显示哺乳动物受精卵原核的方法

哺乳动物的卵属均黄卵,卵黄含量不多且均匀分布于卵质中。大家畜猪和牛的卵中,含有大量的脂肪滴和一些类似色素的颗粒,它们掩盖了细胞核,给显微注射带来了困难。Ha     

牛生长激素cDNA的分子克隆

我们克隆了与牛生长激素Poly(A)⁺RNA互补的DNA(cDNA)。首先从小牛垂体中提纯总的Pply(A)⁺RNA,用AMV逆转录酶合成单链cDNA,以单链cDNA为模板合成双链cDNA,用多聚G及多聚c谱尾法将双链cDNA克隆到pBR322质粒的Pst I位点上,构建成牛垂体PoIy(A)⁺RNA的cDNA文库。以牛生长激素基因为探针,筛选出7个阳性菌落,经电泳鉴定有两个菌落(1号和2号)含有大于500bp的插入片段。1号克隆经酶切图谱、southeTn blot 杂交及序列分析证实含有牛生长激素的编码序列。     

鲤鱼,鲫鱼和鲤鲫移核鱼DNA的复性动力学研究与比较

才文报道鲤鱼、鲫鱼DNA复性动力学研究结果。它们均由快、中、慢速复性3个组份构成。鲤鱼DNA中Cot<1×10(-1)的复性组份占7.5％,1×10(-1)1×10~2的复性组份占75％;鲫鱼DNA中Cot<5×10~(-1)的复性组份占22％;5×10~(-1)1×10~2的复性组份占70％。它们都没有明显百分数的迥折序列组份;快速复性组份的拷贝数低于10~6,相当于中度重复序列1;中、慢速复性组份则分别为中度重复序列Ⅱ和原拷贝序列。在快速复性部份,鲤鱼与鲫鱼之间表现出较大差异。此外,本文还就鲤鱼和鲫鱼的DNA复性动力学与鲤鲫移核鱼(cyc(?))F_3进行了比较。鲤鲫移核鱼DNA的复性动力学特征与其细胞核供体鱼(即鲤鱼)是相似的。这说明异源细胞核与胞质的结合没有导致核内DNA基因组结构出现明显变化。     

经济动物的基因工程

基因工程的研究在我国已经列入重点规划之中,是当代世界生物学研究中既有理论价值又有实践意义的一项研究工作,我国在1982年至1986年中预备进行乙型肝炎疫苗和口蹄疫苗的研制和初试。1984年7月1日在北京成立了中国生物工程开发中心顾问委员会,说明我国对产物工程的研究已经提到议事日程上来了。我们于1984年开始进行牛的生长激素基因克隆,并利用这些克隆基因在培育家畜中发挥它促生长及促乳的作用,从而培育经济动物的新品种。     

鸡胚凝集因子在发育过程中的活性变化

人们认为,细胞表面含碳水化合物的蛋白质可能在细胞相互作用中起着重要作用。从脊椎动物中分离出凝集因子以后(Teichberg et al., 1975;Nowak et al., 1977),许多研究表明这类凝集因子是与膜相结合的。这些发现支持了人们原先的设想。Beyer等人(1979;1980)从成体鸡肠中分离出一种结合乳糖的凝集因子,这种凝集因子似乎存在于粘液分泌小粒之中。1980年Pitts和Yang又从鸡胚肾脏中分离出一种结合乳糖的凝集因子,它可能是一种外周蛋白质。尽管他们的实验证明了成体鸡肾和肠这两种器官,同视网膜、肝脏、肌肉、心脏、脑和脊髓一样,存在着结合乳糖的凝集因子。但凝集因子在这两     

第三章 作为克隆载体的质粒

质粒的基本性质 质粒被广泛用作克隆载体。在本文讨论质粒的应用之前,回顾质粒的一些基本性质是合适的。质粒是复制子,能在染色体外稳定地遗传。应该强调的是,染色体外的核酸分子不一定是质粒。因为上面的定义含意是:遗传的同质性、单体的分子大小恒定、有能力独立于染色体而进行复制。因此,在巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)中发现的     

山羊(Capra hircus)重构胚与再重构胚早期发育的研究

选择山羊8细胞期到桑椹胚期的正常胚胎或重构胚的卵裂球,或选择胚泡期胚胎的内细胞团细胞作为供核,并以LRH注射后26—28h的去核成熟卵球作为受体,制备重构胚或再重构胚,琼脂糖包埋,植入山羊输卵管内,体内培养4—6天发育结果表明:不同发育时期(8细胞期至胚泡期)的正常胚胎细胞核或重构胚细胞核中,至少有部分细胞核均保留着发育的全能性,这些细胞核在母系基因表达产物的调控下,实现重新编程,启动并完成正常发育的全过程。     

绿色木霉纤维素酶CBHⅡ基因的结构研究

实验经限制性酶切和双向Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交将重组质粒ｐＣＢＨＩＩ－１４的１４ｋｂ外源片段上的绿色木霉纤维素酶ＣＢＨＩＩ基因定位于４．４ｋｂ的ＥｃｏＲＩ片段上,将该片段克隆于质粒ｐＵＣ１９,获得重组质粒ｐＣＢＨＩＩ。通过限制性分析构建了ｐＣＢＨＩＩ上４．４ｋｂＥｃｏＲＩ片段的物理图谱。在此基础上用质粒制作该片段的亚克隆,采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定了含绿色木霉纤维素酶ＣＢＨＩＩ基因的４０７４ｂｐ的ＤＮＡ序列,由ＧＴ－ＡＧ规则和ｃＤＮＡ序列推知该结构基因由４个外显子和３个内含子组成,总长１６１３ｂｐ,５′端存在与一般真核基因类似的两个特征性调控序列,但３′端不存在真核基因通常具有的特征序列而存在功能未明的短重复序列和嘧啶富集区。并对纤维素酶基因间的同源性和可能的功能作了初步的探讨。     

尖体注射导入的人生长激素融合基因在小鼠乳腺中的暂态表达

以牛asl－酪蛋白基因的5′端及上游区3．4kb和3′端及下游区3．5kb作为调控元件,以人生长激素基因作为报告基因构建了融合基因,通过乳腺,心脏注射到小鼠体内,利用放射免疫分析方法（RIA）在泌小鼠的乳汁中检测到了表达的人生长激素,表明融合基因的构建是正确的。并由此建立了通过靶组织注射结合心脏注射对融合基因的构建无地自容伯快速简便方法,其中通过心脏注射而于乳腺获得特异性表达的实验结果尚未见报道。     

转基因猪外源生长激素基因的定位研究——非同位素标记染色体原位杂交技术

近几年来发展起来的染色体原位杂交技术是进行基因定位研究的重要手段。它为进一步进行基因定点整合研究提供依据。本文采用非同位素标记染色体原位杂交技术对经显微注射得到的转基因猪进行了内源和外源猪生长激素(PGH)基因在染色体上定位的研究。 用BhlI对pSMTPGH注射基因(本室制备)进行单酶切,选取3.5kb片段以Dig进行标记。为了提高灵敏度,我们采用了胶体金标记抗体技术并结合使用银增加试剂。利用染色体的组型分析,对杂交点的分布进行了统计学分析,发现内源PGH基因位于12p~(11),与国外Thomsen,P.D.等报道的一致。插入的外源PGH基因呈随机分布,但对某一转基因猪来说,外源基因的插入是集中在某一染色体上。这一结果的发现为进行转基因猪外源基因定点整合提供了依据,也为研究外源基因整合位点和转基因猪表观性状的关系准备了条件。