StxB／HlyA（CT）融合蛋白的分泌表达和StxB在小鼠内的特异免疫反应

本文将志贺氏毒Ｂ亚单位（ＳｔｘＢ）与大肠杆菌溶血素Ａ的Ｃ末端（ＨｌｙＡ（ＣＴ））相融合,蛋白ＳｔｘＢ／ＨｌｙＡ（ＣＴ）不仅能在大肠杆菌中分泌到胞外,而且也能从ａｒｏＡ突变的减毒鼠伤寒沙门氏菌中分泌出去。当用高拷贝质粒ｐＵＣ１８作载体时,上述融合蛋白对宿主细胞有毒性,但以低拷贝质粒ｐＢＲ３２２取代之后,该融合蛋白不再对窠主细胞产生任何不利影响。融合蛋白ＳｔｘＢ／ＨｌｙＡ（ＣＴ）无论是在ａｅｒｏｂａｃ     

细菌作为肿瘤基因治疗载体的研究进展

营养缺陷型细菌能够侵袭肿瘤细胞并呈递外源基因的特性提示我们可以将其设计成新型的肿瘤基因治疗载体。本文综述了细菌作为肿瘤基因治疗载体的历史与现状、机制以及存在的问题。     

从小牛胸腺分离纯化末端脱氧核苷酸转移酶

本文采用Okamura氏的寡聚脱氧胸苷酸(oligo-dT)-纤维素柱层析法分离纯化小牛胸腺末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)。包括下列主要步骤:制备酶粗提液、磷酸纤维素柱层析、二乙基氨基乙基纤维素柱层析、葡聚糖凝胶过滤、oligo dT-纤维素亲和层析。经过上述几步分离纯化,从500克小牛胸腺中获得6,564单位TdT,比活性达5,199单位/毫克蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳呈一条带,不含脱氧核糖核酸(DNA)多聚酶Ⅰ。     

克隆与志贺氏菌属侵袭力相关的基因

本文以柯斯质粒pJB8作载体,经体外包装构建了志贺氏菌属弗氏5大质粒(140Md)基因文库,获得重组子4000多个。用已证实与侵袭力相关的17kb基因片段作探针,从基因文库中筛选出66个相应的重组子。对其中部分重组子进行分析,表明这些重组子均包含一个大的重组质粒,它们与17kb探针杂交呈阳性反应。当用EcoR 1酶解这些重组质粒时,均产生大小相当于17kb的DNA片段,它们与17 kb探针杂交,也呈阳性反应。表明这些重组子均含与侵袭相关的基因片段。这为以后构建预防痢疾的口服活菌苗打下了基础。     

乙型肝炎病毒DNA克隆的菌落原位杂交

在遗传工程的DNA 重组试验中,需从大 量的转化子中筛选含特殊DNA 序列的克隆, 尤其是当被克隆的基因中无选择标记时,应用 菌落原位杂交进行筛选是最理想的。其主要 优点是特异性强,因此它成为DNA体外重组 实验的重要方法之一。为了便于使Grunstein 等〔习的菌落原位杂交法在我国推广应用,我们 对Grunstein等的方法作了适当修改,并对影 响实验结果的几个主要因素作了初步比较。采 用本修改方法筛选含乙型肝炎病毒DNA的克 隆的结果表明,此法是特异而可靠的。     

牛β-乳球蛋白基因调控序列指导组织型纤溶酶原激活剂在小鼠乳腺中的表达

用全长8.4kb的牛β－乳球蛋白基因（BLG）作为调控序列,用1.6kb的鸡溶菌酶MAR序列作为对抗转基因中位点效应的工龄,构建了组织型纤溶酶原激活剂（tPA）乳腺表达载体。对2300枚卵进行显微注射,以PCR和Southern-Blot检测,在170只出生小鼠中获得9只整合有牛BLG－tPA融合基因的转基因小鼠,并在转基因小鼠乳汗中检测到tPA r itd ntg ,tPA的表达水平最高达到12μg/mL。整合的小鼠基因组中的牛BLG－tPA融合基因能稳定地遗传给子代。     

痢疾疫苗的研究进展

经济发展水平的不平衡、卫生条件不能得到充分的改善、抗药菌株的不断出现,决定了当前迫切需要研制痢疾疫苗.由于对痢疾杆菌致病机制和机体抗感染免疫还不是很清楚,目前还没有一个真正实用的痢疾疫苗上市.本文对当前世界上研究较为广泛的减毒口服活疫苗和亚单位疫苗的构建原理及取得的成果和存在的问题作一综述.     

志贺菌福氏2a信号标签诱变突变体文库的构建

以合成的单链序列特异性标签为模板,通过PCR得到双链DNA标签并将其克隆到自杀质粒pUT-Tn5 Km2的转座子中,转化大肠杆菌S17-1λpir;然后用经转化的S17-1λpir与福氏志贺菌2a 2457T交配,挑出对氨苄青霉素敏感,对卡那霉素和萘啶酮酸抗性的菌落,结果表明构建了包含4376个福氏志贺菌突变体信号标签诱变库,为进一步鉴定该病原体的毒力基因打下了基础。     

一种简单高效的结合转移克隆方法

为了建立一种将整合在染色体上的重组自杀质粒重新环化成环形质粒的技术方法,以体内表达技术筛选到的痢疾杆菌融合菌株为出发点,借助辅助质粒pMT999或pRX2013进行了结合转移实验,成功地建立了一种结合转移克隆方法,并且具有较高的克隆效率。     

用酵母双杂交系统筛选与痢疾杆菌侵袭素IPaC相互作用的蛋白

利用酵母双杂交技术筛选与IpaC相互作用的真核细胞蛋白。首先将IpaC全长基因克隆到诱饵蛋白载体pGBKT7中 ,以构建的pGBKT IpaC为靶蛋白质粒 ,筛选人HeLa细胞cDNA文库。在 2× 10 6个克隆中得到 2 2个阳性克隆。其中 2个阳性克隆编码人胶原酶蛋白片段。并且进一步证明与胶原酶片段相互作用的IpaC结构域在 6 2aa～ 170aa之间。提示IpaC可能在胶原酶参与的生物学过程中发挥作用。