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重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和人单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白经SephadexG-75和CM-SepharoseFF两步柱层析,获得了电泳纯的GM-CSF/MCAF融合蛋白。为进一步研究其结构与功能,我们以纯化的该融合蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清。DotELISA和Westernblot试验表明,该抗血清效价高、特异性好,可分别与GM-CSF/MCAF、GM-CSF和MCAF发生反应。 相似文献
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采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换。最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除。经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1BAC克隆。 相似文献
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人肺癌细胞CPP32基因的克隆及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
蛋白酶尤其是ICE家族的蛋白酶是细胞死亡机制的核心成分.ICE蛋白酶家族中,CPP32(又称Yama,apopain)在不同形式的凋亡途径中起核心作用.为深入研究CPP32的结构与功能,克隆了CPP32基因,并在大肠杆菌中进行了表达.采用RT-PCR技术从人肺癌细胞株中获得了CPP32蛋白酶基因.DNA序列分析表明,该基因由已报道的编码CPP32αp20亚单位和CPP32βp10亚单位的核苷酸组成,提示ICE家族蛋白酶寡聚化可能受DNA水平调控.将获得的CPP32基因分别重组到pBV321和pEX31B载体上,并分别转化到大肠杆菌中,均获得了CPP32基因的较高表达,表达产物主要以包涵体形式存在. 相似文献
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本实验将含有人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因cDNA的重组真核表达质粒直接注射小鼠骨骼肌,观察了hGM-CSF基因在小鼠体内的分泌表达情况。ELISA结果显示注射重组质粒DNA后,第15天左右小鼠血液hGM-CSF的表达量最高,约有97 ng/ml,第20天次之,第25天和第10天的表达量相近,约有49 ng/ml。生物学活性检测结果表明,实验组小鼠血液有维持TF-1依赖株细胞的生长作用。表明重组质粒DNA直接注射骨骼肌不仅能表达hGM-CSF,而且表达产物有生物学恬性。 相似文献
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