Ⅱ型单纯疱疹病毒基因组无性繁殖系的建立

本文对HSV-2基因组进行了分子克隆,以自己组建的具有单一Bgl Ⅱ酶切位点的质粒pHO-314为载体,建立了HSV-2基因组E、G、H2、J、L、N、O、P等8个Bgl Ⅱ片段的无性繁殖系,其中包括完整的TK基因,特异性糖蛋白基因和转化基因。克隆的Bgl Ⅱ片段占全部HSV-2基因组的50％以上。     

采用基因微阵列技术对常见呼吸道病毒进行检测的初步研究

建立一种高通量的基因微阵列检测技术,对常见呼吸道病毒感染进行监控.根据公开发表的8个病毒科38种常见呼吸道病毒的序列,计算其保守区域,设计病毒的特异性检测探针,制备呼吸道病毒检测基因微阵列.利用随机引物PCR方法标记样品中的病毒靶序列,标记产物与基因微阵列上的探针杂交,清洗、扫描后进行结果分析.采用流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒作为报告病毒,并对80例上呼吸道感染患者的咽拭子标本进行验证测试.初步结果表明,该呼吸道病毒微阵列基因芯片检测是可行的,在利用基因微阵列技术对病毒监控方面进行了有益的尝试,得到了有经验的信息.     

XJ-160病毒为辛德毕斯病毒新亚型

ＸＪ－１６０病毒是我国首次分离的辛德毕斯病毒,在对其全基因组核苷酸序列测定的基础上,对病毒基因组序列、病毒同源性和病毒系统进化等进行了较为详细的分析,结果表明：ＸＪ－１６０病毒具有典型的甲病毒属德毕斯病毒的序列特征。该病毒ｎｓｐ３蛋白基因中１１处制失及两处插入（４５１７￣５４８５）,涉及９０年核苷酸。核苷酸序列的系统进化分析表明,ＸＪ－１６０病毒属于辛德毕斯病毒欧洲／非洲亚组。病毒全基因组核苷酸序     

Complete DNA sequence and gene analysis of the virulence plasmid pCP301 of <Emphasis Type="Italic">Shigella flexneri</Emphasis> 2a

The complete nucleotide sequence and organization of the large virulence plasmid pCP301 (termed by us) of Shigella flexneri 2a strain 301 were determined and analyzed. The result showed that the entire DNA sequence of pCP301 is composed of 221618 bp which form a circular plasmid. Sequence analysis identified 272 open reading frames (ORFs), among which, 194 correspond to the proteins described previously, 61 have low identity (<60%) to known proteins and the rest 17 have no regions of significant homology with proteins in database. The genes of pCP301 mainly include the genes associated with bacterial virulence, the genes associated with regulation and the genes relating to plasmid maintenance, stability and DNA metabolism. Insertion sequence (IS) elements are 68 kb in length and account for 30 percent of complete sequence of the plasmid which indicates that gene multiple rearrangements of the pCP301 have taken place in Shigella flexneri evolution history. The research result is helpful for interpreting the pathogenesis of Shigella, as well as the genetics and evolution of the plasmid.     

采用我国痘苗病毒天坛株载体表达单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D

木文从单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)基因组EcoRI H片段中分离出含有糖蛋白D(gD)基因的2.5kb DWA片段,插入带有痘苗病毒天坛株TK基因区段的pJC—2质粒p7.5k启动子的下游,转染TK~-143细胞,获得带有HSV-1 gD基因的重组痘苗病毒。采用HSV-1 gD单克隆抗体免疫胶体金技术进行电镜观察表明,重组痘苗病毒感染的细胞内有特异性HSV-1 gD抗原.重组病毒免疫家兔后6周可产生明显的HSV-1中和抗体。     

人β干扰素N端序列的变异与其抗病毒活性的关系

研究了人β干扰素N端序列的变异与其抗病毒活性的关系。采用DNA重组技术获得了两种干扰素变种:一种N端序列为MWIRGF,另一种为MAIRGF。这两种干扰素变种的抗病毒活性都明显下降。此结果提示,人β干扰素的N端序列对抗病毒活性起主导作用,在改造该蛋白结构时,应避免改动N端结构。     

人白细胞介素—2 cDNA在大肠杆菌中的高效表达及其纯化

白细胞介素—2(IL-2),过去曾称为T细胞生长因子(TCGF),是在促有丝分裂素或特异性抗原刺激下,由辅助性T细胞产生的一种淋巴因子,能在体外长期维持T细胞生长。它可调节免疫反应,促进细胞毒性T细胞和NK细胞增殖,诱生γ干扰素。因而是治疗肿瘤和免疫缺陷病人的非常有希望的药物之一。     

动物病毒载体与基因治疗的现状和前景

动物病毒载体与基因治疗的现状和前景侯云德近几年来,由于病毒载体基因转移技术以及基因分子生物学的突飞猛进,采用基因转移技术治疗人类疾病,已从过去的理论和实验室研究进人临床实用研究阶段。第一例人类基因治疗始于１９９０年９月,是将正常的腺昔脱氨酶基因通过逆...     

原核增强子样序列的研究

本文采用启动子检测载体和增强子检测载体发现来自大肠杆菌JMl03 DNA的一个1．0kb左右的片段能在痘苗病毒启动子上游增强细菌CAT和β－半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达,这种增强效应无明显的方向性,一般可使基因表达水平提高3～6倍,此原核增强子样序列同时也具有启动子功能。此外还测定了增强片段的部分DNA序列。     

人成熟干扰素αD基因表达质粒的组建与分析

本工作利用本组构建的含tac启动子(promoter)的载体pTL和人工合成的接头片段,组建了人成熟干扰素αD基因的表达质粒。先从p8218质粒中酶切分离出人干扰素αD基因的Sau3AⅠ-PstⅠ大片段(约780bp),再与人工合成接头EcoRⅠ-Sau3AⅠ(11bp)及pTL的EcoRⅠ-PstⅠ大片段载体混合,用T4DNA连接酶连接后,转化大肠杆菌MM294,用氨基苄基青霉素抗性作为筛选克隆的标志,所得质粒命名为pSBM_(22)。经酶谱分析和DNA顺序测定,证明pSBM_(22)中人工接头的连接是正确的,含有人成熟干扰素αD基因。经抗病毒活性检查,每立升大肠杆菌发酵液可获得约5×10~6NIH单位的干扰素。