功能蛋白质组学

科学背景及意义２０世纪中期以来,随着ＤＮＡ双螺旋结构的提出和蛋白质空间结构的解析,开始了分子生物学时代,对遗传信息载体ＤＮＡ和生命功能的体现者蛋白质的研究,成为生命科学研究的主要内容。９０年代初期开始实施的人类基因组计划,在经过各国科学家８年多的努力下,已经取得了巨大的成就,第一个多细胞生物-线虫基因组的ＤＮＡ全序列测定在１９９８年年底已经完成;人类所有基因的部分序列测定（ＥＳＴ）已经完成;...     

水体异味及其藻源次生代谢产物研究进展

在淡水水体中,藻源次生代谢产物中对水环境影响最大的是蓝藻毒素和异味物质,由于蓝藻毒素对人类的健康有直接危害,针对毒素的研究工作相对较多。然而,随着人们生活水平的不断提高,对饮用水、水产品的质量要求越来越高。水体异味,特别是藻源异味问题已引起人们的重视。由藻源次生代谢产物引起的水体异味问题是一个严重且普遍存在的环境问题。国外自二十世纪五十年代就开始了对水体异味的研究,至今已成为当今世界水环境研究热点之一,而中国在这方面的研究相对较晚,相关研究工作也较少。       

一种简便快速筛选重组子的方法

目的：根据碱裂解法抽提质粒DNA的原理,研究应用快检缓冲液方法挑取重组子克隆,从而获得简单易行,快速方便,节省时间,提高工作效率的筛选重组子的方法。方法：不需抽提质粒,只要将菌落接入快检缓冲液后直接进行普通琼脂凝胶电泳分析,就可以快速筛选出重组子。结果：结果和提取质粒酶切鉴定结果一致。结论：经实验证明用快检缓冲液方法筛选重组子是一种简单易行,快速方便,节省时间,提高工作效率并且可靠的方法。     

橘小实蝇对五个芒果品种的产卵偏好及清理落果防治效果研究

在2011年6—8月调查了橘小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)对云南省元江县5个主要芒果品种的产卵为害情况,评估了清理落果对橘小实蝇的防治效果。结果表明树上果实和成熟落果受害率最高、产卵孔数量最多的品种是三年芒和红象牙芒;单位面积落果量(X)和监测雄虫数量(Y)显著相关(r1=0.884**,显著性P1=0.000),其回归方程为Y=-1.675+449.701X-204.933X2+27.046X3(R2=0.966,显著性水平P=0.000);累加虫量(X)与树上果实被害率(Y)的回归方程为Y=0.003X0.721(R2=0.953,P=0.000)。采拾落果可降低树上果实受害率约20%,减少田间虫口数44%左右。因此,清理落果对控制橘小实蝇田间种群数量、减少树上果实被害率有显著作用。     

电脉冲法转化苏云金芽孢杆菌BMB171的研究

研究了用电脉冲法转化苏云金芽孢杆菌受体菌ＢＭＢ１７１的优化条件以及由转化导入的几类ｃｒｙ基因在ＢＭＢ１７１中的表达效果。结果表明,采用ＳＧ溶液作电脉冲缓冲液,用１０．ｏｋＶ／ｃｍ的脉冲场强和１次电脉冲（４．６ｍｓ）以及采用对数前期（ＯＤ_６５０ｎｍ为０．２～０．３）收获的受体菌,可以达到最高转化频率,其中用ｐＨＴ３１０１电转化 ＢＭＢ１７１的最高频率达 ８×１０７转化子／μｇ ＤＮＡ。转化频率随质粒ｐＨＴ３１０１浓度的增加,在５４．６９ｐｇ／ｍＬ至３．５０μｇ／ｍＬ范围内     

Preparation of monoclonal antibodies against chicken liver 6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase and their effects on enzyme activities

The effects of the monoclonal antibodies (McAbs) directed against chicken liver 6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase (6PF-2-K/Fru-2, 6-P2ase) on the structure and function of the enzyme were studied. Using chicken liver 6PF-2-K/Fru-2,5-P2asc as antigen, 7 clones of monoclonal antibodies specifically binding with the antigen were obtained. The epitopes of the antigen recognized by the 6 McAbs localized on the fructose-2,6-bisphosphatase domain of chicken liver 6PF-2-K/Fru-2, 6-P2ase, and the other (H2) are on the 6-phosphofructo-2-kinase domain. All of the 7 McAbs could activate the kinase activity of the bifunctional enzyme by twofold and had a similar effect on the bisphosphatase activity of the bifunctional enzyme which resulted in a fourfold increase of the bisphosphatase activity of the bifunctional enzyme. However, the McAbs did not affect the activity of the separated fructose-2, 6-bisphosphatase domain. The results suggested that the Fru-2, 6-P2ases in the bifunctional enzyme and     

407例老年肺癌下呼吸道感染患者病原菌分布及耐药分析

目的 分析老年肺癌下呼吸道感染患者痰培养物的病原菌分布及耐药状况.方法 回顾性分析407例老年肺癌下呼吸道感染患者痰标本细菌培养、鉴定及药敏结果.结果 共分离出病原菌238株,革兰阴性菌163株,占68.49％;革兰阳性菌33株,占13.87％;真菌42株,占17.65％.主要病原菌为肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌.其中,肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌ESBLs阳性菌株的比例分别为36.73％、28.85％.结论 老年肺癌患者因长期使用抗生素,呼吸道菌群失调,不同病原菌对抗菌药耐药率均较高,以革兰阴性菌感染为主,肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产ESBLs的菌株有较高比例,二重感染比例较高;革兰阳性菌均对万古霉素敏感,未发现耐药菌株.因此临床医生根据药敏结果合理选用抗生素,对于改善患者肺部微生态失衡,延长生存时间具有重要指导意义.     

针对Oct-4和Survivin基因的双靶向shRNA腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞的抑制作用

转录因子Oct-4和Survivin是细胞增殖的关键调控因子,构建针对Oct-4和Survivin基因的双靶向shRNA腺病毒载体Ad5-Dual-shRNA,并研究其对肝癌细胞及移植瘤的生长抑制作用。合成Oct-4和Survivin基因的shRNA序列,插入腺病毒穿梭载体pDC312,含有shRNA的穿梭载体与腺病毒骨架载体pBHGloxdeltaE13Cre共转染HEK293细胞,经Cre/LoxP位点特异性重组获得重组腺病毒Ad5-Dual-shRNA;腺病毒Ad5-Dual-shRNA感染肝癌细胞系EHBH-H1,经Western blotting检测Oct-4和Survivin基因的表达情况,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐染色法(MTT实验)和裸鼠荷瘤实验检测对肿瘤细胞生长的影响。研究结果显示,双靶向重组腺病毒Ad5-Dual-shRNA感染肝癌细胞系EHBH-H1能够有效沉默Oct-4与Survivin基因的表达,并且在MTT实验和裸鼠荷瘤试验中都显示出较单一靶向的shRNA腺病毒载体Ad5-Surv-shRNA、Ad5-Oct4-shRNA具有更为明显的肿瘤细胞生长抑制作用。实验结果表明,特异性双靶向shRNA腺病毒载体Ad5-Dual-shRNA是一种更为高效的靶向肿瘤基因治疗载体。     

基于SPEI指数的近52年青海省农(牧)作物生长季干旱动态格局分析

标准化降水蒸散指数(the standardized precipitation evapotranspiration index,SPEI)是国际上最新发展的适用于气候变暖背景下多时间尺度干旱监测与评估的理想指标。本文利用1961—2012年青海省47个气象站点逐月的平均气温和降水数据,基于SPEI分析了近52年气候变化背景下青海省农作物生长季多时间尺度干旱风险的时空变化特征。结果表明:生长季干旱风险突出,时空差异显著;在气候变化背景下,生长季生育前期干旱化趋势小于需水关键期和全生育期趋势,生长季内干旱有以生育前期干旱为主向需水关键期干旱为主转变的特点。与此同时,干旱发生范围也有明显扩大趋势;在区域平均增暖1.36℃情况下,青海省农作物生长季中度以上干旱风险平均增加了2倍;进一步印证了气候变暖在带来可能收益的同时由于气候变率的增大及水热匹配的不均匀而增加农牧业生产的不稳定性。     

融合蛋白M-IL-2(~(88)Arg,~(125)Ala)在毕赤酵母中的表达及抗肿瘤活性研究

构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素2(M-IL-2(88Arg,125Ala))毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化毕赤酵母菌株KM71H,甲醇诱导筛选出的多拷贝阳性菌株表达融合蛋白,纯化融合蛋白,并进行初步的抗肿瘤活性研究。经测序及PCR鉴定,M-IL-2(88Arg,125Ala)正确插入pPICZαA中,电转化后,重组载体通过同源重组整合到酵母基因组中,SDS-PAGE检测在26 ku左右有明显目的条带,与理论相符。经Western blot鉴定具有较高抗原性及特异性。BCA法测定甲醇诱导96 h融合蛋白表达量达315.2 mg/L。CCK-8法检测融合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞生长抑制作用,表明纯化的融合蛋白在体外能抑制人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞的生长增殖。该研究为融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)大规模制备和动物实验以及临床前期研究奠定了基础。