大白鼠腹腔巨噬细胞2''''-5''''寡腺苷酸合成酶

干扰素(IFN)或干扰素诱导剂能激活巨噬细胞,提高巨噬细胞的吞噬活力。不同来源的巨噬细胞,在体外培养条件下,用pppA2′p5′A2′p5′A(2′-5′P_3A_3)短时间刺激之后,吞噬活力也明显提高。但这两种作用之间有何关系,目前仍不清楚。因为2′-5′P_3A_3是寡腺苷酸合成酶(Esi)利用ATP合成的寡聚腺苷酸中的一种(它     

核糖核酸結构的研究 Ⅲ.利用核糖核酸酶T_1研究絲腺与酵母可溶性核糖核酸的結构

(1) 从高峰淀粉酶制剂(Taka-Diastase)制得RNase T_1,提纯了2800倍,可用于结构研究,从上海四万酿造厂的米麯也分得类似纯度、类似特异性的酶。(2) 用RNase T_1单独或与RNaseⅠ联合作用的结果,均发现啤酒酵母与蓖麻蚕絲腺腺体sRNA的结构有显著差异。例如用RNase T_1单独作用时,由蓖麻蚕蒜腺sRNA所得Gp大于啤酒酵母sRNA,而UpUpGp则小于后者。用两个酶联合作用时,由蓖麻蚕絲腺sRNA所得Cp、(Gp+Gp!)大于啤酒酵母sRNA,且前者较后者多出许多含稀有成份的紫外光吸收点,其电泳层析行为及表现熒光性质较为特殊。(3) 蓖麻蚕蒜腺sRNA合有-Gp(Ap)_4Cp-及-Gp(Ap)_3Cp-等结构。(4) RNase Ⅰ与RNase T_1联合水解sRNA所得Gp!/Gp值大于RNase T_1单独作用时所得Gp!/Gp值。     

人成熟干扰素αD基因表达质粒的组建与分析

本工作利用本组构建的含tac启动子(promoter)的载体pTL和人工合成的接头片段,组建了人成熟干扰素αD基因的表达质粒。先从p8218质粒中酶切分离出人干扰素αD基因的Sau3AⅠ-PstⅠ大片段(约780bp),再与人工合成接头EcoRⅠ-Sau3AⅠ(11bp)及pTL的EcoRⅠ-PstⅠ大片段载体混合,用T4DNA连接酶连接后,转化大肠杆菌MM294,用氨基苄基青霉素抗性作为筛选克隆的标志,所得质粒命名为pSBM_(22)。经酶谱分析和DNA顺序测定,证明pSBM_(22)中人工接头的连接是正确的,含有人成熟干扰素αD基因。经抗病毒活性检查,每立升大肠杆菌发酵液可获得约5×10~6NIH单位的干扰素。     

干扰素的功能表达机理——Ⅹ、pppA_(2′p5′)A_(2′p5′)A抗病毒作用的条件

本工作说明pppA2′p5′A2′p5′A(2′-5′p_3A_3)能使Lpa小鼠细胞对新城鸡瘟病毒或水泡性口腔炎病毒的攻击起一定的保护作用,进一步支持2′-5′p_3A_3抗病毒作用的普遍性。本文还证明在无Ca~(++)存在下,2′-5′p_3A_3于病毒攻击前数小时处理细胞,也能得到抗病毒效果。     

干扰素作用机理和2-5A系统

诱导基因表达是干扰素发挥生物效应的主要方式。干扰素诱导基因表达可有多种途径,被诱导基因的5′端序列与诱导过程有关。干扰素诱导的2-5A合成酶合成的2-5A有多种生物活性,能模仿干扰素的许多功能,2-5A可能是高等动物细胞内的一种生长分化调节因子。     

CEA启动子控制HSV-TK基因表达对人结直肠癌细胞的杀伤作用

构建了以CEA启动子控制的HSV-TK基因表达质粒pCEA-TK。转染pCEA-TK的人结肠癌细胞LoVo对GCV的敏感性提高了1300倍。同样条件下,人宫颈癌细胞HeLa对GCV的敏感性仅提高8倍,且对低于血药浓度(20μmol/L)的GCV不敏感。以上结果显示在GCV存在时,CEA启动子控制下HSV-TK基因的表达使CEA阳性的人结直肠癌细胞获得专一性杀伤。此外,DNA片段分析和电镜观察表明GCV诱导转染pCEA-TK的LoVo细胞发生凋亡可能是这个系统杀死肿瘤细胞的机制之一。本工作还讨论了癌胚抗原(CEA)基因启动子用于人结直肠癌专一性自杀基因治疗的可能性。     

含CD自杀基因腺病毒载体的构建及其应用

构建了含ＣＭＶ启动子、大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ｃｄ）基因的复制缺陷型重组腺病毒载体（ＡｄＣＭＶＣＤ）。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＲＴ－ＰＣＲ鉴定证实,ｃｄ基因已克隆进入ＡｄＣＭＶＣＤ,并在受染细胞中表达。经氯化铯密度梯度离心法纯化的病毒滴度达１×１０１５ｐｆｕ／Ｌ。经１００ｍ．ｏ．ｉ．的ＡｄＣＭＶＣＤ感染的ＨｅＬａ和Ｃ６细胞株在１００μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,细胞存活率＜２０％。同时也观察到ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统有很强的旁杀伤效应,将３．３％的ＡｄＣＭＶＣＤ受染细胞与９６．７％的野生型细胞混合,经５０μｍｏｌ／Ｌ５ＦＣ处理后,＞６０％的细胞被杀死。ＡｄＣＭＶＣＤ／５ＦＣ系统的建立为肿瘤基因治疗的研究提供了新的手段。     

癌胚抗原启动子用于结直肠癌专一性自杀基因治疗(英文)

以癌胚抗原（ＣＥＡ）阳性人结直肠癌细胞株ＬｏＶｏ及ＣＥＡ阴性细胞株ＨｅＬａ为模型,进行了结直肠癌专一性自杀基因治疗研究。在ＣＡＴ分析验证了ｃｅａ启动子的细胞专一性的基础上,构建了在ｃｅａ基因启动子控制下表达大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因（ＣＤ）的真核表达质粒ｐＣＥＡＣＤ。转染ｐＣＥＡＣＤ的ＬｏＶｏ细胞对原药５－氟胞嘧啶（５ＦＣ）的敏感性提高了７５０倍,并存在着明显的旁杀伤效应;同样条件下,ＨｅＬａ细胞对５ＦＣ的敏感性仅提高７．５倍,且对低于血药安全浓度的５ＦＣ不敏感,显示在原药存在下,ｃｅａ启动子驱动自杀基因ＣＤ的表达使ＣＥＡ阳性的结直肠癌细胞获得了专一性杀伤。透射电镜及ＤＮＡ片段化分析证明,诱导细胞凋亡是ＣＤ／５ＦＣ自杀基因系统的作用机制之一。     

腺病毒载体介导CEA基因元件调控自杀基因治疗

构建以CEA启动子控制HSV-TK基因表达的复制缺陷型腺病毒载体(AdCEATK).纯化的重组腺病毒滴度达1×10¹²pfu/ml.CEA阴性的HeLa细胞感染AdCMVTK后对丙氧鸟苷(GCV)很敏感,而感染了AdCEATK后不被GCV杀伤.与此相反CEA阳性的LoVo细胞中AdCMVTK和AdCEATK都有很好的表达活性,说明CEA启动子有良好的细胞专一性.AdCEATK/GCV系统还有明显的旁杀伤效应.此载体将有助于实现对CEA阳性肿瘤的专一性自杀基因治疗.