两个NIH小鼠种群对不同种类的乙肝疫苗免疫应答效应的比较

目的比较两种不同的NIH小鼠种群基因组DNA中H-2q单倍型的百分比,对重组基因乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）、重组基因乙型肝炎疫苗（CHO）、重组基因乙型肝炎疫苗（汉逊酵母）和治疗性乙型肝炎疫苗（乙克）免疫应答的影响。方法检测乙肝疫苗免疫效力用酶标法,测定乙肝疫苗的ED50值,再通过微量细胞毒法和PCR方法检测小鼠的H-2单倍型,计算不同品系小鼠H-2q的百分数,得出乙肝疫苗与不同动物种群的相关性。结果经验证,经1号NIH小鼠检测结果证实,重组基因乙型肝炎免疫效力依次为CHO〉汉逊〉酿酒,疗性乙型肝炎疫苗（乙克）效力检测合格,但经2号NIH小鼠检测结果显示除CHO疫苗合格外,其他三种疫苗检测结果均为不合格。基因检测结果为,1号种群NIH鼠含有H-2q型基因的百分比是96%,而2号种群NIH小鼠含有H-2q型基因基因百分比为30%,因此不同的q型基因百分比导致了不同的检测结果。结论根据本研究结果表明虽然NIH鼠的H-2单倍型中有q型基因,但不同来源的小鼠种群之间会存在差异,经不同的环境饲养后,小鼠的基因会发生不同的变化,因此在进行生物制品检定时,要注意不同品系小鼠及同一品系小鼠不同种群之间的差异对试验本身的影响。建立一种＂动物免疫＂的概念。     

不同品系大鼠RTI基因抗原表达数量的研究

目的研究不同品系大鼠RT1A、RT1B和RT1D基因表达的抗原总数量,以及在CD4＋T细胞和CD8＋T细胞上表达的数量,为免疫学研究提供数据支持。方法采集四种品系BN、Lewis、F344、SHR大鼠的静脉血,制备淋巴细胞,与有荧光标记的单克隆抗体反应,应用流式细胞术检测抗原数量。结果发现RT1A、RT1B和RT1D基因表达的抗原在不同品系大鼠体内表达的数量不同,其中F344大鼠表达的RT1A抗原最多,BN大鼠表达的RT1B抗原和RT1D抗原均为最多。RT1A、RT1B和RT1D基因表达的抗原在CD4＋T细胞和CD8＋T细胞上表达的数量也不同,Lewis大鼠在CD4＋T细胞上表达的RT1A抗原最多,BN大鼠在CD4＋T细胞上表达的RT1B和RT1D抗原最多。F344大鼠在CD8＋T细胞上表达的RT1A抗原最多;F344大鼠在CD8＋T细胞上表达的RT1B和RT1D抗原最多。同一品系大鼠之间雌雄动物RT1A、RT1B和RT1D基因表达的抗原也不同。结论不同品系大鼠RT1A、RT1B和RT1D基因的抗原总表达数量之间差异有显著性,在CD4＋T细胞上和CD8＋T细胞上表达的数量差异也有显著性。     

近交系小鼠H-2基因的PCR检测方法

目的建立快速、灵敏、简便的H-2基因检测方法。方法针对近交系小鼠的H-2D区和H-2K区序列,设计两对特异性引物,分别进行DNA扩增,扩增产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,确定H-2基因型。结果通过PCR反应扩增小鼠H-2D区和H-2K区的基因产物,可以区分不同的近交系小鼠的H-2基因型,进而可以区分出不同品系的近交系小鼠。结论利用分子生物学方法进行近交系小鼠遗传学检测,弥补了过去各种方法的不足,并且PCR方法还具备快速、简便、成本低廉、便于普遍推广并易于和国际接轨等优点。所以通过PCR方法可以进行小鼠H-2基因型检测。     

Southern杂交方法用于近交系小鼠H-2基因检测

目的建立一种简便、快捷、准确的检测方法用于近交系小鼠的遗传检测。方法根据近交系小鼠的H-2基因序列设计相应的探针,并标记生物素,利用微孔板Southern杂交技术,使探针与模板DNA杂交,再加入亲和素标记的辣根过氧化物酶进行酶显色反应,通过酶标仪检测杂交结果,以确定近交系小鼠的基因型。结果57BL／6和C57B：／10为H-2^b型;DBA／2和Scid为H-2^d型;615和C3H为H-2^k型;NCPC／2、TA1、TA2和T739均为H-2^b型。结论通过Southern杂交检测可以确定近交系小鼠的基因型。该检测方法简便、易行,检测结果客观,可以应用于近交系小鼠的遗传检测。