热激蛋白的分子生物学研究进展

热激蛋白的分子生物学研究进展费云标,黄涛,舒念红,江勇（中国科学院发育生物研究所,北京１０００８０）ＡＤＶＡＮＣＥＳＯＦＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹＯＮＨＥＡＴＳＨＯＣＫＰＲＯＴＥＩＮＳ￥ＦｅｉＹｕｎ－ｂｉａｏ;ＨｕａｎｇＴａｏ;ＳｈｕＮｉａｎ－...     

二甲基苯并蒽对肺肿瘤细胞P1-450基因表达的调节

人肺肿瘤细胞(ChaGo)经二甲基苯并蒽(DMBA)处理,刺激了p 1-450基因的高水平表达,用亚致死剂量内的DMBA 处理细胞,检出了p 1-450基因的mRNA 水平随DMBA浓度和处理时间而增加;p 1-450基因的主要编码区和3’末端区“—CCGG—”序列的甲基化型式不受DMBA 处理的影响,但DMBA 处理细胞影响到基因5’末端和侧翼区的“—CC-GG—”中“—C—”残基的位点特异的低甲基化效应,这种低甲基化效应,可能关系到p 1-450基因的异常高水平表达,也可能同时存在着别的分子调节机制。     

aroA-In融合基因载体的构建、表达及对烟草的转化

PCR扩增突变的5’-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(5’-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthetase,EPSPS)cDNA全长序列,插入pLitmus28得到pLEPSPS,进而通过反向PCR在EPSPS235／236aa之间将其打断为无功能的片段。选用人工构建的具有顺式和反式剪接功能的mini型蛋白内含子Ssp DnaB和Rma DnaB,插入被打断的aroA(抗除草剂基因),构建了质粒pLEBC、pLEBT、pLERC和pLERT。将4种重组质粒中的aroA-In(蛋白内含子Intein插入aroA)融合基因插入pET-32得到表达载体pETLEBC、pETLEBT、pETLERC和pETLERT,lPTG诱导后,SDS-PAGE分析显示其能在DE。中有效表达并发生相应的蛋白剪接。将aroA-cis Ssp DnaB和aroA-cis Rma DnaB融合基因分别插入pLYM中进一步构建成植物表达载体,农杆菌叶盘法转化烟草。基因组PCR分析表明融合基因整合入植物核基因组;RT-PCR分析显示其可在高等植物细胞中成功表达。结果说明蛋白内含子基因可以转化高等真核细胞,蛋白剪接技术可应用于高等植物细胞,从而为防止植物转基因扩散提供了一条新的途径。     

植物抗寒冻的分子遗传与基因工程

植物抗寒冻的分子遗传与基因工程费云标,黄涛,舒念红,赵淑慧（中国科学院发育生物学研究所）植物抗寒冻的遗传学研究表明,小麦的２１对染色体中至少有１０对染色体关系到寒冻抗性,在染色体５Ａ和Ｄ,携带着影响小麦抗性的许多基因（Ｇｕｙ１９９０）。寒冻抗性的７０％的诱生能力涉及到染色体５Ａ（Ｓｉｎｇｈ等１９８８）。