猴腺病毒研究进展

猴腺病毒（simian adenovirus,SAdV）是猴类呼吸道和消化道的常在病毒之一,可引起肺炎、咽炎、肠胃炎、结膜炎等以粪口途径传播为主,主要感染猕猴、非洲绿猴、黑猩猩和狒狒等[1]属腺病毒科,哺乳动物腺病毒属。有学者认为SAdV感染有严格的种属特异性,也有报道认为其种间交叉传播在非人灵长类中可能普遍发生,是动物传染病似的感染。SAdV是否感染人类尚未见报道,但已从猴的分泌物中发现了可能和人腺病毒（humanadenovirus,HAdV）发生重组的新型腺病毒。SAdV与HAdV亲缘关系很近,感染引起的临床症状也相似,是人腺病毒研究的理想模型。目前已经制定了研发猴腺病毒模型的目标,用于研究感染机制,促进腺病毒基因治疗和疫苗开发进程[3]。但猴腺病毒自然感染流行情况的研究依然很少。本文将就SAdV的发现与分类、生物学特性、感染特点及检测方法做一综述,为研究者提供一些有用参考。     

实验犬布氏杆菌的多重PCR检测与分型鉴定

目的建立实验犬及相关生物制品布氏杆菌的多重PCR检测与分型鉴定方法。方法选择布氏杆菌Omp2基因同源性较高的区域设计引物对布氏杆菌进行多重PCR扩增,扩增结果一致的样本进行酶切以区分不同型,同时进行序列测定,以确定该方法的准确性;然后验证该方法的特异性和敏感性。结果成功扩增得到目的条带,并通过酶切区分五种布氏杆菌;PCR产物与布氏杆菌DNA序列同源性达到99%,并验证了该方法的检测结果。实验结果证明该方法特异性较好,灵敏性为1.8×10^-7μg/mL。结论成功建立布氏杆菌多重PCR检测与分型鉴定方法,所建立的方法特异性好,灵敏度高。本研究对保证实验犬群的质量,保护饲养人员、实验人员的身体健康具有重要意义。     

北京地区猫疱疹病毒Ⅰ型的分离及鉴定

了解北京地区猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)毒株特点,为猫疱疹病毒Ⅰ型的进一步研究及对猫的感染预防控制奠定基础。经特异性PCR检测为FHV-1阳性临床猫眼鼻拭子,经过处理,接种CRFK细胞,通过细胞培养分离病毒。通过间接免疫荧光试验、电镜形态观察、病毒毒力测定及基因序列分析等对分离株进行鉴定。PCR检测FHV-1阳性的14只猫眼鼻拭子接种CRFK细胞,有6只猫样本能使CRFK细胞发生圆缩、拉网集聚等病变;6个样本接种的CRFK病变细胞滴片进行免疫荧光试验,均产生绿色荧光反应;经传代培养,有5株分离株能够稳定传代,其中有2株弱毒,3株强毒;电镜下5株分离株均可见直径100~160nm的球型病毒粒子;5株分离株与FHV-1标准株C-27及2个不同公司来源疫苗株gB、gD基因核苷酸比较同源性均为99%以上。实验室成功分离保存5株能稳定传代的FHV-1毒株,5株分离株与FHV-1标准株及2个疫苗株亲缘关系很近。     

应用脾内直接免疫法制备鼠痘病毒单克隆抗体

采用脾内直接免疫法和杂交瘤技术获得５株杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养上清液和腹水中单克隆抗体效价分别为１∶８～６４和１０－３～１０－４（ＥＬＩＳＡ）。与其他１０种鼠源性病毒和ＢＨＫ２１细胞无非特异性反应。与传统免疫方法相比较,即节省了抗原、缩短了免疫时间,又可避免因免疫抗原致病性强而导致动物死亡的缺点,是一种具有实际应用的免疫方法。     

实验用小型猪呼吸道支原体检测及方法比较

目的通过常用的三种不同方法对支原体的检测,了解实验用小型猪支原体感染情况,为今后实验用小型猪支原体检测方法国家标准的制定提供参考。方法采用培养法、PCR和ELISA方法分别对20头小型猪的气管、肺和血清进行检测。结果三种检测方法中,PCR方法支原体阳性检出率为15%,ELISA方法为20%,而培养法结果均为阴性。结论目前在普通级小型猪中存在支原体的感染。检测方法中PCR和ELISA方法较培养法更省时,敏感性更高。     

呼肠孤病毒Ⅲ型（Re03）RT—PCR检测方法的建立

目的建立呼肠孤病毒Ⅲ型（Re03）RT—PCR检测方法,应用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Re03的检测。方法根据已发表的呼肠孤病毒Ⅲ型（Re03）M1基因序列,设计合成引物。提取Re03细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、重复性试验。结果建立的Re03RT—PCR检测方法特异、敏感、稳定。以Re03RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为0．42pg／μL,可检测病毒最小滴度为10^-9／mL。结论建立的呼肠孤病毒Ⅲ型（Re03）RT—PCR检测方法可用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Re03的检测。     

绿脓杆菌分子分型方法研究进展

绿脓杆菌是一种常见的人畜共患机会致病菌,广泛存在于自然界,是造成实验动物污染和医院内感染的重要病原菌之一。分子分型方法是病原菌流行病学分析的重要手段,对于确定感染来源和途径,检测交叉污染和流行菌株方面非常有效。本文主要对绿脓杆菌分子分型方法的研究进展进行综述。     

猴腺病毒GD株的分离与鉴定

目的 体外分离出猴腺病毒(simian adenovirus,SAdV)毒株,并对其进行鉴定,为SAdV的生物学特性、致病机制和诊断试剂等方面的研究提供基础.方法 采用PCR法对猕猴粪便样本进行SAdV筛查,将PCR检测为阳性的样本处理后接种BSC-1细胞,盲传3代后用PCR扩增测序并负染色电镜观察.结果 从广东地区食蟹猴粪便样本中成功分离出一株SAdV,细胞病变明显,PCR检测呈阳性,电镜下可观察到典型腺病毒样形态的病毒粒子,命名为GD株.经测序鉴定,发现GD株属HAdV-G亚属,与SAdV-1进化发生距离最近.结论 GD株的分离成功,使猴腺病毒基因转移载体的构建成为可能,有助于猴腺病毒替代载体的发展.     

雌雄金黄地鼠血液生理生化指标的比较分析

目的测定金黄地鼠的血液生理生化参考值,并对两性的参考值进行比较。方法将88只4周龄金黄地鼠,80只8周龄金黄地鼠,采血后,用日本光电MEK-7222K血球分析仪测定血液生理指标,用Olympus AU400全自动生化分析仪测定血清生化指标。结果4周龄金黄地鼠血液生理指标中RBC、HGB、HCT、MCV和RDW性别差异有显著性（P〈0.05）,而WBC、MCH、MCHC、PLT、PCT、MPV和PDW等性别差异无显著性（P〉0.05）;4周龄金黄地鼠血清生化指标中ALB、ALP、GLU、CA、P、CHO和TG性别差异有显著性（P〈0.05）,而ALT、AST、TP、BUN和CREA等性别差异无显著性（P〉0.05）。8周龄金黄地鼠血液生理指标中WBC、LYM、MON、BAS、LYM％、NEUT％、MCH、RBC、HGB、HCT、MCV、PDW和RDW性别差异有显著性（P〈0.05）,而MCHC、PLT、MPV、PCT、NEUT、EOS、BAS、MON％和EOS％等性别差异无显著性（P〉0.05）;8周金黄地鼠血清生化指标中ALT、ALB、BUN、GLU、CREA、P、CHO和TG性别差异有显著性（P〈0.05）,而AST、TP、ALP和CA等性别差异无显著性（P〉0.05）。结论金黄地鼠血液的生理生化值受多种因素影响,部分指标两性问测定值有差异,但多数指标差异不显著。     

乙型脑炎病毒（JEV）ELISA检测方法的建立

目的建立猪乙型脑炎病毒（JEV）抗体ELISA检测方法。方法培养BHK21细胞,接种JEV病毒,制备BHK21正常抗原和JEV特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验。结果正常、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.2μg/mL、10μg/mL和1∶20000;正常、特异抗原批内变异系数分别为8.3%和6.4%,批间平均变异系数分别为9.7%和11.5%;检测灵敏度为1∶1280;与猪瘟病毒（CSFV）、猪细小病毒（PPV）均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强。可用于猪JEV抗体的检测。