过与内参基因GAPDH比较计算获得转基因的拷贝数。结果:内参基因GAPDH的标准曲线为lg NGAPDH=-2.852Ct+26.236,外源基因c-Ha-ras的标准曲线为lg NRAS=-3.068Ct+39.186;经计算,NO.2、NO.3、NO.5系的F6代拷贝数分别为4、4和3,并且系内不同个体间拷贝数一致。结论:利用SYBR GreenⅠreal-time PCR技术建立了检测C57-ras转基因小鼠中外源基因拷贝数的方法,该方法操作简单,节约成本,为C57-ras致癌性模型的选留和应用提供了基础和技术手段,也为其他类似转基因品系中转基因拷贝数的确定提供了一种参考方法。     

猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究

目的　建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法　采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果　HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论　建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。     

模式小鼠总DNA三种提取方法比较

目的：建立简便、快捷、经济的模式小鼠总DNA提取方法,以快速鉴定大批量模式小鼠基因型。方法采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA,对比DNA纯度、得率、耗费时间,并比较基因型鉴定结果。结果苯酚抽提法得率最高,异丙醇沉淀法最低;而纯度则按照苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序递减;在耗时上鼠耳煮沸法最短。三种方法提取的DNA均可做模版用于基因型鉴定。结论鼠耳煮沸法操作简单、成本最低,快速、基因型鉴定结果可靠,可用于规模化的基因型鉴定实验中。     

实验用生物样品的啮齿类微生物污染的检测管理

实验用生物样品在生物医学研究中有着广泛的应用.生物样品的微生物污染可危及实验动物设施的生物安全以及对动物实验研究造成负面影响.因此在将生物样品接种到啮齿类动物之前,要对其进行检测以确保无啮齿类动物传染性病原体的污染.因为检测技术和经济上的限制和局限性,不可能对所有的啮齿类动物传染性病原都进行检测.本文依据科学文献、笔者的经验以及专家的意见,尝试着去阐述如何建立一个有效可行的生物样品微生物污染检测计划.笔者建议对一些重要的微生物进行检测,并简要综述了选取这些微生物的理由即它们对科研、实验动物生物安全以及职业健康安全的影响.     

Southern杂交方法用于近交系小鼠H-2基因检测

目的建立一种简便、快捷、准确的检测方法用于近交系小鼠的遗传检测。方法根据近交系小鼠的H-2基因序列设计相应的探针,并标记生物素,利用微孔板Southern杂交技术,使探针与模板DNA杂交,再加入亲和素标记的辣根过氧化物酶进行酶显色反应,通过酶标仪检测杂交结果,以确定近交系小鼠的基因型。结果57BL／6和C57B：／10为H-2^b型;DBA／2和Scid为H-2^d型;615和C3H为H-2^k型;NCPC／2、TA1、TA2和T739均为H-2^b型。结论通过Southern杂交检测可以确定近交系小鼠的基因型。该检测方法简便、易行,检测结果客观,可以应用于近交系小鼠的遗传检测。