动物气味的顶空取样技术及其在水貂肛腺成分分析中的应用

我们设计了一种用于动物气味的顶空 (headspace)取样装置 ,并结合溶剂解吸附和气质联用技术 ,通过对水貂 (Mustelavision)肛腺分泌物的挥发性成分的分析验证这种装置的可行性。出现 5个气谱峰 ,对应的质谱显示其分子量和分子式依次为峰 1:10 2 (C5H10 S)、峰 2 :10 4(C5H12 S)、峰 3:10 2 (C5H10 S)、峰 4:136(C5H12 S2 )和峰 5 :134 (C5H10 S2 )。峰 1、峰 3和峰 5分别为以前研究所鉴定出的 3种主要成分 :2 ,2 二甲基硫代环丁烷、2 乙基硫代环丁烷和 3,3 二甲基 1,2 二硫代环戊烷 ,2 ,2 二甲基硫代环丁烷为优势成分 ,组成无性别间差异。这些结果与以前研究一致 ,说明了这种顶空取样装置的可靠性。峰 2和峰 4两种成分以前在水貂肛腺中未曾发现 ,初步分析可能分别为 3 甲基 1 丙基硫醇和 1,5 戊二硫醇。尽管这两个成分有待进一步分析确定 ,但可以肯定分子量为 10 4和 136的成分不仅在水貂肛腺分泌物中没有发现过 ,而且在已经研究过的鼬属动物和食肉类的肛腺中都未发现过 ,能检测出更多的成分 ,说明这种方法的可靠性很高。     

虎刺花外蜜腺的发育解剖学研究

应用扫描电镜、石蜡制片及组织化学技术对虎花外蜜腺的形态,结构及发育过程中结构及多糖变化进行了较为系统的研究,结果表明,虎刺花外密腺位于状花序外的总苞顶部5枚随圆形裂端,属于总苞上的密腺,由分泌表皮,产蜜组织和主要由韧皮部筛管组成的维管束构成,虎刺花外蜜腺起源于总苞裂片顶端表面的4－5层原始细胞,根据蜜腺结构特点及多糖变化分析,原蜜汁的贮存及多糖的降解主要在产蜜组织细胞中进行,而分泌表皮细胞则是原蜜汁的加工及蜜汁的合成与分泌的主要场所。     

N-乙酰氨基葡萄糖残基在发育鼠胃底腺颈粘液细胞中的表达

目的 通过大鼠在不同发育阶段中胃底腺细胞表达α-N-乙酰氨基葡萄糖（GluNAc)残基的情况,来研究大鼠胃底腺颈粘液细胞的发生。方法 利用单克隆抗体HIK1083能特异性识别α-GluNA残基的特点,进行免疫组化研究。结果 HIK1083阳性细胞从第19.5天胚胎鼠的胃底腺中开始辨认出来,一直存在至成鼠,这些细胞最初出现在胃底腺的底部,然后向上方移动,最后位于腺体的颈部。结论 胚胎晚期开始表达α-GluNAc残基的细胞可能是原始的颈粘液细胞,随着鼠胃底腺的发育。这些细胞逐渐向上方移动,最终成为颈粘液细胞。     

大腹圆蛛主壶腹腺cDNA文库构建和丝蛋白基因筛选

首次通过反转录-置换法和使用pUC18质粒成功构建大腹圆蛛（Araneus ventricosus)主壶腹腺（major ampullate gland)cDNA基因文库,并以鸟枪法从中筛选出具有典型重复结构的大腹圆蛛主壶腹丝蛋白cDNA基因AvF1,大小为1744bp,编码区为1572bp,编码氨基酸524个,分子量为42489.55Da,典型的重复结构为（GGP）nGGX。与现有已知的蛛丝蛋白基因中三带金蛛（Argiope trifas-ciata)鞭毛样丝基因（AtfF)有最高的同源性69.3%。大腹圆蛛主壶腹腺cDNA文库的构建和蛛丝蛋白新基因的克隆,为提供大腹圆蛛蛛丝蛋白基因背景和进一步研究蛛丝蛋白奠定了基础。     

胃蛋白酶C基因在大鼠胃底腺发育过程中上皮细胞内的表达

胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前体,是脊椎动物中普遍存在的非特异性蛋白消化酶,胃蛋白酶的生物学特性及分子特性已得到了充分研究,虽然有许多于胃蛋白酶产生细胞的研究报告,但胃蛋白酶原基因在这些细胞的表达却知之甚少,本研究采用地高辛标记的RNA探针,用原位杂交的方法研究了大鼠胃底腺中胃蛋白酶产生细胞的个体发育,研究发现,大鼠胃腺在胚胎18．5天开始出现,但没有形态分化;胃蛋白酶mRNA在出生后3．5天首次被原位杂交法检出。胃蛋白酶产生细胞在出生后8周发育成熟,胃蛋白酶的mRNA表达在主细胞和颈粘液细胞内,其发育可分为4个阶段：（1）胚胎18．5天至出生后0．5天;（2）出生后3．5天至2周;（3）出生后3周至4周,;（4）出生后8周,在胃底腺发育过程中,胃蛋白酶mRNA的表达只局限于某种特定的细胞,这些细胞的分布具有明确的阶段特异性,因此,我们认为胃蛋白酶C可作为胃上皮细胞分化的分子标志。     

腺梗豨莶的新双色满

作者从腺梗莶的乙醚抽出物中分到一个新的双色满成分 ,基于光谱分析和应用二维核磁共振技术 ,它的化学结构已被确定为 3,3’ 双 (3,4 二氢化 6 甲氧基 2H 1 苯并吡喃 )或 3,3’ 双 (6 甲氧基色满 )。     

重组腺伴随病毒载体表达人白细胞介素12的研究

白细胞介素12(IL-12)具有广谱抗肿瘤、抗感染的作用,是由两个亚单位40kD(p40)和35kD(p35)通过二硫键构成的杂合体,有可能通过分别表达亚单位的方式来表达有功能活性的IL-12.该实验尝试利用重组腺伴随病毒(rAAV)载体进行人IL-12(hIL-12)双亚基共表达,将hIL-12的两个亚基分别克隆到AAV载体质粒pSNAV中,构建成pSNAV-IL12-p35和pSNAV-IL12-p40质粒,经转染、G418筛选后建立了rAAV载体细胞株.采用先前建立的rAAV的生产方法,获得了rAAV-IL12-p35和rAAV-IL12-p40,在体外将两种rAAV共同感染BHK-21细胞,48h后收集细胞培养上清进行免疫学和生物学活性检测.经ELISA检测,产生的hIL-12 p70的含量为10.185pg/ml;在体外促进IFN-γ分泌实验中,加入hIL-12的PBMC分泌的IFN-γ含量为37.2mg/ml.实验结果说明:采用两个AAV载体分别表达亚单位的方法可以表达具有功能活性的hIL-12,为IL-12的基因治疗提供了一条新的途径.     

人肺腺癌细胞A—549和正常细胞HBE的蛋白质组差异分析

为了研究人肺腺癌细胞A 5 49和正常细胞HBE的蛋白质组差异 ,用固相pH梯度双向凝胶电泳分离人肺腺癌细胞系A 5 49和正常细胞HBE的总蛋白质 ,银染显色 ,PDQuest 2 DE软件分析 ,对部分差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱 ,用PeptIdent软件查询SWISS PROT数据库。结果获得了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱 ,图象分析探测到A 5 492 DE图谱的平均蛋白质点数为 (890± 38)个 ,HBE的平均蛋白质点数为 (75 7± 2 7)个 ,不同胶间蛋白质点的位置偏差在IEF方向为 (2 .85± 0 .48)mm ,在SDS PAGE方向为 (2 .6 9± 0 .37)mm。差异表达分析发现A 5 49和HBE图谱有5 35个蛋白质点相互匹配 ,其中A 5 49有 35 5个未被匹配 ,HBE中有 2 2 2个未被匹配 ;对A 5 49和HBE中的 18个差异蛋白质点分别进行肽质指纹分析 ,经数据库查询 ,初步鉴定为一些与物质代谢、细胞因子、信号转导有关的蛋白质。提示人肺腺癌细胞A 5 49和正常细胞HBE的蛋白质组具有差异 ,这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究肺腺癌的相关蛋白质及分子标记物     

黑杨萎蔫叶片挥发性物质的成分分析

采用水蒸气蒸馏法和气体吸附法提取黑杨萎蔫叶片的挥发性气味物质,用二氯甲烷做萃取剂,气相色谱_质谱联用技术分离和鉴定萃取到的气味物质的化学组分,结果表明,水蒸气蒸馏法共得到19个峰,鉴定出结构的有16个峰,未鉴明的3个峰;主要组分为4号峰的(Z)_3_己烯醇,相对含量为28.71%,其次为14号峰的邻羟基苯甲醛,相对含量为10.35%。气体吸附法共分离到20个峰,鉴定出结构的有17个峰;主要组分分别为6、7、8号峰的(E)_2_己烯醛、(Z)_3_己烯醇、(E)_2_己烯醇,相对含量分别为20.78%、29.12%、29.22%。两种方法所得到的相同组分为9种,相似性为46.15%。     

达乌尔黄鼠冷暴露、冬眠及激醒时的外周甲状腺激素水平变化

探讨了达乌尔黄鼠在冷暴露、冬眠及激醒时的外周甲状腺激素水平变化和激素代谢。达乌尔黄鼠在非冬眠季节 ( 7～ 8月 )冷暴露 ( 4℃± 2℃ ) 1天 ,导致血清T3和T4浓度迅速增加 ,T3/T4不变 ;经 4周冷驯化后 ,T3维持在高水平上 ,T4降低 ,T3/T4增加 ,外周组织中的T4脱碘酶活性升高。表明冬眠动物与非冬眠动物的甲状腺机能及其激素代谢的冷适应性调节一致。在冬眠季 ( 12～ 1月 )的冬眠和激醒过程中 ,外周组织的T4脱碘酶活性、血清T3和T4水平比常温达乌尔黄鼠的高 ,显著高于夏季的水平 ,T3/T4不变。表明达乌尔黄鼠甲状腺机能及其激素水平存在季节性变化。