肠毒素源性定居因子CS6在减毒伤寒沙门氏菌中表达及免疫原性的研究

将编码肠毒素源性大肠杆菌定居因子抗原CS6基因克隆至pXL670,转化asd基因突变的E.coli X6097,获得重组质粒pSS64,再将后者转化至减毒的△aroA、△aroC、△asd伤寒沙门氏菌,构建了无药物抗性且稳定的大肠杆菌和伤寒双价菌苗候选株。小鼠腹腔免疫和攻击实验表明,该菌株对伤寒沙门氏菌毒株的攻击具有良好的保护作用。家兔免疫实验证明,该菌株能产生抗CS6和伤寒菌Vi抗原的血清抗体。     

重组人GM—CSF／MCAF融合蛋白的变性,复性及纯化研究

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白在大肠杆菌中高效表达后,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后,探索了rhGM-CSF/MCAF变性和复性的合适条件。复性后的样品经Sephadex G-75凝胶过滤和CM-Sepharose FF离子交换两步层析,得到了具有生物学活性的SDS-PAGE纯的rhGM-CSF/MCAF。Western blot检测表明,纯化的rhGM-CSF/MCAF能分别与GM-CSF和MCAF抗体发生特异反应。     

痢疾菌苗研究进展

痢疾是全世界范围内流行的肠道传染病。随着分子生物学技术的发展,迄今已构建了新一代预防痢疾的疫苗,其中包括:具有侵袭力和不具侵袭力的单价口服活菌苗候选株;它们与大肠杆菌、伤寒沙门氏菌和血清型不同的痢疾杆菌组成的双价和三价菌苗候选株;以及以脂多糖和核糖体为基础的不经胃肠的组分菌。猴体和人体试验证明它们安全有效。预计在未来的10年中,将会有一个或几个安全有效的痢疾疫苗投放市场。     

利用噬菌体表面呈示技术筛选志贺毒素抑制剂

本研究首先分离纯化了Stx的受体结合亚基(StxB),从一编码随机15肽序列的噬菌体文库中筛选与StxB结合、并能有效抑制其受体结合活性的短肽序列,并评价了包含此序列的合成肽及基因表达产物对Stx细胞毒、肠毒活性的抑制作用。同时,筛选了与纤维素结合的结构域(cellulose binding domain,CBD),并利用基因工程方法得到CBD与Stx抑制剂的融合蛋白产物,评价了CBD在Stx抑制剂研究中应用的可行性。 研究结果:对StxB进行了纯化,得到了保持必要空间结构和生物学活性的StxB。用抗体捕获的方法得到了与StxB特异结合的噬菌体     

痢疾基因工程三价菌苗候选株的构建

通过DNA体内外同源重组, 用霍乱毒素B亚单位基因(ctxB)完全取代了福氏志贺氏2a T32株染色体上的asd基因, 获得了稳定表达CtxB的DAP依赖株FWL01. 随后, 用T32株的asd基因标记志贺氏宋内S7株的Ⅰ相大质粒, 并将其诱动至FWL01, 构成三价菌苗候选株FSW01. 在该菌苗候选株中, 表达宋内Ⅰ相O抗原的大质粒与宿主菌是平衡致死的. 因此, 该候选株在没有任何抗生素存在情况下, 能稳定地表达福氏 2a, 宋内O抗原和CtxB. 豚鼠眼角膜试验和HeLa细胞侵袭试验证明FSW01无毒, 家兔免疫试验证实了其有很好的免疫原性. 小鼠和猴体免疫保护试验显示该候选株对相应的有毒株攻击具有很好的保护效果.     

致病菌体内诱导基因的功能分析—体内表达技术的应用

病原菌体内诱导的基因在致病过程中起重要作用,体内表达技术是一类很有前景的研究体内诱导基因的技术,本介绍了体内表达技术的基本原理,类型以及在致病菌体内诱导基因方面的研究进展和应用前景。     

菠菜乙醇酸氧化酶基因的克隆及表达

采用RT-PCR技术从菠菜总RNA中分离扩增了乙醇酸氧化酶（GO）基因的cDNA序列,首先克隆到质粒pMD18T,进行了测序。然后将乙醇酸氧化酶的cDNA分别亚克隆至质粒pThioHisC、 pTIGTrx、pBV220和pET-2b(+),分别转化大肠杆菌DH5α和BL21（DE3）,并对重组乙醇酸氧化酶在大肠杆菌中的表达进行了研究。SDSPAGE和酶活分析表明,菠菜乙醇酸氧化酶在E.coli BL21 (DE3) （pTIGTrxGO）和E.coli BL21(DE3) （pET-22b(+)GO）里得到了高水平的表达,其中E.coli BL21(DE3) （pET-22b(+)GO）的乙醇酸氧化酶活性较高。     

由质粒R91-5::Tn501、R68.45和Rp4::mini-Mu所引起的条纹状假单胞菌染色体转移

假单胞菌是一类具有多种代谢功能的革兰氏阴性菌,在工、农和医方面都具有一定的作用。近年来人们对它作了广泛的研究,在遗传学方面也有不少的工作,但是,由于缺少适当的遗传学工具,对其它的假单胞菌还研究得很     

由质粒R91-5:: Tn501, R68.45和Rp4: :mini-Mu所引起的条纹状假单胞菌染色体转移

假单胞菌是一类具有多种代谢功能的革兰 氏阴性菌，在工、农和医方面都具有一定的作 用。近年来人们对它作了广泛的研究，在遗传 学方面也有不少的工作^[10]，但是，由于缺少适当 的遗传学工具，对其它的假单胞菌还研究得很 少。我们为了对维生素C前体一2-酮基一古龙酸 的产生菌之一— 条纹状假单胞杆菌(Pseudomonas striata）进行遗传学研究，试验了不同质粒 对该菌染色体基因转移的作用，发现R91-5:: Tn501, R68.45和Rp4: : mini-Mu等质粳都有 明显的促进作用，为构建该菌的遗传图等提供 了方法。     

一种简单高效的结合转移克隆方法*

为了建立一种将整合在染色体上的重组自杀质粒重新环化成环形质粒的技术方法 ,以体内表达技术筛选到的痢疾杆菌融合菌株为出发点 ,借助辅助质粒pMT999或pRK2 0 1 3进行了结合转移实验 ,成功地建立了一种结合转移克隆方法 ,并且具有较高的克隆效率。